药物分析抗生素

单击以编辑母版标题样式,单击以编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,抗生素类药物的分析,进入,返回主目录,思考与练习,第一节 概 述,第二节,内酰胺类抗生素,第三节 氨基糖苷类抗生素,第四节 四环素类抗生素,第五节 抗生素类药物中高分,子杂质的检查,基本要求,基本要求,一、掌握抗生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。,二、掌握抗生素类药物的鉴别原理与方法。,三、掌握抗生素类药物法定含量测定方法的原理、测定方法与计算。,四、熟悉抗生素类药物杂质检查的方法。,五、了解抗生素类药物中高分子聚合物检查。,返 回,第一节 概述,1.,抗生素药物的特点,化学纯度较低,活性组分易发生变异,稳定性差,2.,微生物学法与理化法的比较,微生物检定法,理化法,以抗生素对微生物的杀伤或抑制程,度为指标衡量抗生素的生物效价,根据抗生素结构特点，利用其,特有的理化性质测定其含量,已知或新发现的抗生素、精致品或,粗制品均能测定,测定化学结构已知、已提纯的,抗生素,灵敏度高、样品需用量小、反映抗,生素的医疗价值，但操作步骤多、,费时、,误差大,迅速、准确、专属性高、样品,需用量小、操作简单、省时,3.,抗生素的活性以效价单位来表示：,每,ml,或每,mg,中含有某种抗生素的有效成分的多少，用单位（,u,）或,g,表示。,1,mg,青霉素,G,钠盐定为,1667,单位,1,mg,青霉素,G,钾盐的单位（,u,）,=1667356.4/372.5=1595u/mg,分类,（按结构与性质）：,内酰胺类、氨基糖苷类、,四环素类、大环内酯类、,氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类,林可霉素类、其他抗生素类,返 回,第二节,内酰胺类抗生素,青霉素类,N,S,C,H,3,C,H,3,C,O,O,H,O,H,N,1,2,3,4,5,6,7,R,C,O,母核（,6-,氨基青霉烷酸）,A,B,头孢菌素类,A,B,青霉素,（青霉素钾、钠）,氨苄西林（氨苄青霉素）,阿莫西林（羟氨苄青霉素）,普鲁卡因青霉素,头孢氨苄,头孢拉啶,头孢羟氨苄,头孢噻吩钠,酸性,结构特点与性质,一、,Na,与碱金属,(Na,+,、,K,+,),成盐,（一）羧基,易溶于水,与有机碱,(,普鲁卡因,),成盐,难溶于水,普鲁卡因,青霉素,（二）,手性,C,头孢菌素类,C,6,C,7,青霉素类,C,3,C,5,C,6,旋光性,（三）共轭体系,头孢菌素类,母核有共轭体系,青霉素类,母核无明显,UV,多数有苯环取代基,UV,（四）,内酰胺环,水溶液,不稳定,干燥纯净,稳定,不稳定性因素,四元环张力大,酰胺键易水解,青霉素类,某些氧化剂,酸、碱、青霉素酶,（某些金属离子）,（温度）,降解失效,例,青霉素的降解反应,青霉素,青霉噻唑酸,H,2,O/OH,青霉素酶,青霉酸,H,2,O,pH2,100,青霉噻唑酰基羟胺酸,NH,2,OH,青霉烯酸,pH4,青霉胺,CO,2,青霉醛,HgCl,2,头孢菌素类,酸、碱、胺类,-,内酰胺酶,降解失效,（一）呈色反应,1.,羟肟酸铁反应,-,内酰胺类,呈色,羟肟酸衍生物,Fe,3+,/3,H,+,鉴别试验,二、,NaOH,2,HCl,NOH,H,-,b,内酰胺类,H,+,Fe,3+,/3,（红、棕、褐）,2.,茚三酮,反应,-,氨基,-,氨基,茚三酮,蓝紫色,3.,双缩脲反应,似肽键,（开环分解）,-,内酰胺类,碱性酒石酸铜,紫,4.,与重氮苯磺酸反应,橙黄色,重氮苯磺酸,-,-,5,6,OH,H,C,（偶合）,酚羟基,头孢哌酮,5.,与变色酸,-,硫酸反应,活泼,“,-CH,2,-”,青霉素,阿莫西林,氨苄西林,（,分解,）,变色酸,显色,1.K,+,、,Na,+,的火焰反应,（二）各种盐的反应,焰色,鲜黄色,+,醋酸氧铀锌,黄,Na,+,焰色,紫色,+0.1%,四苯硼钠,+Ac,白,K,+,2.,沉淀反应（青霉素盐）,遇酸,在过量,HCl,或,有机溶剂中溶解,白,青霉素,青霉素钠,青霉素钾,緘,+,H,3.,重氮化,-,偶合反应,重氮化,-,偶合反应,芳伯氨基,4.,与三硝基苯酚反应,二苄基乙二胺,mp,三硝基苯酚,光谱法,（三）,1,、,UV,法,样品、分解产物,Cu,2+,头孢氨苄,max=262nm,青霉素,V,钠,A,280nm,/A,264nm,=1.30,1.50,pH3.8,分子重排,2,、,IR,法,3180cm,-1,N-H,内酰胺,C=O,1780cm,-1,3470cm,-1,O-H,1690cm,-1,仲酰胺,C=O,1250,cm,-1,C-O,以阿莫西林为例,色谱法,（四）,1,、,TLC,法,对照品对照法,2,、,HPLC,法,三、杂质检查,药物,检查项目,检查方法,头孢他啶 