药物分析教案6-2概要

商洛职业技术学院教案首页课程名称药物分析*1川工人 2010五年、12二年大专药 专业班级学班授课教师赵晋授课序次25授课类型理论授课学时 2授课题目 （章节）第二节胺类药物分析一、芳胺类药物分析教学目的 与要求1、掌握盐酸普鲁卡因、对乙酰氨基酚的鉴别、检查和含 量测定方法。2、熟悉盐酸普鲁卡因、对乙酰氨基酚的结构特点、性质 与分析方法之间的关系。3、了解其他分析方法。教学重点 与难点重点：普鲁卡因、对乙酰氨基酚分析方法 难点：亚硝酸钠法教学方法 与手段讲授使用教材 及参考书1、使用教材：药物分析/孙莹吕洁主编.一北京：人民卫生出版社，2013.82、参考书：（1）药物分析/石主编.一北京：人民卫生出版社，2003. 2（2）中国药典2010年版教案续页教学 内容辅助手段时间分配5分钟20分钟导入：胺类药物有哪些？第二节胺类药物分析-、芳胺类药物的分析 芳胺类药物主要分为两类：一类为芳伯氨基 未被取代，而在芳环对位有取代的对氨基苯甲酸酯类。另一类则为芳伯 氨基被酰化，并在芳环对位有取代的酰胺类药物。（一）结构与性质1、对氨基苯甲酸酯类药物 本类药物分子中都具有对氨基苯甲酸酯 的母体，典型药物：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因和盐酸丁卡因等局部麻醉 药。主要化学性质1 ）芳伯氨基特性 显重氮化-偶合反应；与芳醛缩合反应；易氧化 变色等。2 ）水解特性含酯键（或酰胺键）易水解。其水解的快慢受光线、热 或碱性条件的影响。水解产物主要为对氨基苯甲酸（PABA。3 ）弱碱性 除苯佐卡因外，因其脂烂胺侧链为叔胺氮原子，故具有弱 碱性。因此能与生物碱沉淀剂发生沉淀反应；但在水溶液中不能用标准 酸直接滴定，在非水溶剂中能滴定。4 ）其它特性 本类药物的游离碱多为碱性油状液体或低熔点固体， 难溶于水，可溶于有机溶剂。其盐酸盐均系白色结晶性粉末，具有一定 熔熔点，易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂。2、酰胺类药物 本类药物均系苯胺的酰基衍生物，其共性是具有芳 酰氨基，典型药物：对乙酰氨基酚（扑热息痛）等解热镇痛药、盐酸利 多卡因和盐酸布比卡因等局部麻醉药及醋氨苯碉抗麻风药。主要化学性 质1 ）水解后显芳伯氨基特性芳酰氨基在酸性溶液中易水解为芳伯氨基，并显芳伯氨基特性反应。水解反应的速度受空间位阻影响：对乙酰 氨基酚利多卡因、布比卡因。2）水解产物易酯化对乙酰氨基酚和醋氨苯碉一醋酸一醋酸乙酯的 香味。3）酚羟基特性 对乙酰氨基酚（FeCl3）。4）弱碱性 利多卡因和布比卡因的脂姓:胺侧链有叔胺氮原子，显碱 性，可以成盐，与生物碱沉淀剂发生沉淀反应。其中与三硝基苯酚试液 反应生成的沉淀具有一定的熔点。5）与重金属离子发生沉淀反应盐酸利多卡因和盐酸布比卡因酰氨基上的氮可在水溶液中与铜离子或钻离子络合，生成有色的配位化合物 沉淀。此沉淀可溶于氯仿等有机溶剂后呈色。此外，本类药物的紫外吸收和红外吸收光谱特征均可供分析用。20分钟（二）鉴别试验1、重氮化-偶合反应分子结构中具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，均可发生重氮化反应，生成的重氮盐可与碱性B -蔡酚偶合生成有色的偶氮染料。苯佐卡因、盐酸普鲁卡因和盐酸普鲁卡因胺（盐酸溶液中）+亚硝酸钠进行重氮化反应；对乙酰氨基酚和醋氨苯碉 （盐酸或硫 酸）加热水解+亚硝酸钠进行重氮化反应。又如对乙酰氨基酚的鉴别方 法 取本品约0.1g，加稀盐酸5ml,置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5ml , 滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性B -蔡酚试液 2ml,振摇，即显红色。盐酸丁卡因结构中的芳香仲胺在酸性溶液中与亚 硝酸钠反应，生成乳白色的 N-亚硝基化合物沉淀（可与具有芳伯氨基 的同类药物区别）。2、与三氯化铁反应-对乙酰氨基酚（+FeCl3试液一蓝紫色）。