蛋白质还原糖脂肪的鉴定实验课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的检测,生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的检测,1,、实验原理：,（,1,）,斐林试剂,鉴定还原糖时，溶液的颜色变化为：,由,蓝色,变成,砖红色,(,沉淀,),。,斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而,不能,鉴定非还原性糖。,葡萄糖、麦芽糖、果糖,是还原糖,。,（,2,）,苏丹,染液,遇脂肪的颜色反应为,橘黄色,，,苏丹,染液,遇脂肪的颜色反应为,红色,。,（,3,）,蛋白质可与,双缩脲试剂,产生,紫色,反应（肽键）,。,1、实验原理：（1）斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化为：,（一）生物组织中可溶性还原糖的鉴定,1.,实验原理,当质量浓度为,0.1g/mL,的氢氧化钠溶液与质量浓度为,0.05g/mL,的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的,Cu(OH),2,悬浊液。,Cu(OH),2,与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的,Cu,2,O,沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原糖。,R,CHO,+2Cu(OH),2,R,COOH,+,Cu,2,O,+2H,2,O,（一）生物组织中可溶性还原糖的鉴定1.实验原理RCHO+2,试剂配制,甲液（,0.1g/mL,的氢氧化钠溶液）,斐林试剂,乙液（,0.05g/mL,的硫酸铜溶液）,甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴加，或者久置后才用。,试剂配制甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴加，或者久置,（二）生物组织中蛋白质的鉴定,1,实验原理,在碱性溶液（,NaOH,）中，双缩脲（,H,2,NOC-NH-CONH,2,）能与,Cu,2+,作用，形成紫色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。,由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。,（二）生物组织中蛋白质的鉴定1 实验原理 由,试剂配制,A,液（,0.1g/mL,的氢氧化钠溶液）,双缩脲试剂,B,液（,0.01g/mL,的硫酸铜溶液）,试剂配制,2,、实验目的：,尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质,3,、实验选材,（,1,、材料应富含相关物质，使现象更加明显；,2,、材料本身应无色，以免对结果产生干扰）,（,1,）做可溶性还原性糖鉴定实验，应选,含糖高,，颜色为,白色的,植物组织，如,苹果、梨，,也可用白萝卜替代,。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）,（,2,）做脂肪的鉴定实验。应选,富,含脂肪的种子，以,花生种子,为最好，实验前一般要浸泡,3,4,小时。,（,3,）做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆,(,可用豆浆替代）,或鸡蛋清。,2、实验目的：,4,、实验试剂,斐林试剂（包括,甲液,：质量浓度为,0.1g/mL NaOH,溶液和,乙液,：质量浓度为,0.05g/mL CuSO4,溶液）、,苏丹,或苏丹,染液、,双缩脲试剂（包括,A,液,：质量浓度为,0.1g/mL NaOH,溶液,B,液,：质量浓度为,0.01g/mL CuSO4,溶液）、,体积分数为,50%,的酒精溶液，碘液、蒸馏水。,4、实验试剂,5,、,方法步骤：,（）,可溶性,还原糖,糖的鉴定,（水浴加热）,操 作 方 法,注 意 问 题,解 释,1.,制备组织样液。,（,去皮,、切块、研磨、过滤）,苹果或梨组织液必须临时制备,因苹果多酚氧化酶含量高，,组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。