单元一气相色谱分离原理

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,茨维特实验,气相色谱法基础知识,1906,年，茨维特利用不同色素在活性碳酸钙与石油醚的共同作用之下在玻璃柱中呈现出不同的运行速度，能使其达到彼此分离。,茨维特在他的原始论文中，把上述分离方法叫做,色谱法（,chromatography,）,在柱中出现的有颜色的色带叫做,色谱图（,chromatogram,）,。,填充,CaCO3,的玻璃柱管叫做,色谱柱（,column,）,具有大表面积的,CaCO3,固体颗粒称为,固定相,(stationary phase),，,推动被分离的组分（色素）流过固定相的惰性流体（上述实验用的是石油醚）称为,流动相,（,mobile phase,）,第,1,页,/,共,28,页,色谱法定义,色谱分析法实质上是一种物理化学分离方法，即利用不同物质在两相（固定相和流动相）中具有不同的,分配系数（或吸附系数）,，当两相作相对运动时，这些物质在两相中,反复多次分配,（即组分在两相之间进行反复多次的,吸附、脱附,或,溶解、挥发,过程）从而使各物质得到完全分离。,第,2,页,/,共,28,页,色谱法分离过程示意图,A,B,C,D,载气,3,种组分同时进入色谱柱,3,种组分开始在色谱柱中分离,3,种组分在色谱柱中基本达到分离,3,种组分在色谱柱中完全达到分离,第,3,页,/,共,28,页,学生提问、讨论与总结,1,问题,1,：不同组分在色谱柱中为什么呈现不同的运行速度？,因为固定相对不同组分有不同的吸附力，吸附力强的组分难以被流动相冲洗出色谱柱，故运行速度慢，运行时间长。反之，吸附力弱的组分则容易被流动相冲洗出色谱柱，故运行速度快，运行时间短。,同样的道理，若固定相呈液体状态，则不同组分呈现不同运行速度则是因为固定液对不同组分有不同的溶解能力，溶解性强的组分难以挥发至流动相中，故其在色谱柱中运行速度慢，运行时间长。反之，溶解性弱的组分则容易挥发至流动相中，故其在色谱柱中运行速度快，运行时间短。,第,4,页,/,共,28,页,学生提问、讨论与总结,2,问题,2,：吸附与脱附是怎么回事？,吸附作用是指各种气体、蒸气以及溶液里的溶质被吸着在固体或液体物质表面上的作用。具有吸附性的物质叫做吸附剂，被吸附的物质叫吸附质。吸附作用可分为物理吸附和化学吸附。,脱附作用正好与吸附作用相反，是指吸着在固体或液体物质表面上的物质在一定的作用下离开原表面的过程,。,问题,3,：什么是溶解过程与挥发过程？,溶解过程是指气态或液态组分进入固定液的过程，而挥发过程则是指组分离开固定液回到气态或液态流动相的过程。,第,5,页,/,共,28,页,学生提问、讨论与总结,3,问题,4,：所谓,分配系数,？,分配比,？它在色谱分离过程中有什么作用？,分配系数（,K,）,:,平衡状态时，组分在固定相与流动相中的浓度比。如在给定柱温下组分在流动相与固定相间的分配达到平衡时，对于气,-,固色谱，组分的分配系数为：,对于气,-,液色谱，分配系数为：,式中,C,L,与,C,G,分别是组分在固定液与载气中的浓度。,第,6,页,/,共,28,页,学生提问、讨论与总结,4,容量因子（,k,）,:,又称,分配比，容量比,，指组分在固定相和流动相中分配量（质量、体积、物质的量）之比。,两组分分配系数不同，则在色谱柱中有不同的保留值，因而就以不同的速度先后流出色谱柱，从而达到分离。,组分分子结构不同，组分性质不同，则相应的分配系数也不同，这是色谱分离的基础。,第,7,页,/,共,28,页,色谱法发展历史,1,茨维特发现他的色谱法之后的,20,多年里，几乎无人问津这一技术。,到了,1931,年，德籍奥地利化学家库恩（,R.Kuhn,）利用茨维特的方法在纤维状氧化铝和碳酸钙的吸附柱上将过去一个世纪以来公认为单一的结晶状胡萝卜素分离成,a,和,b,两个同分异构体，并由所取得的纯胡萝卜素确定出了其分子式。