3、水解产物反应 本类药物分子中有些具有酯的结构，在碱性条件 下水解，利用其水解产物与试剂的反应进行鉴别。盐酸普鲁卡因的鉴别 方法 取本品约0.1g,加水2ml溶解后，力口 10%氢氧化钠溶液1ml,即生成白色沉淀，加热变为油状物（普鲁卡因）；继续加热，产生的蒸汽（二 乙氨基乙醇）能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色； 热至油状物消失后（生 成可溶于水的对氨基苯甲酸钠），放冷，加酸酸化，即析出白色沉淀。此 沉淀能溶于过量的盐酸。4、红外吸收光谱20分钟（三）杂质检查1、对乙酰氨基酚的杂质检查（1）乙醇溶液的澄清度与颜色 生产工艺中使用铁粉作为还原剂， 可能带入成品中，致使乙醇溶液产生浑浊。中间体对氨基酚的有色氧化 产物，在乙醇中显橙红色或棕色。检查方法 取本品1.0g,加乙醇10ml溶解后，溶液应澄清，无色； 如显浑浊，与1号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，与棕红色2号或橙红色2号标准液比较，不得更深。（2）有关物质 由于本品的生产工艺路线较多，不同生产工艺路线 所带入的杂质也有所不同，这些杂质主要包括中间体、副产物及分解产 物。例如：对氨基酚、对氯乙酰苯胺、 O-乙酰基对乙酰氨基酚、偶氮苯、 氧化偶氮苯、苯酶和酶亚胺等。以对硝基氯苯为原料，可能引入对氯乙 酰苯胺，药典采用薄层色谱法对此项杂质进行限度检查。检查方法 取本品的细粉1.0g ,置具塞离心管或试管中，加乙醴5ml, 立即密塞，振摇30分钟，离心或放置澄清，取上精液作为供试品溶液； 另取每1ml中含对氯乙酰苯胺1.0mg的乙醇溶液适量，用乙醴稀释成每 1ml中含50卜g的溶液作为对照液。吸取供试品溶液 200仙l与对照溶液 40口，分别点于同一硅胶GF254薄板上。以氯仿丙酮一甲苯（13:5:2） 为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯（254nn）下检视，供试品溶液如 显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更大，更深。（3）对氨基酚 本品在合成过程中，由于乙酰化不完全或贮藏不当 发生水解，均可引入对氨基酚，使本品产生色泽并对人体有毒性，应严格控制其限量。利用对氨基酚在碱性条件下可与亚硝基铁氟化钠生成蓝 色配位化合物，而对乙酰氨基酚无此反应的特点，与对照品比较，进行 限量检查。检查方法 取本品1.0g,加甲醇溶液（1 -2） 20ml溶解后，加碱性 亚硝基铁氟化钠试液1ml,摇匀，放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚 对照品1.0g加对氨基酚50卜g用同一方法制成的对照液（临用配制）比 较，不得更深（0.005 %）。2、盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查普鲁卡因分子结构中有酯键，易发生水解反应。其注射液制备过程中受灭菌温度、时间、 溶液pH值、贮藏时间以及光线和金属离子等因素的影响，可发生水解反 应生成对氨基苯甲酸和2-二乙氨基醇。其中对氨基苯甲酸随贮藏时间的 延长或高温加热，可进一步脱竣转化为苯胺，而苯胺又可被氧化为有色 物，使注射液变黄，疗效下降，毒性增加。故中国药典90年版规定，本品注射液应检查水解产物对氨基苯甲酸，其限度不得超过1.2%。检查方法 精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml中含盐酸普鲁卡 因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成 每1ml中含30 pg的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶液各 10口， 分别点于含有竣甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸一丙酮一甲醇（14:1:1:4 ）为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲 氨基苯甲醛溶液（2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml,加入冰醋酸5ml 制成）喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜 色与对照品溶液主斑点比较，不得更深。