鼠疫病原学检验的实验室质量控制课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Ningxia Center for Disease Control and Prevention,宁夏疾病预防控制中心,2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,鼠疫病原学检验的实验室质量控制,鼠疫病原学检验的实验室质量控制,1,（优选）鼠疫病原学检验的实验室质量控制,（优选）鼠疫病原学检验的实验室质量控制,2,实验室质量控制的定义,实验室质量控制的定义,3,实验室质量控制的定义,质量控制(QualityContro,l Q.C),是监视全过程,排除误差,防止变化,维持标准化现状的一个管理过程。,鉴于鼠疫细菌学检验的重要性,有必要对其进行规范化管理。,鼠疫细菌学检验质控(Quality Control of testYersinia Pestis),是鼠疫微生物学实验室为了保证检验结果实事求是地反映客观存在而建立的操作程序体系。,实验室质量控制的定义质量控制(QualityContro,l,4,鼠疫病原学检验的质量控制方法,鼠疫病原学检验的质量控制方法,5,室内质控(Internal Quality Control IQC)是指一个实验室内部对所有影响质量的各个环节进行系统控制，是由实验室内部制定并实施的，是质量保证的核心和基础。目的是控制本实验室常规工作的精密度，提高常规工作前后的一致性。,室间质控(External Quality Assessment简称EQA)简称室间质评。室间质控由上级业务单位采用一系列的办法连续地、客观地评价各实验室的试验结果，并发现室内质控不易发现的不准确性，了解各实验室之间结果的差异，并帮助校正，使具有可比性，这种评价是一种回顾性评价。,室内质控主要监测试验结果的精密度，而室间质控主要控制实验结果的准确度，不互相替代，参与室间质控的试验室应先做好室内质控。,鼠疫病原学检验的质量控制方法,室内质控(Internal Quality Control,6,鼠疫病原学检验的质量控制方法,人员与组织管理,仪器设备的质控,疑似鼠疫材料的采取、保存和运输,培养基、染色液、试剂盒等的质量控制,鼠疫细菌检验程序及结果判定,报告卡的书写、疫情上报及交换,室内质控,鼠疫病原学检验的质量控制方法人员与组织管理仪器设备的质控疑似,7,室内质控,扎实的基础教育和专业知识,职业道德和高度的责任心,质量管理体系,各实验室制定SOP,专业化的技能培训,继续教育,人员与组织管理,室内质控扎实的基础教育和专业知识职业道德和高度的责任心质量管,8,室内质控,性能试验,正确贮存,无菌试验,诊断试剂盒(噬菌体等),培养基量,pH值,试剂的质量控制,室内质控性能试验正确贮存无菌试验诊断试剂盒(噬菌体等)培养,9,室内质控,生物安全柜,显微镜,高压锅,离心机,培养箱,冰箱,仪器设备,室内质控生物安全柜显微镜高压锅离心机 培养箱冰箱仪器设备,10,鼠疫病原学检验的质量控制方法,设立参比实验室,发质控物进行检查评价,定期举办各级培训班,派观察员到实验室进行检查指导,室间质控方法,鼠疫病原学检验的质量控制方法设立参比实验室发质控物进行检查评,11,室间质控的一般检查项目,实验室的布局,SOP制订及执行情况,实验室安全防护和污染物处理,室内质控执行情况及各种纪录,发放模拟标本(菌种)，规定时间内反馈至上级业务单位,以pH值、软硬度、鼠疫菌生长数量(活菌数)等为综合指标对培养基进行质控和用已知菌对噬菌体进行质控,盲点试验，模拟标本混入监测标本常规测定,对结果进行评价，分析错误原因,室间质控的一般检查项目实验室的布局,12,鼠疫病原学检验方法,鼠疫病原学检验方法,13,鼠疫病原学检验方法,染色镜检,培养特性,噬菌体裂解,动物实验,基因检测,鼠疫病原学检验方法染色镜检,14,鼠疫病原学检验方法,鼠疫病原体,发现：1894年，在香港，日本学者北里柴三郎和法国学者亚力山大耶尔森二氏。