紫外分光光度法ppt课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,学习目标,复习提问,新课大纲,新课内容,本课小结,课后习题,第一节 紫外分光光度法,第六章光谱分析法,第三模块 光谱检测技术,第一节 紫外分光光度法第六章光谱分析法第三模块 光谱检,1,学习目标,知识目标,理解紫外-可见分光光度法的基本原理；掌,握吸收定律和吸收系数的含义；,掌握紫外-可见分光光度计的基本类型与结,构；掌握紫外-可见分光光度法的主要应用。,学习目标知识目标理解紫外-可见分光光度法的基本原理；掌,2,技能目标,能使用紫外分光,光度计测定药物的含量,技能目标能使用紫外分光,3,什么是非水滴定？有什么优点？,举例说明碘量法测定的具体操作及注意事项？,复习提问,什么是非水滴定？有什么优点？举例说明碘量法测定的具体操作及注,4,课程大纲,本,节,课,内,容,紫外分光光度法概述及基本原理,紫外分光光度计主要部件及分类,。,应用示例,课程大纲本紫外分光光度法概述及基本原理紫外分光光度计主要部件,5,朗伯比尔定律：,式中：A为吸收度；T为,透光率；E为吸收系数；,c为溶液浓度；l为光路长,度。,一、概述及基本原理,紫外-可见分光光度法,是通过被测物质在紫,外-可见光区的特定波,长或一定波长范围内,光的吸收度，对该物,质进行定性和定量分,析的方法。,使用200760nm,波长范围的光。,主要用于药品的鉴,别、检查和含量测定。,概述,基本原理,朗伯比尔定律：一、概述及基本原理概述基本原理,6,E,入射光为单色光,溶液是稀溶液,该定律适用于固体、,液体和气体样品,在同一波长下，,各组分吸光度具有,加和性,应用：多组分测定,1）,摩尔吸光系数,：,在一定下，C=1mol/L，,L=1cm时的吸光度,2）,百分吸光系数,E：,在一定下，,C=1g/100ml，L=1cm时,的吸光度,3）两者关系,Lamber-Beer定,律的适用条件,吸光系数两,种表示法,E入射光为单色光1）摩尔吸光系数：Lamber-Beer,7,单色器,光源,检测器,吸收池,信号显,示系统,二、仪器主要部件及分类,紫外-可见分,光光度计基本结构,由光源、单色器、吸收池、检测器、,信号显示系统五个部分构成。,主,要,部件,单色器光源检测器吸收池信号显二、仪器主要部件及分类紫外-可见,8,1.光源:采,用氘灯和钨卤灯,常用标准氘光源：钨灯最适宜的,使用波长范围为3201000nm。,氘灯是最常用的紫外,光光源，它能发出光的波,长范围一般为190400nm，,使用波长范围一般为,190360nm，它的发光,强度和灯的使用寿命,比氢灯增加23倍。,1.光源:采,9,光源,对光源的基本要求是应在,仪器操作所需的光谱区域,内能够发射连续辐射，有,足够的辐射强度和良好的,稳定性，而且辐射能量随,波长的变化应尽可能小。,分光光度计中常用的光源,有,热辐射光源和气体放电,光源两类。,热辐射光源用于可见光区，如钨丝灯和,卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，,如氢灯和氘灯。,光源对光源的基本要求是应在分光光度计中常用的光源热,10,在近紫外区测定时常用氢灯和氘灯。它们可在160 375,nm范围内产生连续光源。,氘灯,的灯管内充有氢的同位素,氘，它是紫外光区应用最广泛的一种光源，其光谱分布与,氢灯类似，但光强度比相同功率的氢灯要大35倍。,紫外分光光度法ppt课件,11,入射狭缝、准直镜、色散元件、聚焦透镜和出射狭缝组成,(色散元件:棱镜和光栅),2.单色器,:,2.单色器:,12,1.入射狭缝 2.准直透镜 3.棱镜,4.聚焦棱镜 5.出射狭缝,棱镜单色器原理,1.入射狭缝 2.准直透镜 3.棱镜棱镜单色器原理,13,3.光栅,光栅分为,透射光栅和反射光栅,，,常用的是反射光栅。反射光栅又,可分为平面反射光栅（或称闪耀,光栅）和凹面反射光栅。,光栅由玻璃片或金属片制成，,其上准确地刻有大量宽度和距离,都相等的平行线条（刻痕），可,近似地将它看成一系列等宽度和,等距离的透光狭缝。