25分钟（四）含量测定1、亚硝酸钠滴定法 本类药物分子结构中具有芳伯氨基或水解后具 有芳伯氨基，在酸性溶液中可与亚硝酸钠反应，可用亚硝酸钠滴定法测 定含量。由于本法适用范围广，常被国内外药典所采用。中国药典收载 用本法测定含量的有：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因及其片剂，盐酸普鲁卡因胺及其片剂与注射液，醋酸氨苯碉及其注射液。(1)原理 芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成 重氮盐，用永停法或外指示剂法指示反应终点。(2)测定的主要条件 重氮化反应的速度受多种因素的影响，亚硝 酸钠滴定液及反应生成的重氮盐也不够稳定，因此在测定中应注意以下 主要条件：1)加入适量澳化钾加快反应速度 在测定中一般向供试溶液中 加入适量澳化钾(中国药典规定加入 2g),使重氮化反应速度加快。2) 加过量盐酸加速反应：因胺类药物的盐酸盐较其硫酸盐的溶解度大，反 应速度也较快，所以多采用盐酸。盐酸的用量按其反应，1mol的芳胺需与2mol的盐酸作用，但实际测定时往往加入过量的盐酸，有利于：重 氮化反应速度加快；重氮盐在酸性溶液中稳定；防止生成偶氮氨基 化合物，而影响测定结果。酸度加大，反应向左进行，故可以防止偶氮 氨基化合物的生成。若酸度过大，又可阻碍芳伯氨基的游离，反而影响 重氮化反应速度。在太浓的盐酸中还可使亚硝酸分解。所以，加入盐酸 的量一般按芳胺类药物与酸的摩尔比约为 1:2.56。3)室温(1030C) 条件下滴定：通常温度高，重氮化反应速度快；但温度太高，可使亚硝 酸逸失，并可使重氮盐分解：一般温度每升高10C,重氮化反应速度加快2.5倍，但重氮盐分解的速度亦相应地加速 2倍；所以滴定一般在低 温下进行。由于低温时反应太慢，经试验，可在室温下进行。4)滴定管尖端插入液面下滴定：重氮化反应为分子反应，反应速度较慢，帮滴定 不宜过快。为了避免滴定过程中亚硝酸挥发和分解，滴定时将滴定管尖 端插入液面下约2/3处，一次将大部分亚硝酸钠滴定液在搅拌条件下迅 速加入，使其尽快反应。然后将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖 端，再缓缓滴定。尤其是在近终点时，因尚未反应的芳伯氨基药物的浓 度极稀，须在最后一滴加入后，搅拌15分钟，再确定终点是否真正到 达。这样可以缩短滴定时间，也不影响结果。(3)指示终点的方法 有电位法、永停滴定法、外指示剂法和内指示剂法等。药品标准中多采用永停滴定法或外指示剂法指示终点。1）永停滴定法：中国药典规定用永停法指示亚硝酸钠滴定法的终点。电极应 为柏-伯电极系统。用亚硝酸钠液滴定，终点前，溶液中无亚硝酸，线 路无电流通过，电流计指针指零。终点时溶液中有微量亚硝酸存在，电 极即起氧化还原反应，线路中遂有电流通过，此时电流计指针突然偏转， 并不再回复，即为滴定终点。2）外指示剂法：2、分光光度法对乙酰氨基酚在0.4 %氢氧化钠溶液中，于 257nm 波长处有最大吸收，具紫外吸收光谱特征，可用于其原料及其制剂的含 量测定。该法较亚硝酸钠滴定法灵敏度高，操作简便，因此被国内外药 典所收载。中国药典采用百分吸收系数法，测定对乙酰氨基酚原料、片 剂、注射液、栓剂及胶囊剂的含量。3、高效液相色谱法对乙酰氨基酚泡腾片、滴剂、及凝胶剂含量测定。教 案 末 页教学 小结一、芳胺类药物分析（一）结构与性质（二）鉴别试验（三）杂质检查（四）含量测定思考题 及 作业题1、盐酸普鲁卡因注射液应检查什么杂质？其原埋如何？2、对乙酰氨基酚含量测定方法是什么？教学 后记授课过程中，应把亚硝酸钠法作为重点内容进行教学。