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,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验二,三,.,抗酸染色,一,.,消毒灭菌,二.肠道致病菌的别离培养,一、消毒灭菌,物理因素对细菌的影响,2.,化学因素对细菌的影响,一 物理因素对细菌的影响,高压蒸汽灭菌法,紫外线对细菌的影响,高压蒸气灭菌法,原理：,蒸汽被限制在密闭容器内，随着热力,的作用压力不断升高，蒸汽的温度也,相应升高，在,103.4kPa,蒸汽压力下,时，温度可达,121.3,。维持,15-20,分,钟后可杀死细菌包括芽孢在内的所有,微生物。,高压蒸气灭菌器,1)构造,高压蒸气灭菌器是一个双层的金属圆筒，两层之间盛水，外层坚厚，其上或前方有金属厚盖。盖旁附有螺栓，借以紧闭盖门，使蒸气不能外溢。,高压蒸气灭菌器上装有排气阀、平安阀，以调节器内压力，装有的温度计及压力表以示内部温度和压力。,器内装有带孔的金属搁板，用以放置欲灭菌对象。,高压蒸汽灭菌法,压力,：,1.05kg/,或,103.425KPa,温度,:,121.3,时间：,15-20min,完全杀灭细菌的繁殖体和芽孢,用途：适用于耐高温、高压，不怕潮湿的物品，,如敷料、手术器械、药品、细菌培养基等。,2)使用方法,加水至锅内达规定的水平面，放入欲灭菌物品，把锅盖按对称的螺旋先后对称用力切勿单个依次扭紧，使锅盖确实均匀密闭。,用电炉加热，同时翻开排气阀门，使器内冷空气逸出，待空气全部排出后，关闭排气阀。,继续加热并观察压力表，器内压力又逐渐升高，直到压力表指在所需数字例如15磅即调节热源，维持2030min可完全杀死细菌的繁殖体和芽胞。,灭菌时间到达后，停止加热，待压力自行下降至零时方可徐徐开放排气阀，排尽余气，翻开锅盖，取出灭菌物品。,3)本卷须知,检查排气活塞及平安阀门，特别是压力表的性能是否正常，以免发生危险。,灭菌物品不应放置过挤，阻碍蒸气流通，影响灭菌效果。,灭菌开始时必须将器内冷空气完全排除，否那么压力表上所示压力并非全部是蒸气压力，灭菌将不彻底。,灭菌过程中及灭菌完毕，灭菌后切不可排气过急，突然翻开排气阀门放气减压，以免瓶内液体外溢或者破裂。,全自动高压蒸汽灭菌锅,台式蒸汽灭菌器,BA-30,Systec D-200 2D,双门高压灭菌器,电热卧式圆形压力蒸汽灭菌器,(,型号,YXQ-WY21-600),全自动喷淋式高温高压调理杀菌锅,电脑全自动水浴式串联杀菌锅,紫外线对细菌的影响,原理：,紫外线主要作用于,DNA,，使一条,DNA,链上的两个相邻胸腺嘧啶以共价键结合成二聚体，从而干扰,DNA,的复制与转录导致细菌变异或死亡。,对病毒也有破坏作用。,特点：,紫外线杀菌作用强，而穿透能力弱。普通,玻璃、纸张、水蒸气、尘埃等均能阻挡。,紫外线中波长为,240-300nm,者具有杀菌能,力，其中,265-266nm,的杀菌作用最强,。,用途：常用于消毒物体外表，手术室无菌实验,室，传染病房的空气消毒及不耐热物品消毒。,紫外线对细菌的影响,方法：,取一个平皿，用密涂法将细菌涂布于培养皿中，然后按图所示揭开平皿盖，置于紫外线下照射,30,分钟，然后盖好盖子，置,37,培养,24h,后取出观察结果。,纸片,平皿盖,滤纸片用后需要用火烧掉,每个实验室,4,个平板,密涂接种,分三次接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转,60,度二次密涂接种，然后同方向旋转,60,度后再次密涂接种。,1.促进菌体蛋白质变性或凝固;,2.干扰细菌酶系统和代谢;,3.损伤细菌的细胞膜，影响细菌的化学组成，,物理结构和生理活动。,有些化学药品浓度高时能杀灭病原微生物，称为化学消毒剂；浓度低时能抑制细菌生长，称为防腐剂。只能外用，对细菌的敏感性不同,二 化学因素对细菌的影响,化学消毒剂分类,高效消毒剂：杀灭细菌芽孢在内的所有微生物，适用于,不耐热力灭菌但要进入人体内部的物品，如内窥镜等。,如：次氯酸钠、过氧化氢、甲醛、环氧乙烷等,中效消毒剂：不能杀灭芽孢，但能杀灭繁殖体包括结,核杆菌，真菌和大多病毒，适用于喉镜，麻醉器材等。,如：碘酊、乙醇等,低效消毒剂：能杀灭大多细菌繁殖体，但不能杀灭芽,孢，结核杆菌及某些抵抗力强的真菌和病毒。,如：新洁尔灭、洗必泰、高锰酸钾等,化学消毒剂对细菌的影响,方法：取一普通平皿培养基，一局部写上“前，另一局部写上“后，然后将手指在写有“前的局部沾一下，再将手指用酒精、碘酒或新洁尔灭进行消毒，在写有“后的局部沾一下。放入37温箱培养24小时后观察。