FDA药物相互作用研究指南课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,FDA,药物相互作用研究指南,药学部,卢进,2010.7.13,FDA药物相互作用研究指南药学部,介绍内容,简介,药物相互作用研究的背景知识,药物相互作用研究的一般策略,体内药物相互作用的实验设计,药物代谢酶的确认,CYP,酶抑制,/,诱导作用的体外评价,P-gp,底物和抑制剂的体外实验研究,介绍内容简介,简介,美国,FDA,药物评价和研究中心,(CDER),生物制品评价和研究中心,(CBER),2006,年,9,月,共同发布,药物相互作用研究,-,实验设计、数据分析及其在剂量调整和处方标签中的应用的指南,简介美国FDA药物评价和研究中心(CDER)生物制品评价和研,简介,指南为新药和新生物制品的研发者提供了：,药物代谢,药物转运,体内,体外,相互作用研究规范,简介指南为新药和新生物制品的研发者提供了：药物代谢药物转运体,简介,内容涉及药物相互作用研究的全过程,包括：,实验设计,研究人群或体外研究用细胞、微粒体,探针底物、抑制剂、诱导剂的选择,观察指标、样本量和数据统计分析，等,除了代谢性药物相互作用以外，还对,P,糖蛋白介导的药物相互作用的研究方法给予了详细的指导,（与,1999,年版本相比的增加内容）,简介内容涉及药物相互作用研究的全过程,1.,药物相互作用研究的背景知识,包括细胞色素,P450(CYP),酶在内的多个药物代谢酶都能被联用的药物所抑制,/,诱导,药物浓度发生巨大改变,影响药物安全性和有效性,1.药物相互作用研究的背景知识包括细胞色素P450(CYP),同时,药物转运蛋白,相关的药物相互作用受到越来越多的关注,如,:P-gp,、有机阴离子转运蛋白（,OAT,），等。,表一,：人类主要的转运蛋白和已知的底物、抑制剂、诱导剂,同时,药物转运蛋白相关的药物相互作用受到越来越多的关注,FDA药物相互作用研究指南课件,2.,药物相互研究的一般策略,根据体外代谢、已知和诱导实验的结果及体内代谢实验数据确定体内相互作用研究必要性。,流程图,2.药物相互研究的一般策略根据体外代谢、已知和诱导实验的结果,FDA药物相互作用研究指南课件,目前尚未发现,CYP2D6,酶被诱导的情况，而,CYP2C,CYP2B,和,P-gp,是可以和,CYP3A,一起被诱导的。,CYP3A,对所有已知的诱导剂,都很敏感,。,因此，考察受试药物能否能够诱导,CYP1A2,CYP2C8,CYP2C9,CYP2C19,和,CYP3A,时，只需要体外考察对,CYP1A2,和,CYP3A,酶的诱导情况即可。,若体外实验显示受试药物对,CYP3A,无诱导作用，那么就可以免做对,CYP2C,和,CYP2B,的诱导研究。,目前尚未发现CYP2D6酶被诱导的情况，而CYP2C,CYP,3.,体内药物相互作用实验设计,实验设计,研究群体,底物和作用药物的选择,给药途径,给药剂量,3.体内药物相互作用实验设计实验设计,3.1,实验设计,思路：比较底物（,S,）浓度在,有和没有,作用药物（,I,）时的变化情况。,随机交叉法,（先服用,S,后服用,S+I,组、先服用,S+I,组后服用,S,组）,单次序交叉法,（总是先服用,S,后服用,S+I,组、或相反）,平行设计,（一组服用,S,一组服用,S+I,）,3.1实验设计思路：比较底物（S）浓度在有和没有作用药物（I,设计方案时应该注意：,(1),如果实验需要达到稳态血药浓度而底物或作用药物和,(,或,),其代谢物的半衰期较长,此时,不能采用额外给予一个负荷剂量的方法,加快达到稳态。,(2),如果作用药物是一个快速可逆的抑制剂,其服用时间应该在测定当天服用底物前或同时服用,这样才能增加其敏感性。,对于基于作用机制的抑制剂,(,如红霉素,),在服用底物药物,前,服用作用药物可以,放大相互作用强度,。