,2.,取,1,支试管，向试管内注入,2mL,组织样液。,3.,向试管内注入,1mL,新制的斐林试剂，振荡。,应将组成斐林试剂的,甲液、乙液分别配制，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂；,切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。,斐林试剂很不稳定，,甲乙液分别加入时可能与组织样液发生反应无,Cu(OH)2,生成。,甲乙液 等量混合，现配先用，切不可分开滴加，或者久置后才用。,4.,试管放在盛有,50-65,温水的大烧杯中，加热约,2,分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色,棕色,砖红色（沉淀）,最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。,防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤；,甲、乙液混合保存时生成,Cu(OH)2,在,7090,下分解成黑色,CuO,和水；,5、方法步骤：（）可溶性还原糖糖的鉴定（水浴加热）操,.,实验步骤,（,1,）制备组织样液（教师制备）,（,2,）鉴定样液,先在试管中加入,2mL,组织样液,.实验步骤（1）制备组织样液（教师制备）（2）鉴定样液先在试,再加入,2mL,刚配制的斐林试剂,水浴煮沸,2,分钟,注意观察整个实验过程中，溶液颜色的变化！,再加入2mL刚配制的斐林试剂水浴煮沸2分钟注意观察整个实验过,蛋白质还原糖脂肪的鉴定实验课件,操 作 方 法,注 意 问 题,解 释,花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。,干种子要浸泡,34,小时，新花生的浸泡时间可缩短。,因为,浸泡时间短，不易切片,，,浸泡时间过长，组织较软，切下的薄片不易成形,。切片要尽可能薄些，便于观察。,在子叶薄片上滴,23,滴苏丹,或苏丹,染液，染色,1,分钟。,染色时间不宜过长。,苏丹,中含有酒精，染色时间久了，把脂肪全部溶解了，观察不到脂肪粒,用吸水纸吸去薄片周围染液，用,50%,酒精洗去浮色，再用吸水纸吸去酒精。,酒精用于洗去浮色，,不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察,。同时，,酒精,是脂溶性溶剂，,可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。,用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上,12,滴蒸馏水，盖上盖玻片。,滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。,低倍镜,下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。,装片不宜久放,。,时间一长，油滴会溶解在乙醇中,。,（,）脂肪的鉴定,（需要显微镜）,操 作 方 法注 意 问 题解 释花生种子浸泡、去皮、切下一,实验步骤,（,1,）切片制作,去掉花生种皮,用左手的三个手指夹住花生的一片子叶，使花生子叶高于手指之上（,为什么？,）。右手持刀片，将子叶削去一层，形成平面。,刀口向内，与花生断面平行，以均匀的动作，自左前方向右后方快速拉刀，滑行切片（,注意要整个臂部用力，而不要腕部用力。,）如此连续动作，切下一些薄片。,实验步骤（1）切片制作去掉花生种皮用左手的三个手指夹住花,（,2,）染色,用毛笔将最 薄的几片材料移至洁净的载玻片的中央滴苏丹,溶液,2-3,滴于花生子叶薄片上,2-1min,后，吸去染液,滴,50%,的酒精洗去浮色,吸去多余酒精再滴,1-2,滴蒸馏水盖上盖玻片，制成临时装片。,（,3,）镜检鉴定,在低倍镜下观察，找到花生子叶切片的最薄处（,最好只有,1-2,层细胞,），移至视野的中心换用高倍镜观察，调焦至最清晰。可发现细胞内,橘黄色,的圆形小颗粒，这就是脂肪滴（油滴）。,若发现观察物外围也有许多橘黄色小颗粒，则是脂肪跑了出来,。,（2）染色 用毛笔将最 薄的几片材料移至洁净的载,脂肪检测实验的实验结果,脂肪检测实验的实验结果,若用物理方法如何鉴定脂肪的存在,?,烘烤种子后,把子叶放在白纸上用手指挤压,白纸上会出现透明的油迹,说明子叶含有脂肪。