,每个实验室4个平皿,二、肠道致病菌的别离培养,肠道致病菌的生物学性状,SS培养基的特性及用途,别离培养方法,肠道杆菌的生物学性状,埃希菌属：大肠埃希菌,沙门菌属：伤寒沙门菌,甲型、乙型副伤寒沙门菌,志贺菌属：痢疾志贺菌,肠杆菌科重要菌属及代表菌种,1,、相似的形态染色,从形态上无法区别,中等大小的,G,-,杆菌,多有鞭毛、菌毛,肠道杆菌的生物学性状,2、活泼的生化反响,肠道杆菌的生物学性状,乳糖发酵试验,初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌,肠道致病菌,肠道非致病菌,多数不发酵乳糖,多数发酵乳糖,肠道杆菌的生物学性状,-/+,-,+,伤寒杆菌,-,-,+,痢疾杆菌,-,大肠杆菌,硫化氢,乳糖,葡萄糖,菌名,2、活泼的生化反响,SS培养基的特性Salmonella-Shigella Medium,胆盐抑制G+,枸橼酸钠和煌绿能局部抑制大肠杆菌,致病的沙门菌和志贺菌能大量生长。,中性红指示剂和乳糖,中性红遇酸变粉红。,常用于培养肠道致病菌。,牛肉浸粉 蛋白胨 乳糖 硫代硫酸钠,枸橼酸钠 煌绿,胆盐,中性红 琼脂,Salmonella-Shigella Medium,主要成分,根底营养,乳糖,指示剂,抑制剂,分解乳糖,不分解乳糖,产酸,PH,下降,指示剂变红色,红色大菌落,大肠杆菌等,无明显变化,无色半透明小菌落,志贺菌、沙门菌,大肠杆菌,痢疾杆菌,SS,平板,大肠杆菌,粉红色大菌落,痢疾杆菌,无色细小,半透明菌落,伤寒杆菌,无色细小,半透明菌落,SS,培养基的特性及用途,将粪便标本以分区划线法接种到SS培养基。,(每个实验室8个平板，接种好后，做好标记，用胶布按班绑好,注：每个平板只可操作一次，不可重复操作,放入37温箱中培养24小时。取出放4冰箱中保存备用。,肠道致病菌的别离培养方法,【,实验目的,】,1.,掌握分枝杆菌抗酸染色的操作方法和意义。,2.,熟悉抗酸染色的原理。,三、抗酸染色Acid fast stain,分枝杆菌的细胞壁内含有大量的,脂质，主要是分枝菌酸,，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过,加热和延长染色时间,来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名,抗酸染色,。,齐,-,尼氏抗酸染色法是在加热条件下使,分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物,，用,3%,盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为,红色,，而其他细菌及背景中的物质为,蓝色,。,【,实验原理,】,细菌：卡介苗 Bacillus Calmette-Guerin，BCG,染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美兰溶液,其它：接种环、酒精灯、载玻片、玻片夹等,【,实验材料,】,1.细菌涂片的制备,涂片 枯燥 固定,2.染色,1初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3 滴，在火焰高处2-10cm徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，加热35min，假设染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，待标本冷却后用水冲洗。,2脱色：3%盐酸酒精脱色30s1min；用水冲洗。,3复染：用碱性美兰溶液复染1min；用水冲洗后用吸水纸吸干。,3.用油镜观察,【方法与步骤】与革兰染色的差异,【,实验结果,】,未染色 初染后 脱色后 复染后,初染,脱色,复染,石炭酸复红,盐酸酒精,碱性美,兰,结核杆菌呈,红色,，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈,蓝色,。,【本卷须知】,1.,无菌操作,2.,染色时间要充分,3.,初染时掌握好加热的温度，勿沸腾、干涸,4.,初染结束后需冷却后再用水冲洗,实验报告,内容：抗酸染色,一、目的,二、原理,三、材料,四、方法,五、结果图,六、本卷须知,预习下周实验内容：,肠道致病菌的鉴定；,药敏试验；,内毒素的检测。,1.请将实验后的玻片放入前面的消毒缸中。,2.显微镜油镜头用擦镜液擦干净。,2.离开实验室之前请用肥皂洗手。,3.请值日的同学认真清扫。,
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