,光栅是,一种多狭缝部,件，光栅光谱的产,生是多狭缝干涉和,单狭缝衍射两者联,合作用的,结果。,3.光栅 光栅分为透射光栅和反射光栅，光栅是,14,紫外分光光度法ppt课件,15,4.吸收池,吸收池用于盛放分析试样，一般有,石英和玻璃,材料两种。石英池适用于可见光区及紫外光区，玻璃吸收池只能用于可见光区。,为减少光的损失，吸收池的光学面 必须完全垂直于 光束方向,。在 高精度的分析测定中（紫外区尤其重要），吸收池要挑选配对。因为吸收池材料的本身吸光特征以及吸收池的光程长度的精度等对分析结果都有影响。,4.吸收池 吸收池用于盛放分析试样，一般有石英和,16,5.检测器,功能：检测信号、测量单色光透过溶液后光强度变化的一种装置。,常用：,光电池、光电管和光电倍增管,等,硒光电池,对光的敏感范围为300800nm，其中又以500 600nm最为灵敏。这种光电池的特点是能产生可直接推动微安表或检流计的光电流，但由于容易出现疲劳效应而只能用于低档的分光光 度计中。,光电管,在紫外-可见分光光度计上应用较为广泛。,光电倍增管,是检测微弱光最常用的光电元件，它的灵敏度比一般的光电管要高200倍，因此可使用较窄的单色器狭缝，从而对光谱的精细结构有较好的分辨能力。,功能：检测信号、测量单色光透过溶液后光强度变化的一种装置。光,17,6.信号显示系统,它的作用是放大信号并以适当方式指示或记,录下来。常用的信号指示装置有直读检流计、,电位调节指零装置以及,数字显示,或自动记录,装置等。很多型号的分光光度计装配有微处,理机，一方面可对分光光度计进行操作控制，,另一方面可进行数据处理。,6.信号显示系统它的作用是放大信号并以适当方式指示或记,18,紫外分光光度法ppt课件,19,紫外分光光度法ppt课件,20,紫外分光光度法ppt课件,21,紫外分光光度法ppt课件,22,紫外-可见分光光度计的类型,1.单光束分光光度计,2.双光束分光光度计,经单色器分光,后的一束平行光，,轮流通过参比溶液和样,品溶液，以进行吸光度的测,定。这种简易型分光光度计结,构简单，操作方便，维修容,易，适用于常规,分析。,经单色器,分光后经反射,镜分解为强度相等,的两束光，一束通过参比,池，一束通过样品池。光度计,能自动比较两束光的强度，,此比值即为试样的透射比，,经对数变换将它转换成,吸光度并作为波长的函,数记录下来。,紫外-可见分光光度计的类型 1.单光束分光光度计 2.,23,双光束分光光度计一般都能自动记录吸收光谱曲线。,由于两束光同时分别通过参比池和样品池，还能自动,消除光源强度变化所引起的误差,。,3.双波长分光光度计,由同一光源发出,的光被分成两束，分,别经过两个单色器，得到,两束不同波长,（,1和,2）的单色,光；利用切光器使两束光以一定的,频率交替照射同一吸收池，然后,经过光电倍增管和电子控制系,统，最后由显示器显示出,两个波长处的吸光,度差值A,双光束分光光度计一般都能自动记录吸收光谱曲线。3.双波长,24,对于,多组分混合物,、混浊试样（如生物组织液）分析，以及存在背景干扰或共存组分吸收干扰的情况下，利用,双波长分光光度法,，往往能提高方法的灵敏度和选择性。利用双波长分光光度计，能获得导数光谱。,通过光学系统转换，使双波长分光光度计能很方便地转化为单波长工作方式。如果能在,1,和,2,处分别记录吸光度随时间变化的曲线，还能进行化学反应动力学研究。,对于多组分混合物、混浊试样（如生物组织液）分析，以,25,751-GD型紫外分光光度计,751-GD型紫外分光光度计,26,SF2-752型紫外可见分光光度计,特点：,采用全息闪耀光栅单色器，波长精度高，,单色性好、杂散光低等优点。,采用3.5位LED数字显示，T.A.C直读。,SF2-752型紫外可见分,27,紫外可见分光光度计754,自动调整“0”和调整“100”,具有超群的测量读数重现性和稳定性.,紫外可见分光光度计754 自动调整“0”和调整“100”,28,紫外760,紫外760,29,紫外分光光度法ppt课件,30,紫外分光光度法ppt课件,31,对比吸收光谱特征数据,对比吸收度（或吸收系数）的比值,对比吸收光谱的一致性,三、定性定量测定,定性方法,1.