随后他还发现了八种新类胡萝卜素，并把它们制成纯品，进行了结构分析。,同年，库恩又把注意力集中在维生素的研究上，确定了维生素,A,的结构。,此外，他还用色谱法从蛋黄中分离出了叶黄素；还曾把腌鱼腐败细菌中所含的红色类胡萝卜素确定离析出来并制成结晶。,1933,年库恩从,35000,升脱脂牛奶中分离出,1g,核黄素（即维生素,B2,），制得结晶，并测定了它的结构。,第,8,页,/,共,28,页,色谱法发展历史,2,1938,年，,Kuhn,因在维生素和胡萝卜素的离析与结构分析中取得了重大研究成果被授予诺贝尔化学奖。从此色谱法开始为人们所重视，迅速为各国科学家们所注目，广泛被采用起来。此后，相继出现了各种色谱方法（如下表所示）。现在的色谱分析已经失去颜色的含义，只是沿用色谱这个名词。,年代,发明者,发明的色谱方法或重要应用,1906,Tswett,用碳酸钙作吸附剂分离植物色素。最先提出色谱概念。,1931,Kuhn,Lederer,用氧化铝和碳酸钙分离,a,-,、,b,-,和,g,-,胡萝卜素。使色谱法开始为人们所重视。,1938,Izmailov,Shraiber,最先使用薄层色谱法。,1938,Taylor,Uray,用离子交换色谱法分离了锂和钾的同位素。,1941,Martin,Synge,提出色谱塔板理论；发明液,-,液分配色谱；预言了气体可作为流动相（即气相色谱）。,第,9,页,/,共,28,页,色谱法发展历史,3,年代,发明者,发明的色谱方法或重要应用,1944,Consden,等,发明了纸色谱。,1949,Macllean,在氧化铝中加入淀粉黏合剂制作薄层板使薄层色谱进入实用阶段。,1952,Martin,James,从理论和实践方面完善了气,-,液分配色谱法。,1956,Van Deemter,等,提出色谱速率理论，并应用于气相色谱。,1957,基于离子交换色谱的氨基酸分析专用仪器问世。,1958,Golay,发明毛细管柱气相色谱。,1959,Porath,Flodin,发表凝胶过滤色谱的报告。,1964,Moore,发明凝胶渗透色谱。,1965,Giddings,发展了色谱理论，为色谱学的发展奠定了理论基础。,1975,Small,发明了以离子交换剂为固定相、强电解质为流动相，采用抑制型电导检测的新型离子色谱法。,1981,Jorgenson,等,创立了毛细管电泳法。,第,10,页,/,共,28,页,色谱法基础知识,色谱的特点：高分离效能,色谱的优点：,1.,分离效率高,2.,应用范围广,3.,分析速度快,4.,样品用量少,5.,灵敏度高,6.,分离与测定一次完成，可与多种分析仪器联用,7.,易于自动化,色谱的缺点：鉴别功能较差,第,11,页,/,共,28,页,色谱法的分类,1,按固定相和流动相所处的状态分类,流 动 相,总 称,固定相,色谱名称,气 体,气相色谱,（,GC,）,固体,气,-,固色谱（,GSC,）,液体,气,-,液色谱（,GLC,）,液 体,液相色谱,（,LC,）,固体,液,-,固色谱（,LSC,）,液体,液,-,液色谱（,LLC,）,第,12,页,/,共,28,页,色谱法的分类,2,按固定相性质和操作方式分类,固定相,形式,柱,纸,薄层板,填充柱,开口管柱,固定相,性质,在玻璃或不锈钢柱管内填充固体吸附剂或涂渍在惰性载体上的固定液,在弹性石英玻璃或玻璃毛细管内壁附有吸附剂薄层或涂渍固定液等,具有多孔和强渗透能力的滤纸或纤维素薄膜,在玻璃板上涂有硅胶,G,薄层,操作,方式,液体或气体流动相从柱头向柱尾,连续不断地冲洗,液体流动相从滤纸一端向另一端扩散,液体流动相从薄层板一端向另一端扩散,名 