宫颈癌基因EEmRNA检测ppt课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,哈拉尔德,楚尔,豪森,哈拉尔德,楚尔,豪森,（德国）：,确定：,“人乳头瘤病毒,（,Human Papilloma virus,，简称,HPV,）,感染导致宫颈癌”,获得,2008,年,诺贝尔,医学和生理学奖。,一、宫颈癌简介,哈拉尔德楚尔豪森哈拉尔德楚尔豪森（德国）：一、宫颈癌,HPV16,L1:,主要衣壳蛋白，是疫苗的主要成分,L2:,次要衣壳蛋白，是市售抗体的主要识别位点,E4,：结合并破坏细胞角蛋白网，形成挖空细胞的外观,E2,：,负性,调节,E6,和,E7,，维持凋亡和细胞周期的调控。,通常在病毒发生整合（,病毒整合时会破坏,E2,基因的结构,）时失活,HPV,的主要致癌基因,E6,通过抑制,p53,而阻断凋亡,E7,通过抑制,pRB,使细胞周期失控,X,HPV,的基因片段及功能,HPV16L1:主要衣壳蛋白，是疫苗的主要成分 L2:,高危亚型HPV感染宫颈上皮细胞，将产生两种癌蛋白：,E6和E7蛋白,。癌蛋白可与宿主细胞的细胞周期调节蛋白（,抑癌蛋白,如P53、RB等）相结合，导致细胞周期控制失常，发生,癌变,。,（人民卫生出版社、妇产科学、2004年1月第6版）,E6、E7 癌蛋白,E6、E7 癌基因,DNA,E6、E7,mRNA,癌细胞,结合抑癌蛋白,P53,、,RB,等,细胞周期失控,致癌机理,高危亚型HPV感染宫颈上皮细胞，将产生两种癌蛋白：E6和E7,感染发病情况,感染发病情况,2003-2008,年，在我国大型宫颈癌筛查中，我国城市、农村妇女高危型,HPV,感染率分别为,15.2%,和,14.6%,，但宫颈癌的发病率为,50/10,万（,0.05%,）,99.7%,的宫颈癌和,HPV,感染有关，但,80%HPV,感染者,2,年内会自行消退，最后不到1的进展为CIN3,+,。,感染发病情况,感染发病情况,正常宫颈,感染,HPV,宫颈上皮内轻度癌前病变,(CIN),宫颈上皮内中度癌前病变,(CIN),宫颈上皮内高度癌前病变,(CIN),原位癌浸润癌,依靠免疫力,80%,自行消退,0,6-18,个月,至少,2,年后,5-10,年后,一过性感染,持续性感染,62%,转为正常,16%,进一步进展,22%,维持原状,54%,转为正常,30%,进一步进展,16%,维持原状,100%,20%,3.2%,1%,0.35%,二、HPV宫颈癌,二、HPV宫颈癌,HPV,感染致宫颈癌模式图,正常宫颈感染HPV宫颈上皮内轻度癌前病变(CIN)宫颈上,宫颈癌的,真正,病因是,高危,HPV的,持续性,/,整合,感染。,HPV,感染是宫颈癌的,必要,条件，但非,充分,条件。,如果,没有,mRNA,即使有高危HPV，仍,不会有,宫颈癌。,正确看待,HPV,感染的危害性，不可,轻视,亦不可,过度夸大,。,小结,返回,宫颈癌的真正病因是高危HPV的持续性/整合感染。,高危,HPV,感染宫颈上皮细胞,HPV L1 L2 DNA,HPV L1 L2 mRNA,HPV L1 L2,蛋白,HPV,复制繁殖,HPV,癌基因,E6/E7,DNA,E6/E7,癌蛋白与抑癌蛋白,P53,、,RB,等结合,E6/E7,mRNA,宫颈细胞,CIN,或癌变,HPV,病毒学检测,细胞形态或组织学检测,癌基因学检测,E6/E7,癌蛋白,E6/E7,mRNA,二、宫颈癌,-E6,、,E7 mRNA,高危HPV感染宫颈上皮细胞HPV L1 L2 DNAH,二、宫颈癌,-E6,、,E7 mRNA,HPV,病毒学检测,癌基因,学检测,二、宫颈癌-E6、E7 mRNA HPV病毒学检测癌基因,检测方法,意义,特点,巴氏染色法,直接看到病变的程度,五级分类,液基细胞学,TBS分类；基本的筛查方法,HPV病毒检测,是否有病毒感染（潜在风险）,1、ASCUS分流,2、分型，16、18,3、持续感染,4、病毒载量,E6/E7mRNA检测,E6/E7癌基因表达情况,检测致癌活动产物，预测病变趋势！