第四章 菌种保藏的原理和方法

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第四章 菌种保藏的原理和方法,提纲,菌种保藏的目的和意义,菌种保藏的原理和方法,斜面保藏法和穿刺保藏法,沙土管枯燥保藏法,真空冷冻枯燥保藏法,液氮保藏法,菌种复壮,种子扩大培养,菌种保藏的目的和意义,目的意义：保持优良菌种优良性状的稳,定，满足生产的实际需要。,优良菌种丧失退化的原因：,世代短、易变异、易污染、死亡。,菌种保藏机构：世界现有700多家专门机构。,措施：创造条件，使微生物处于休眠状,态，减少变异。,低营养、低温、枯燥、缺氧低代谢、低生长,菌种保藏的原理和方法,菌种保藏(Culture conservation)原理,挑选优良的菌种，最好是休眠体,创造有利于种子休眠的环境低温、枯燥、缺氧、避光、缺少营养,菌种保藏方法,斜面(Slant)低温保藏法传代培养，六个月,砂土管保藏法适用范围广，两年,冷冻枯燥(Freez-drying)保藏法长达十年,液氮超低温保藏法130C(Liquid nitrogen ultra-low temperature storage),一、斜面保藏法和穿刺保藏法,1.斜面保藏法：短期，3-6个月,范围：细菌、放线菌、酵母、丝状真菌,方法：适宜培养基适温培养冰箱保藏,4-5到期转种,优点：设备、方法简单,缺点：转代多，易变异；污染时机多,一、斜面保藏法和穿刺保藏法,2.穿刺保藏法：好气菌，6-12个月,方法：小试管或螺口管1琼脂培养基接种,针穿刺培养盖2-3mm无菌液体石蜡,冰箱保藏,范围：细菌、放线菌、丝状真菌,优点：范围较广，简便实用,缺点：不适用能利用石蜡为碳源的微生物；不同种类，,保藏期差异较大。,二、沙土管枯燥保藏法,范围：产孢子的放线菌和丝状真菌，形成芽孢,的细菌。,方法：沙、土分别洗净烘干、过筛80-100目,1-2 1沙土混合、装管1cm121灭菌2-3 次无,菌检验烘干备用孢子或悬液与沙土混匀真空抽,干封口熔封、石蜡封枯燥器中于冰箱5保藏,特点：设备简单，方法较繁，效果较好长，2,年，有长达10年，但范围受限制。,三、真空冷冻枯燥保藏法,方法：,1.安瓶管处理：8-10100-150mm，浸洗、烘干、,盖口；灭菌、枯燥60。,2.保护剂：减少冷冻枯燥对微生物的损伤，常用脱脂,牛奶、血清适当方法灭菌。,3.菌悬液制备：斜面加保护剂 制悬液吸入安管,4.冷冻枯燥：快冷至-15-30，抽真空到66.661Pa，15,分钟内；达13.3322Pa，可升温至20-30；真空封口。,5.安瓶管保藏：4-5 ，5-10年。样品含水量1-3,四、液氮保藏法,方法：,浓菌悬液加保护剂装安管0.2-1cm 封口,降温1/min至-25，入液氮罐，-150,-196 保藏。,取出时，应于温水38-40 中震荡1-2min。,特点：,效果好2-3年，长达9年，方法简单，,保藏对象广泛。,五、菌种复壮,原理与方法,单细胞别离复壮,改变培养条件复壮,六、种子扩大培养,种子(Seed)扩大培养：,将保藏的生产菌种从斜面试管(Tube slant)接出后，进行摇床(Shaker)培养及种子罐(Seeding tank)逐级培养以获得一定数量和质量的纯种的过程，纯种培养物称作种子。,六、种子扩大培养,种子扩大培养的级数,二【三】级发酵：斜面菌种,-,一级种子摇床培养,-,二级种子罐培养【,-,三级种子罐培养】,-,发酵罐生产,影响级数的因素,微生物自身的生长特性,发酵罐的生产规模,六、种子扩大培养,影响种子质量的主要因素,培养基,(Culture media),中的成分配比,种龄,(Cell age),与接种量,(Inoculation concentration),温度,pH,值,通气,(Ventilation),和搅拌,(Stirring),泡沫,(Foam),染菌,(Infection),本章知识结构,斜面保藏法和穿刺保藏法,斜面保藏法,穿刺保藏法,沙土管枯燥保藏法,真空冷冻枯燥保藏法,液氮保藏法,悬液保藏法,低温保藏法,预习内容,微生物的代谢调节,酶活性调节机制；,诱导酶和组成酶；,酶合成调节的机制。,