称,柱色谱,纸色谱,薄层色谱,第,13,页,/,共,28,页,色谱法的分类,3,按色谱分离过程的物理化学原理分类,名称,吸附色谱,分配色谱,离子交换色谱,凝胶色谱,原理,利用吸附剂对,不同组分吸附,性能的差别,利用固定液对,不同组分分配,性能差别,利用离子交换,剂对不同离子,亲和能力差别,利用凝胶对不,同组分分子的,阻滞作用差别,平衡常数,吸附系数,K,A,分配系数,K,P,选择性系数,K,S,渗透系数,K,PF,流动相,为液体,液固吸附色谱,液液分配色谱,液相离子,交换色谱,液相凝胶色谱,流动相,为气体,气固吸附色谱,气液分配色谱,目前，应用最广泛的是,气相色谱法（,gas chromatography,，,GC,）,和,高效液相色谱法（,high performance liquid chromatography,，,HPLC,）,。,第,14,页,/,共,28,页,色谱法基础知识,色谱法的分类,色,谱,气相色谱,GC,液相色谱,LC,超临界流体色谱,SFC,气固吸附色谱,GSC,气液分配色谱,GLC,液固吸附色谱,LSC,液液分配色谱,LLC,离子交换色谱,IEC,空间排阻色谱,GPC,GFC,反相分配色谱,正相分配色谱,柱色谱,平面色谱,电色谱,薄层色谱,TLC,纸色谱,TLC,亲合色谱,平面层电色谱,毛细管柱电色谱,毛细管电泳,毛细管区带电泳,毛细管凝胶电泳,毛细管胶束电动色谱,毛细管等电聚焦,毛细管等速电泳,第,15,页,/,共,28,页,在气相色谱分析中，要实现混合物中各组分的分离，主要决定于色谱柱中的固定相。气相色谱中所使用的固定相包括固体固定相、液体固定相和合成固定相三类，但使用最多的是液体固定相。,在气液色谱中使用的固定相是涂在固体支持物,(,载体,),上的一层液膜，称为固定液，它直接对各组分起分离作用。载体不直接起分离作用，但对柱效会产生影响。因此，对固定液和载体都有一定的要求，对它们的特性及选择也要进行研究。,气相色谱固定相,第,16,页,/,共,28,页,首先，要求有较大的溶解度和高的选择性，这样，各组分随载气通过色谱柱时在固定液中有较大的、各不相同的溶解度，就有可能达到良好的分离。,其次，要求蒸气压低，在实际的操作柱温下不易挥发,(,蒸气压一般在,1,3332,13,332Pa),，以免固定液容易流失。第三，固定液的化学稳定性要好，在一般情况下不与载体、组分和载气起不可逆化学反应。,此外，固定液的使用温度范围要宽，黏度要小，凝固点要低，热稳定性要好，在较低温度下不凝固，在较高温度下不发生分解、聚合和交联。,对固定液的要求,第,17,页,/,共,28,页,色谱柱固定相,固定液的涂渍、装柱及老化,抽气,N,2,例：,2m,3mm,玻璃柱,1,.5,%,OV-17+2,%,QF-1/Chromosorb W AW-DMCS,80/100,目,第,18,页,/,共,28,页,工业分析技术,PPT,固定液的特性,气液色谱分析中使用的固定液种类很多，用什么来标度它的分离特性呢,?,目前大都采用相对极性和固定液的特征常数进行标度。各种固定液的相对极性在,O,100,之间，以,20,为一级，分为五级，用“,+”,表示，非极性用“一”表示。各种固定液相对极性大小列于表,5-3,第,19,页,/,共,28,页,工业分析技术,PPT,固定液名称,相对极性,级 数,角鲨烷,阿皮松,SE_30,邻苯二甲酸二壬酯,四乙基硅,羟乙基月桂醇,二丁基甲酰胺,癸二酸乙二醇聚酯,环氧丙基吗啉,二乙基甲酰胺,苯乙腈,聚乙二醇,600,二甲基甲酰胺,，,-,氧二丙腈,O,7,13,25,26,36,43,52,57,62,64,78,80,100,-1,+1,+1,+2,+2,+2,+3,+3,+3,+4,+4,+4,+4,+5,表,5-3,固定液的相对极性,第,20,页,/,共,28,页,固定液的分类,固定液按极性大小可分为五类：,第一类非极性固定液。这一类固定液多为饱和烷烃，如正癸烷、正十八烷、异卅烷,(,角鲨烷,),、阿皮松,(,常用,L,、,M,、,N,型,),等，其中异卅烷最常用，称为标准非极性固定液，其极性定为零。这类固定液与组分分子的作用力是色散力，主要用于分离一般烃类和非极性