,阴道镜检,宫颈表面病变程度,直观、清晰,宫颈活检,宫颈上皮剖面病变程度,病变分级；确诊的金标准,宫颈病变检测方法,检测方法意义特点巴氏染色法直接看到病变的程度五级分类液基细胞,E6/E7 mRNA检测结果：,不仅观察是否,感染,了HPV病毒；而且观察病毒致癌基因E6、E7是否在,活动,及活动,程度,。,E6/E7 mRNA检测,E6/E7 mRNA检测结果：不仅观察是否感染了H,2006,年欧洲生殖器感染及肿瘤研究组织,(the European Research Organization on Genital Infection and Neoplasia),已取得共识，认为今后,HPV E6/E7mRNA,检测应作为一个重点研究对象。,E6/E7 mRNA检测,共识,2006年欧洲生殖器感染及肿瘤研究组织(th,数量越来越,多,；,应用范围越来越,广,，,涉及到到筛查、诊治、随后随访、特殊人群的使用等,E6/E7 mRNA检测,文章,数量越来越多；E6/E7,公共卫生研究结果证实可靠性,以上三个大样本的对比实验采的结果显示，以HC2和罗氏公司的DNA检测为对比对象，分析结果显示效果良好。,通过对多个文献中数据的比对分析，公共卫生研究结果显示E6、E7 mRNA与DNA检测一样可靠，并和宫颈,病变,有着良好的相关性。,公共卫生研究结果证实可靠性以上三个,作者,年代,国别,DNA敏感性,mRNA敏感性,DNA特异性,mRNA特异性,DNA阳性预测值,mRNA阳性预测值,DNA阴性预测值,mRNA阴性预测值,1Molden,2005,挪威,90%,86%,53%,85%,35%,62%,95%,96%,2Lie,2005,挪威,95%,77%,36%,78%,82%,92%,67%,52%,3Andersson,2006,瑞典,70%,61%,39%,66%,55%,59%,56%,48%,4Castle,2007,美国,92%,90%,47%,61%,30%,36%,96%,96%,5Szarewski,2008,英国,100%,74%,28%,73%,36%,52%,96%,87%,6Dockter,2009,法国,95%,91%,47%,56%,29%,32%,98%,96%,7Cattani,2009,意大利,86%,81%,56%,73%,49%,59%,89%,89%,8Halfon,2010,法国,95%,76%,49%,63%,48%,50%,95%,84%,9Hovland,2010,刚果,100%,81%,86%,97%,28%,57%,100%,99%,10Ratnam,2010,加拿大,96%,78%,40%,76%,36%,53%,96%,76%,11王华,2011,中国,79%,63%,61%,78%,总计（平均值）,90.7%,76.2%,49.2%,73.3%,42.8%,55.2%,88.8%,82.3%,阳性判定对照标准为：活检标本组织病理,CIN2+,E6/E7mRNA检测与,HPV DNA,检测比较,作者年代国别DNA敏感性mRNA敏感性DNA特异性mRNA特,如何解决宫颈癌风险评估既,敏感又特异？,-,是临床,诊断难点,、也是,发展方向,。,E6,、,E7,mRNA,检测,特异性,和,阳性预测,值,高,HPV DNA,检测,敏感性,和,阴性预测值,高。,E6/E7mRNA检测与,HPV DNA,检测比较,如何解决宫颈癌风险评估既敏感又特异？E6、E7 mRNA检,E6,、,E7 mRNA,与液基细胞学联合检测共用一份标本，达到,高敏感性,的临床要求。,E6,、,E7 mRNA,与液基细胞学联合,E6、E7 mRNA与液基细胞学联合检测共用,三、宫颈筛查指南及临床问题,不建议此年龄阶段人，单独用,HPV,检测作为筛查方法,。,不用,HPV,检测，作为此年龄阶段,ASC-US,的筛查管理。