,如果作用药物,(,抑制剂或诱导剂,),的吸收受多种因素的影响,(,如胃,pH,值,),则需要采取适当的方法,控制,吸收方面的变化。,(3),为了排除由于食物、饮料、果汁等影响代谢酶和转运蛋白而引起误差,指南建议实验过程中要,严格控制饮食,。,设计方案时应该注意：,3.2,研究群体,一般是,健康受试者,。,在特定环境下，受试药物表现的治疗效果或者药效学效果,不在健康者身上出现,，此时要从,患者群体,中招募受试者。,药物相互作用的程度可能因受试者某个具体,CYP,酶的基因型不同而有所差异。,3.2 研究群体一般是健康受试者。,3.3,底物和作用药物的选择,表二：指南推荐的,CYP,酶底物。,3.3 底物和作用药物的选择表二：指南推荐的CYP酶底物。,FDA药物相互作用研究指南课件,“,鸡尾酒”模式,释义：在一个实验中受试者同时服用,多种,CYP,酶底物,。,实验设计需考虑下列因素：,(1),一种特定酶的底物对该酶具有较高的选择性,;,(2),底物之间没有相互作用发生,;,(3),受试者的数量达到统计学要求。,(4),药物浓度变化在安全范围内,;,(5),入选的,CYP,酶都参与药物代谢消除,;,(6),药物其他代谢途径或者不被抑制的途径的药物清除率低。,“鸡尾酒”模式,评价：,这种鸡尾酒实验的阴性结果可以免除对其中某个具体酶的进一步评价,然而,阳性结果则需要进一步的体内研究,。,鸡尾酒实验可比单个相互作用研究提供更多的信息,而结论的确定程度取决于药物其他不被抑制的代谢途径的清除率分数,(,清除率分数越小,确定程度越高,),。,如果单一的相互作用实验显示抑制效应可以导致严重的安全隐患,则不能进行鸡尾酒设计法。,评价：,3.4,给药途径,受试药物的给药途径应与,将来临床应用,的方式一致。,体内相互作用研究采取的给药方式取决于,未来上市剂型,。,3.4 给药途径受试药物的给药途径应与将来临床应用的方式一致,3.5,给药剂量,实验设计应尽可能将底物和作用药物相互作用的结果,最大化,，因此指南推荐作用药物（抑制剂,/,诱导剂）使用,最大安全剂量和最短给药间隔,。,当使用,低于,临床常用剂量的给药方案时，体内药物相互作用研究方案应在结果报告中,进行讨论,。,3.5 给药剂量实验设计应尽可能将底物和作用药物相互作用的,4.,药物代谢酶的确认,如果某个酶对药物的代谢量占整个药物消除量,25%,则可以确认此酶是药物的主要代谢酶。,将药物和肝细胞或肝切片一起孵育,然后通过色谱方法分析孵育介质和细胞内药物浓度,这种方法可以直接获得氧化、水解或基团转移形成的代谢物,提供平行代谢还是先后代谢的信息。,另一种方法是用,HPLC,来分析孵育介质。实验还需要优化介质中受试药物浓度和孵育时间。临床预期的稳态血药浓度可以用来指导体外实验介质中药物浓度的选择。,4.药物代谢酶的确认如果某个酶对药物的代谢量占整个药物消除,有三种方法可以很好地确认不同的,CYP,酶对药物代谢的贡献,:,(1),特定的化学物质或抗体作为特定酶的抑制剂,表,5,：,列出了常用的,特异性,化学抑制剂。,在确定代谢酶种类及其在药物代谢中的相对贡献时,药物的浓度要,K,m,值,而抑制剂的浓度既要保证其选择性又要保证足够的量,所以可以采用一系列的抑制剂浓度。当使用基于作用机制的抑制剂时,最好将抑制剂与酶预先孵育,15,30 min,。,有三种方法可以很好地确认不同的CYP酶对药物代谢的贡献:,FDA药物相互作用研究指南课件,(2),应用不同的人重组,CYP,酶,这种技术对研究单个,CYP,酶在整个药物代谢中的相对贡献的大小具有很高的价值,但不能代表人肝微粒体酶中的绝对的代谢比率。,(3),根据不同供体来源的,CYP,酶不同活性建立人肝微粒体库。,指南建议至少采用上述两种方法来确认药物代谢酶,(2)应用不同的人重组CYP酶,这种技术对研究单个CYP酶在,5.CYP,酶抑制作用的体外评价,Review:,K,i,：抑制率常数，抑制作用越强，此值越小,IC,50,：反应被抑制一半时抑制剂的浓度，越低表明抑制剂的抑制能力越强。