血型鉴定抗体筛选交叉合血

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,血型鉴定抗体筛选交叉合血,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第1页,试验内容,血型判定,抗体筛选,交叉配血,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第2页,血型判定,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第3页,目标,掌握红细胞,ABO,血型及,Rh,血,型判定,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第4页,原理,ABO,血型判定：依据红细胞上有没有,A,抗原或（和）,B,抗原，以及血清中有没有抗,A,及抗,B,，能够将血型分为,A,型、,B,型、,AB,型、,O,型四种，利用红细胞凝集试验经过正定型、反定型准确判定,ABO,血型。,Rh,血型判定：,IgM,型盐水抗,D,试剂能够与,D,阳性红细胞在盐水介质中形成肉眼可见凝集。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第5页,原理,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第6页,试剂,抗,A,及抗,B,血清（商品试剂）,5%A,型和,B,型红细胞（试管法）,10%A,型和,B,型红细胞（玻片法）,IgM,型盐水抗,D,试剂,标本,抗凝静脉血,EDTA-K2,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第7页,红细胞,ABO,血型判定（试管法正定型）,标识两支洁净试管,-A,和,-B,在标识为,-A,试管中加,1,滴抗,A,试剂。,在标识为,-B,试管中加,1,滴抗,B,试剂。,在每个试管中各加入,5%,受检者红细胞悬液,(1,份压积红细胞,+19,份,0.9%,盐水,),轻轻混匀，,1000g,离心,1,分钟。,检验上清液是否有溶血。,轻轻重悬细胞扣，检验凝集。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第8页,红细胞,ABO,血型判定（试管法反定型）,标识两支洁净试管,Ac,和,Bc,每管加入,2,滴受检者血清。,在标识,Ac,试管中加入,1,滴,5%A,型试剂红细胞。,在标识,Bc,试管中加入,1,滴,5%B,型试剂红细胞。,轻轻混匀，,1000g,离心,1,分钟。,检验上清有没有溶血。,轻轻重悬细胞扣，检验凝集。,判断并统计结果。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第9页,红细胞,ABO,血型判定（玻片法）,在标识玻板上分别加一滴抗,A,、抗,B,。,各加一滴,10%,受检者红细胞悬液,(1,滴压积红细胞,+9,滴,0.9%,盐水,),轻轻混匀，室温放置,2-15,分钟。,观察并统计结果：凝集为阳性结果，不凝集为阴性结果，对结果有怀疑，应用试管法重新试验。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第10页,红细胞,Rh,血型判定,试管法,标识一支,7512mm,试管,加入抗,D,血清,1,滴，,加,1,滴,5%,待检细胞。,轻轻混匀，,1000g,离心,1,分钟，或,3000r/min,，,15,秒。,检验是否溶血，然后轻轻重悬细胞扣，检验凝集,玻片法,在玻板上标识待检红细胞编号。,加入抗,D,血清,1,滴于标识玻片中。,将,35,45%,待检细胞,1,滴滴入玻片并混匀。,室温放置,2,分钟左右观察结果。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第11页,结果判读（,ABO,血型判定）,正定型,反定型,血型,抗,A,抗,B,A,细胞,B,细胞,O,细胞,-,-,+,+,-,O,+,-,-,+,-,A,-,+,+,-,-,B,+,+,-,-,-,AB,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第12页,结果判读（,Rh,血型判定）,阳性对照,阴性对照,待检细胞,结果,+,-,+,+,+,-,-,-,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第13页,汇报方式,XXX,型，,Rh+/-,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第14页,注意事项,玻片、试管都要标识！,A,及,B,标准血清绝对不能相混,不要依靠用染料颜色标识血清。,所用玻片、试管试验前必须清洗洁净，以免出现假凝集现象。,红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，,普通先加血清，再加红细胞悬液，便于核实是否漏加血清。,离心时间、速度严格要求。,要在光亮背景下观察凝集,可使用光镜检验小凝集,同时应注意观察凝集强度，有利于,A,、,B,亚型发觉，观察后马上统计。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第15页,抗体筛选,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第16页,目标,掌握抗体筛选试验方法,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第17页,盐水试验法,白蛋白介质法,低离子强度介质法（,LISS,）,酶技术,抗球蛋白试验,聚凝胺促凝技术,PEG,促凝技术,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第18页,原理,抗人球蛋白法：,IgG,类抗体，因为其分子量小，与红细胞结合以后在盐水介质中不发生肉眼可见凝集，称为不完全抗体。但在加入抗,-IgG,抗体后，以其搭桥则可出现凝集。