,若用物理方法如何鉴定脂肪的存在?烘烤种子后,把子叶放在白纸上,（,）,蛋白质的鉴定,操 作 方 法,注 意 问 题,解 释,制备组织样液。,（浸泡、去皮研磨、过滤。）,黄豆浸泡,1,至,2,天，容易研磨成浆,，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。,鉴定。加样液约,2ml,于试管中，加入双缩脲试剂,A,，摇匀；再加入双缩脲试剂,B,液,34,滴，摇匀，溶液变紫色。,A,液和,B,液也要分开配制，储存。鉴定时先加,A,液后加,B,液。,CuSO4,溶液不能多加。,先加,NaOH,溶液,，为,Cu2+,与蛋白质反应,提供一个碱性的环境,。,A,、,B,液混装或同时加入，会导致,Cu2+,变成,Cu(OH)2,沉淀，而失效。,否则,CuSO4,的蓝色会遮盖反应的真实颜色。,可用蛋清代替豆浆。,蛋清要先稀释。,如果,稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁,，,与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净,。,附：淀粉的检测和观察,用试管取,2ml,待测组织样液，向试管内滴加,2,滴碘液，观察颜色变化。,碘液不要滴太多,以免影响颜色观察,（）蛋白质的鉴定 操 作 方 法注 意 问 题解 释制备组,实验步骤：,（,1,）制备生物组织样液（教师制备）,（,2,）鉴定,先加,2mL,组织样液,再加,2mL,双缩脲试剂,A,液,加,3-4,滴双缩脲试剂,B,液,实验步骤：（1）制备生物组织样液（教师制备）（2）鉴定先加2,蛋白质检测实验的实验结果,蛋白质检测实验的实验结果,6,、,讨论,:,(1),选取富含还原糖的生物材料时,能用甘蔗或者橘子吗,?,为什么,?,答,:,不行,.,橘子本身富含色素,会掩盖颜色反应的结果,;,而甘蔗不含还原糖,蔗糖不是还原糖,.,(2),斐林试剂和双缩脲试剂有哪些区别？,a,溶液浓度不同,:,斐林试剂中,CuSO4,溶液,为,0.05g/mL,双缩脲试剂中,CuSO4,溶液,为,0.0,1,g/mL,b,使用原理不同,:,斐林试剂实质是新制,Cu(OH)2,沉淀,双缩脲试剂实质是碱性条件下的,Cu2+,c,使用方法不同,:,斐林试剂使用时,先把,NaOH,溶液和,CuSO4,溶液,混合,然后立即使用,;,双缩脲试剂是先加,NaOH,溶液,然后再加入,3,至,4,滴,CuSO4,溶液,6、讨论:(1)选取富含还原糖的生物材料时,能用甘蔗或者橘子,7,、练习与巩固,(1),检查尿液中有无葡萄糖,下列试剂中可选用的是,(),A.,斐林试剂,B.,碘液,C.,双缩脲试剂,D.,二苯胺,(2),下列生物材料中，可用于还原糖鉴定的是,(),A.,柑橘,B.,苹果,C.,新鲜肝脏,D.,甘蔗,A,B,7、练习与巩固AB,蛋白质还原糖脂肪的鉴定实验课件,蛋白质还原糖脂肪的鉴定实验课件,爱是什么？一个精灵坐在碧绿的枝叶间沉思。风儿若有若无。一只鸟儿飞过来，停在枝上，望着远处将要成熟的稻田。精灵取出一束黄澄澄的稻谷问道：“你爱这稻谷吗？”“爱。”“为什么？”“它驱赶我的饥饿。”鸟儿啄完稻谷，轻轻梳理着光润的羽毛。“现在你爱这稻谷吗？”精灵又取出一束黄澄澄的稻谷。鸟儿抬头望着远处的一湾泉水回答：“现在我爱那一湾泉水，我有点渴了。”精灵摘下一片树叶，里面盛了一汪泉水。鸟儿喝完泉水，准备振翅飞去。“请再回答我一个问题，”精灵伸出指尖，鸟儿停在上面。“你要去做什么更重要的事吗？我这里又稻谷也有泉水。”“我要去那片开着风信子的山谷，去看那朵风信子。”“为什么？它能驱赶你的饥饿？”“不能。”“它能滋润你的干渴？”“不能。”爱是什么？一个精灵坐在碧绿的枝叶间沉思。风儿若有若无。一只鸟儿飞过来，停在枝上，望着远处将要成熟的稻田。精灵取出一束黄澄澄的稻谷问道：“你爱这稻谷吗？”“爱。”“为什么？”“它驱赶我的饥饿。”鸟儿啄完稻谷，轻轻梳理着光润的羽毛。“现在你爱这稻谷吗？”精灵又取出一束黄澄澄的稻谷。鸟儿抬头望着远处的一湾泉水回答：“现在我爱那一湾泉水，我有点渴了。”精灵摘下一片树叶，里面盛了一汪泉水。鸟儿喝完泉水，准备振翅飞去。“请再回答我一个问题，”精灵伸出指尖，鸟儿停在上面。“你要去做什么更重要的事吗？我这里又稻谷也有泉水。”“我要去那片开着风信子的山谷，去看那朵风信子。”“为什么？它能驱赶你的饥饿？”“不能。”“它能滋润你