,5.CYP酶抑制作用的体外评价Review:,5.CYP,酶抑制作用的体外评价,CYP,酶抑制剂体外实验设计,注意事项,:,(1)IC,50,测定时,在底物代谢率允许的情况下,尽量使底物的浓度低于其,K,m,值,使,IC,50,与其,K,i,值更具相关性,;,(2),肝微粒体蛋白浓度通常,1 gL,-1,;,(3),缓冲液的性质、,pH,对,Vmax,和,K,m,的影响显著,尽可能采用标准化的分析条件,;,(4),反应系统中最好控制底物或抑制剂的消耗不超过,10%,30%,但是对于,K,m,值很低的药物来说,控制反应体系底物消耗,10%,很困难,;,5.CYP酶抑制作用的体外评价CYP酶抑制剂体外实验设计注,(5),建议建立时间,-,产物形成量的线性关系,;,(6),建议建立酶量,-,产物形成量的线性关系,;,(7),因为某些有机溶剂具有酶诱导或抑制作用,溶剂的浓度都要,1%(v/v),最好,0.1%,实验应包括无溶剂对照和溶剂对照,;,(8),实验应该有一个已知抑制剂的阳性对照。,(5)建议建立时间-产物形成量的线性关系;,相互作用程度的模拟：,R=1+I/,K,i,（,I,代表作用部位抑制剂的浓度,K,i,是抑制常数）,指南推荐体内相互作用的可能性通过,I/,K,i,来推断,I,代表服用临床最大用药量后平均稳态的药物浓度,(,游离或结合的全部药物,),比值升高,产生相互作用的可能性增大。,相互作用程度的模拟：,尽管通过体外数据定量预测体内相互作用发生的可能性存在困难,但可以通过,同一个药物,对不同,CYP,酶,(CYP1A2,CYP2C8,CYP2C9,CYP2C19,、,CYP2D6,和,CYP3A),的,K,i,值进行筛选排序,体内实验从,I/,K,i,最大者,(,或者,K,i,最小者,),的,CYP,酶开始,如果实验显示体内,不存在,药物相互作用,其他的,I/,K,i,相对较小的,CYP,酶的体内实验就可以,不做,。,尽管通过体外数据定量预测体内相互作用发生的可能性存在困难,但,6.CYP,酶诱导作用的体外评价,实验设计中应包括一个公认的酶诱导剂作为阳性对照,来减小不同供体酶催化活性差异引起的误差。,表,7:,诱导剂选择列表,6.CYP酶诱导作用的体外评价实验设计中应包括一个公认的酶,FDA药物相互作用研究指南课件,实验中应注意：,(1),受试药物的浓度应该参考临床治疗剂量的血药浓度,至少包括,3,个涵盖治疗窗的筛选浓度,其中至少,1,个浓度要超过平均预期治疗浓度,1,个数量级,;,(2),与肝细胞共孵育,2,3 d,后,通过,CYP,特异的探针药物,(,参考指南推荐,),测定酶活性,;,(3),使用新鲜分离的或者冻存的肝细胞进行实验时,应该至少选择,3,份不同的供体以减少诱导实验中存在的个体差异。,实验中应注意：,评价,药物酶诱导,作用时,指南建议,:,(1),药物体外实验引起的酶活性的改变,40%,阳性对照结果时,可以认为药物具有酶诱导作用,需要进一步的体内研究,;,(2)EC,50,可以用来比较不同诱导剂诱导能 力的强弱,;,(3),指南认为,根据目前了解的,CYP,酶诱导的细胞学机制,如果一个诱导实验显示对,CYP3A4,酶没有诱导作用,可以推断此药物对,CYP2C8,CYP2C9,和,CYP2C19,也,没有,诱导作用。,评价药物酶诱导作用时,指南建议:,7.P-gp,底物和抑制剂的体外实验研究,考察药物是否是,P-gp,的底物或抑制剂,最常见的方法有哪些？,7.P-gp底物和抑制剂的体外实验研究考察药物是否是P-g,双向转运测定法,由于更直接,因此被作为标准的方法。,ATP,酶活性测定法和摄取,/,外排法,可以用于快速筛选,但是不能区分是底物还是抑制剂。如果药物透过性,(,膜扩散能力,),低,ATP,酶法和荧光定量法常常无法识别是否是,P-gp,的底物。,对高通透性化合物,双向转运测定法,也不适用。,双向转运测定法由于更直接,因此被作为标准的方法。,这些底物作为阳性