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第19页,试剂,抗球蛋白试剂,阳性对照血清,阴性对照血清,O,型红细胞,生理盐水,标本,：,抗凝静脉血（,EDTA-K2,）,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第20页,操作步骤,在标识好试管中各加入两滴血浆和一滴,5%,O,型红细胞，混匀。,于,37,0,C,孵育一小时。,用生理盐水洗涤红细胞,4-6,次，完全倾尽末次洗涤盐水。,向得到干细胞扣中加入,1-2,滴抗球蛋白试剂。,1000rpm,，离心,1,分钟。检验凝集并统计结果。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第21页,结果判读,加入抗球蛋白试剂后，如红细胞出现凝集或溶血，则结果为阳性。,加入抗球蛋白试剂后结果为阴性，而加入直抗阳性对照细胞后呈阳性反应，则结果为阴性。如加入直抗阳性对照细胞后呈阴性反应，则结果不可靠，必须重复检测。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第22页,操作步骤,阳性对照管,待检管,阴性对照管,IgG,型抗,D,1,待检血清,2,阴性对照血清,2,5%O,型试剂红细胞,1,1,1,在标识好试管中按下表加入试剂及血清,。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第23页,ABO,血型判定 不规则抗体筛选,玻片法（正定型）,试管法,（正定型,反定型）,盐水法,聚凝胺法,抗人球法,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第24页,微柱凝集试验技术,达亚美微量定型系统凝胶测试法,基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。当抗原抗体反应，抗人球试验时血细胞发生凝集。离心时凝集块不能经过凝胶间隙而在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可经过凝胶间隙而在凝胶底部，呈阴性反应。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第25页,DiaMed,卡法结果判读,4,在凝胶柱顶端形成单一层凝集细胞。,3,凝集层主要位于凝胶柱上,1/3,。,2,凝集位于整个凝胶柱，底部仅有较少细胞。,1,凝集层位于凝胶柱下,1/3,。,凝胶中细胞没有凝集或溶血视为阴性。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第26页,思索题,1.,红细胞,ABO,血型判定正反定型不一致原因,2.,造成,Rh,血型判定出现假阳性和假阴性原因,3.,抗体筛选临床意义,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第27页,交叉配血,Cross Match,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第28页,目标,掌握交叉配血试验方法,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第29页,原理,盐水法,检验供受者之间有没有,ABO,血型不合。用于抗体筛选阴性和不一样血型骨髓移植患者输血。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第30页,原理,凝聚胺法,凝聚胺是一个高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，能够中和红细胞表面负电荷，使红细胞之间距离降低，能引发正常红细胞可逆性非特异性凝集。假如是抗体致敏红细胞被凝聚胺凝集，则凝集不可逆。离心后，加入重悬液，凝聚胺凝聚作用可经过加入枸橼酸钠而中和，使正常红细胞凝聚解散，而抗体引发凝集依然存在。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第31页,试剂,抗,A/,抗,B,标准血清,A1/B,反定型细胞,献血者血清或血浆以及,5%,红细胞悬液,受检者血清或血浆以及,5%,红细胞悬液,BASO polymatching,试剂盒,标本,：,抗凝静脉血（,EDTA-K2,）,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第32页,操作步骤（盐水法）,标识为主侧试管中加入受者血清或血浆,2,滴和供者红细胞悬液,1,滴。,标识为次侧试管中加入供者血清或血浆,2,滴和受者红细胞悬液,1,滴。,混匀，马上,1000g,离心,1,分钟。,检验是否溶血，轻轻摇动试管检验凝集。,复查献血员,ABO,血型，患者,ABO/Rh,血型。,判断并统计结果。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第33页,操作步骤（凝聚胺法）,取试管,2,支，标识主次侧,在主侧管中加入病人血清或血浆,2,滴，加供血者,5%,红细胞悬液,1,滴。,次侧管加供血者血清或血浆,2,滴，加入病人,5%,红细胞悬液,1,滴。,各加,LIM,液,0.7ml,，混匀，再各加,polybrene(,凝聚胺,),溶液,2,滴，并混合均匀。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第34页,操作步骤（凝聚胺法）,3400rpm,离心,10,秒，倒掉上清液，管底残留约,0.1ml,液体。,轻轻摇动试管，目测红细胞有没有凝集，如无凝集，则必须重作。,最终加入悬浮液（,Resuspending,）,2,滴，轻轻转动试管混合并观察结果。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第35页,结果判读,假如,30,秒内凝集解散，代表是凝聚胺引发非特异性凝集，配血结果相合；,如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合特异性反应，配血试验不相合。,如反应可疑，可深入倒在玻片上用显微镜观察。,血型鉴定抗体筛选交叉合血,第36页,