,分类位置：肠杆菌科耶尔森菌属。,生物学特性,分子生物学特性：6MD、45MD、65MD三种质粒；目前已知IS100、IS285、IS1541、IS1661四种插入序列，分布于鼠疫菌质粒的染色体基因组中。,毒力决定因子:F1抗原，VWa抗原，Pstl，Pgm,分型:古典、中世纪、东方、田鼠变种四个生物变种；5个群（A、B、C、D、E群），21个生态型。,鼠疫病原学检验方法鼠疫病原体,15,染色镜检,革兰氏染色,美兰染色,典型的鼠疫菌是短而粗、两端钝圆、两极浓染的椭圆形小杆菌，革兰氏染色阴性。,染色镜检革兰氏染色典型的鼠疫菌,16,细菌培养,细菌培养,17,病原学,在普通培养基上2830经24h，肉眼可见形成薄薄一层淡灰色小菌落,圆形，有光泽，中心稍突起。透过光线呈灰白色或淡青色，菌落较干燥，镜下：中央隆起中心发暗，有粗糙颗粒（黄褐色）周围有薄而透明的花边，呈锯齿状。,培养特性,病原学在普通培养基上2830经,18,Y.P,EV,Y.E,耶尔森菌属三个致病菌形态比较,Y.PEVY.E耶尔森菌属三个致病菌形态比较,19,噬菌体裂解实验,2830 24h噬菌带明显,噬菌体裂解实验2830 24h噬菌带明显,20,发放模拟标本(菌种)，规定时间内反馈至上级业务单位,观察1-9天，可以从感染动物体内检出鼠疫菌为阳性。,鼠疫病原学检验的质量控制方法,C)是监视全过程,排除误差,防止变化,维持标准化现状的一个管理过程。,鉴于鼠疫细菌学检验的重要性,有必要对其进行规范化管理。,鼠疫病原学检验的质量控制方法,引物（2对各1ul）,室间质控(External Quality Assessment简称EQA)简称室间质评。,室内质控(Internal Quality Control IQC)是指一个实验室内部对所有影响质量的各个环节进行系统控制，是由实验室内部制定并实施的，是质量保证的核心和基础。,鼠疫病原学检验的质量控制方法,分型:古典、中世纪、东方、田鼠变种四个生物变种；,质量控制(QualityContro,l Q.,观察1-9天，可以从感染动物体内检出鼠疫菌为阳性。,动物实验,发放模拟标本(菌种)，规定时间内反馈至上级业务单位观察1-9,21,鼠疫菌的基因检测,病,原,学,的,检,测,鼠疫菌的基因检测病,22,DNA提取,水煮法提取可疑鼠疫菌DNA,对于脏器标本，在强毒实验室以无菌手续取动物的各种脏器(心、肝、脾、肺)约1g，加入到等量生理盐水中，研碎，100水浴中煮沸10min，离心，取上清直接用作PCR模板,对于培养可疑鼠疫菌，在平板上刮取可疑鼠疫菌于装有500ul蒸馏水（生理盐水）的1.5ml离心管中，于沸水浴中煮10min，离心上清液中含有可疑鼠疫菌DNA作为PCR模板。,细菌基因组DNA提取试剂盒提取鼠疫菌基因组DNA,操作方法可根据试剂盒说明书进行操作。,鼠疫菌的基因检测,DNA提取鼠疫菌的基因检测,23,体系配制,PCR-buffer,dNTP,引物（2对各1ul）,Taq DNA聚合酶,模板,纯水,总体积25ul,2.5ul,2ul,4ul,1ul（2.5U),1ul,14.5ul,鼠疫菌的基因检测,体系配制PCR-bufferdNTP引物（2对各1ul）T,24,PCR扩增,93 5min,90 1min,60 1min,72 1min,30 cycle,72 10min,4 保存,鼠疫菌的基因检测,PCR扩增93 5min90 1min60,25,琼脂糖凝胶,鼠疫菌的基因检测,琼脂糖凝胶鼠疫菌的基因检测,26,拍照,鼠疫菌的基因检测,拍照鼠疫菌的基因检测,27,脏器悬液基因检测：,FI特异性片249bp，Pla特异性片456bp,脏器悬液基因检测：FI特异性片249bp，Pla特异性片45,28,菌悬液基因检测：,FI特异性片249bp，Pla特异性片456bp,菌悬液基因检测：FI特异性片249bp，Pla特异性片456,29,身体健康，学习进步！,身体健康，学习进步！,