鉴别:,2.杂质检查,:限量检查,对比吸收光谱特征数据 三、定性定量测定定性方法1.,32,七、含量测定方法,（1）对照品比较法,按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对,照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定,量的100%10%，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长处,测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后，按下式计算供试品,中被测溶液的浓度，再计算含量。,A样品/A对照c样品/c对照,c样品A样品c对照/A对照,式中：A为吸收度值；c为测试液浓度（以mg/ml计）。,七、含量测定方法,33,（2）吸收系数法,按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定,其吸光度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本,法测定时，吸收系数通常应大于100，并注意仪器的校正和检定。,示例,维生素B12的水溶液在361nm处的E值是207，盛于1cm,吸收池中，测得溶液的吸收度为0.414，则溶液浓度是多少？,紫外分光光度法ppt课件,34,应用示例,检查:吸收度：取本品加水,制成每1ml中含有1.88mg的,溶液，在280nm的波长处测,定，吸收度不大于0.1，在2,641nm处，最大吸收度应,在0.800.88之间。,鉴别：取本品加氢氧化钠,制成1ml含20g的溶液，在,287 1nm处有最大吸收，,其吸收度为0.49。,1.青霉素钾,2.甲氧苄氨嘧啶,应用示例检查:吸收度：取本品加水鉴别：取本品加氢氧化,35,鉴别,：,取本品加盐酸制成,1ml中含0.5mg的溶液，在,253 1nm与258 1nm,处有最大吸收。,鉴别：,鉴别：取本品加盐,酸制成1ml含15g的溶液，,在276 1nm处有最大吸,收，其吸收度为0.45。,3.盐酸苯海拉明,4.二甲氧苄氨嘧啶,鉴别：取本品加盐酸制成鉴别：鉴别：取本品加盐3.盐,36,检查:,加水稀释成每1ml中,含有50mg的溶液，在420,处测定，吸收度不得过,0.06。,鉴别：,加水稀释成每1ml,中含有25g的溶液，在,361,1nm,与550,1nm,处测定有最大吸收，吸收,度比值为3.153.45。,5.维生素C注射液,6,.,维生素B12注射液,检查:加水稀释成每1ml中鉴别：加水稀释成每1ml5,37,杂质吸收度：本品适量加,乙醇成每1ml有0.5mg的溶,液，在320nm的吸收度不,得过0.05。,杂质吸收度：本品适量加盐,酸的甲醇溶液制成每1ml有,10mg的溶液，在490nm的,吸收度不得过0.12。,7.吡喹酮,8.盐酸脱氧土霉素,杂质吸收度：本品适量加杂质吸收度：本品适量加盐7.吡喹酮8.,38,六、含量测定,1.地塞米松磷酸钠,2.尼可刹米注射液,3,.,扑热息痛、扑尔敏、可的松,加水稀释成每1ml中含有20g的溶液，在242,1nm,处测定吸收度，按吸收系数为290计算，即 得。,加硫酸液适量稀释，在263,1nm,处测定吸收度，按吸收系数为292计算，即 得。,名称,测法,六、含量测定1.地塞米松磷酸钠2.尼可刹米注射液3.扑热息痛,39,本课小结,基本原理,仪器主要部件,主要应用,吸收定律即溶液的吸光度与溶液的浓度和光程的乘积成正比,光源钨灯或碘钨灯、氢灯或氘灯,单色器棱镜或光栅,定性鉴别、杂质检查及含量测定,紫外可见分光光度法,吸收池玻璃或石英吸收池,检测器光电池、光电管、光电倍增管及二极管阵列检测器,信号显示系统,本课小结基本原理仪器主要部件主要应用吸收定律即溶液的吸光度与,40,课后习题,什么是吸收光谱？,什么是朗伯比尔定律？,摩尔吸收系数、百分比吸收系数？,紫外可见分光光度计的组成？,常用的检测器有哪几种？,什么是单、双光束分