,不用,HPV,检测，作为此年龄阶段人群的筛查。,三、宫颈筛查指南及临床问题 不建议此年龄阶段人，单独用HPV,中国宫颈癌筛查指南（2011版）：ASCUS,ASCUS,普通人群,HPV检测与分流（AI）,间隔6个月连续2次重复细胞学检查（AI）,单独使用阴道镜（AI）,对ASCUS常规使用LEEP是不可接受的（EIII）,特殊人群,青春期女性,每年细胞学随访（BII），连续2年，12个月随访出现HSIL考虑阴道镜检查，24月随访出现ASCUS考虑阴道镜检查（AII），随后常规筛查,妊娠妇女,不主张阴道镜常规检查,Q:HPV（+）（-）后的处理？,特殊人群：青春期女性和妊娠妇女的评估？,中国宫颈癌筛查指南（2011版）：ASCUSASCUS,LSIL,LSIL通常表明是HPV感染，,其高危HPV DNA阳性率为76.8%，在LSIL人群中，初次阴道镜检查发现的CIN2及更高级的宫颈病变的发生率为12%-16%。,美国ALTS的数据表明，在高危HPV DNA阳性的LSIL和ASCUS的女性中，CIN2、3的患病风险是相同的。这些证据支持对上述两个人群采用相同的管理方式，除了特殊人群如绝经后女性。,普通人群,推荐使用阴道镜检测与多点活检（AII）,对于没有发现病变（BII）和不满意阴道镜检查（AII）的女性，采集宫颈管样本是更好的办法,对于满意的阴道镜检查且转化区发现病变的女性采集宫颈管样本也是可接受的（AII）,对于阴道镜检查和活检均未发现CIN2、3的LSIL女性，可接受的阴道镜后管理方案是，12个月时HPV DNA检测或6个月和12个月时充分细胞学检查（AII）,如果HPV DNA检测阳性或重复细胞学报告ASCUS，推荐使用阴道镜（AI），发现CIN，应根据CIN指南处理。,对于LSIL患者的治疗，,缺少组织学证据的诊断学切除或者消融治疗都是不可接受的（,EII）,中国宫颈癌筛查指南（2011版）：LSIL,Q,：,LSIL,的病人要不要做,HPV,检测？,风险如何评估？,LSIL中国宫颈癌筛查指南（2011版）：LSILQ：LS,中国宫颈癌筛查指南（2011版）：LSIL,青春期女性,推荐每年细胞学随访（AII）,在12个月随访时，重复细胞学结果LSIL，应考虑阴道镜检查。,在24个月随访时，细胞学出现ASCUS结果，应考虑阴道镜检查（AII）,对LSIL青春期女性，HPV DNA检测是不可接受的（EII），,如果已做了HPV DNA检查，其结果不影响管理。,绝经期女性,应较少采用侵入性的管理方法，采用HPV检测和分流可能更为合理。,可接受方案包括：“反馈性”HPV DNA检测，6个月到12个月重复细胞学、和阴道镜（CIII）,如果HPV DNA检测阴性 或 阴道镜检查未发现CIN，12个月时重复细胞学是推荐的方法。,如果HPV DNA检测阳性 或 重复细胞学ASCUS，推荐使用阴道镜（AII）,如果HPV DNA检测阴性 或 重复细胞学结果为“无CIN或恶性病变”，推荐患者返回常规宫颈细胞学筛查。,妊娠期妇女,LSIL非青春期妇女，阴道镜检查是推荐的管理办法（BII）,患者推迟至产后6周行阴道镜检查也是可接受的办法（BIII）,对于细胞学、组织学或阴道镜检查未发现可疑的CIN2、3及癌症的妊娠期女性，产后随访时推荐的方法（BIII）,尽量避免宫颈管搔刮（EIII），不应进行额外的阴道镜和细胞学检查（DIII）,Q,：青春期感染,HPV,女性的罹患宫颈癌风险如何评估？,Q,：绝经和妊娠期妇女的罹患宫颈癌风险如何评估？,中国宫颈癌筛查指南（2011版）：LSIL青春期女性 Q：,中国宫颈癌筛查指南（2011版）：HSIL,20-29岁女性HSIL发生率为0.6%，40-49岁发生率为0.2%，50-59岁发生率为0.1%,HSIL单次阴道镜检查发现CIN2病变占53%-56%，LEEP术后的HSIL女性中，CIN2的病变约占53%-56%，大约2%的HSIL女性是浸