资源描述
Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,使用,CD115,来鉴定和,分析,小,鼠血中,单核细胞,12,月,2,日,血中的单核细胞,白血球细胞,(leucocyte),：粒细胞和非粒细胞,粒细胞（多形核白细胞）,:,中性粒细胞，嗜碱性粒细胞，嗜酸性粒细胞,非粒细胞,（单核白细胞）,：淋巴细胞，单核细胞和巨噬细胞,背景介绍,G,Koenderman L et al.J Leukoc Biol 2000;68:58-64,背景介绍,纵向小鼠模型（,非致死,）,:,重要性：,可用于预测疾病风险的增加，,纵向评估病情的进展,需求：,观察小鼠模型个体在外界刺激或者药物反应中的,长期变化,困难：,每次可采集的小鼠血液样本,体积非常小,小鼠单核细胞标记,(,占血液中细胞总数,3%),CD11b,:,表达在多种细胞表面,（髓样细胞，,NK,细胞，活化的,T,细胞，,B,细胞,）,CD14:,表面表达量低或检测不到,常用,-,由此,需要建立有效的实验方案,建立小鼠纵向模型，需要一种流式细胞仪，,可检测,超微量,血液样品,同时又需保证,重复性,，数据准确,更加可行的单核细胞标记，用于,FACS:,CD115-,细胞表面标记本身具有稳定性,在检测微量血液样品体积时，测试结果具有一致性,提出的问题及实验的设计,VS,小鼠血样的采集,CD-1,雄性小鼠,大隐静脉取血（每次采样,0.5%,体重，,非致死方式,）,材料与方法,实验,1:,比较常用的小鼠单核细胞表面标记,(Guava easyCyte Mini),实验,2:,鉴定不同单核细胞表面标记的稳定性,A:,维持的时间长度,B:,不同的激光强度,(Guava EasyCyte Mini,20mW;Guava easyCyte 6HT-2L,40mW),C:,不同的抗凝剂,实验,3:,确定可用于检测的最小血样体积,(40,ul,、,20,ul,、,10,ul,、,5ul),结果,1,比较小鼠单核细胞的表面标记,（,CD115 vs CD11b,，,CD14,）,95%CD115,阳性细胞,:,共表达,CD11b+,85%CD115,阳性细胞,:,共表达,CD14+,如以,CD115,选取,细胞群,CD11b,及,CD14,阳性率 差异小,50%CD11b,阳性细胞,:,共表达,CD115,70%CD14,阳性细胞,:,共表达,CD115,如以,CD14,与,CD11b,选取,细胞群,CD115,阳性率 差异大,结果,1,比较小鼠单核细胞的表面标记,（,CD11b,，,CD14 vs CD115,）,95%CD115+:CD11b+,85%CD115+:CD14,使用,CD115+,设门选取细胞群,观察,CD11b,与,CD14,CD115,所选取的,细胞群,亦表现,在,CD11b,及,CD14,阳性区域,结果,1,比较小鼠单核细胞的表面标记,（,CD115,与,CD11b,，,CD14,）,鉴定单核细胞表面标记,CD115,的稳定性,-A:,维持的时间长度,0hr 2hr 4hr,CD115:,33%,降低,CD11b:,6.5%,降低,结果,2,easyCyte Mini:,20mW,easyCyte 6HT-2L:,40mW,更强的激光强度，更高的,gMFI,但信号的降低程度一致,(33%),结果,2,鉴定单核细胞表面标记,CD115,的稳定性,-,B,:,不同的激光强度,EDTA,4-8,度（,RT,）,更加稳定,结果,2,鉴定单核细胞表面标记,CD115,的稳定性,-,B,:,不同的抗凝剂,确定可用于检测的最小血样体积,单核细胞总量,:CD115+,经典单核细胞,:CD115,+,Gr-1,high,非经典单核细胞,:CD115,+,Gr-1,low,8000,6000,3500,2000,40,20,10ul:,差异性,10%,5ul:,每次取样，单核细胞分亚型检测时差异大,因此,10ul,不推荐！,用于分析单核细胞的亚型,结果,3,结论,细,胞表面标,记：选,择,CD115,抗,体,鉴定,本身虽具有不稳定性，但相比传统的表面标记选取单核细胞群更加准确,(,时间控制,EDTA,+,冰上,强的激光强度,),实验对象：小鼠纵向（,非致死,）模型,确保了非致死取血的可能性,据此建立小鼠模型可检测个体变化,(=0.5%,的小鼠体重：可两周取一次,=0.05%,的小鼠体重：每天取,),检测平台：,高性能超微量检测,的流式细胞仪,具有更高的激光强度：,在使用低表达的表面标记时，具有更好的灵敏度,使用超微量的样品：,实现建立小鼠纵向模型（,非致死取血模型,）的可能性,欢迎提问,谢谢！,
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