聚合物,HPLC,法 头孢曲松钠 头孢哌酮钠 头孢噻肟钠 头孢呋辛酯 有关物质和异构体,HPLC,法 头孢氨苄 有关物质 反相,TLC,法 青霉素钾（钠）吸收度 紫外分光光度法,1.,头孢他啶聚合物的测定,固定相：葡聚糖凝胶,G-10,（,40120,m,）流动相,A,：,3.5%,硫酸铵的,0.01mol/L,磷酸盐缓冲液 流动相,B,：,0.01%,十二烷基硫酸钠 对照品溶液：头孢他啶对照品,100,g/ml,1,）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子用,1mg/ml,蓝色葡聚糖,2000,、流动相,A,测定；重复性用对照品溶液、流动相,B,测定。,N,不低于,900,，拖尾因子,0.,751,.5,，峰面积的,RSD,应小于,5.0%,。,2,）测定方法 进样供试液，用流动相,A,；进样对照液，用流动相,B,。以外标法计算，含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超过,0.3%,。,2.,头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查,固定相：,ODS,流动相：,0.2mol/L,磷酸二氢铵,-,甲醇（,62:38,）,1,）头孢呋辛酯,2,-,异构体的制备：头孢呋辛酯对,照品,+,流动相 头孢呋辛酯,2,-,异构体。,2,）系统适用性试验：各异构体之间的,R1.5,，以,头孢呋辛酯,A,异构体计算,n1500,。,3,）异构体：,t,R1,相对保留时间,r,12,=-1-,被测物,t,R2,2-,标准物,异构体 相对保留时间 判断,B,异构体,0.85,供试液谱图中,A,异构体的峰面积,A,异构体,1.0,与,A,、,B,异构体峰面积和之比应,为,0.,480,.55,。,3.,头孢氨苄中有关物质的检查,-,反相,TLC,法,固定相：活化后的硅胶,G,板置,5%,（,V/V,）正十四,烷的正己烷溶液中，展至顶部，凉干,展开剂：,0.1mol/L,枸橼酸,-0.2mol/L,磷酸氢二,钠,-,丙酮（,120,：,80,：,3,）供试液：本品,50mg/ml,对照液（,1,）：本品,0.5 mg/ml,对照液（,2,）：,-,苯甘氨酸,0.5 mg/ml,对照液（,3,）：,7-,氨基去乙酰氧基头孢烷酸,0.5 mg/ml,结果判断,：供试液如显杂质斑点，与对照液（,2,）（,3,）位置相同上所的斑点比较，其颜色不得更深；如显其他杂质斑 点，与对照液（,1,）所显的主斑点比较，其颜色不得更深。,4.,青霉素钠（钾）的吸收度检查：,供试液,1.80mg/ml,，结果判断：,A,280,不得大于,0.10,-,8,I,2,4,I,碘量法,（,一,）,1.,原理,水解产物,定量过量,剩余,ChP,四、含量测定,（,水解,）,NaOH,头孢菌素族,青霉素族,反应分两步进行：,1.,水解反应,(,按化学计算量进行,),2.,氧化,-,还原反应,(,无固定的量关系，受温度、,PH,值和时间等因素影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定,),第一步,第二步,V,样空,V,样,对照液,+,缓冲液,+,碘液,+,回滴,+,碱,+,酸,+,缓冲液,+,碘液,+,回滴,V,对空,V,对,2.,方法,供试液,+,缓冲液,+,碘液,+,回滴,+,碱,+,酸,+,缓冲液,+,碘液,+,回滴,空白试验,A,、,消除样品已降解产物的干扰,B,、,消除样品中其他消耗碘的杂,质的干扰,C,、,消除碘挥发造成的误差,以未经水解的样品作空白测定,空白,样品,I,2,Na,2,S,2,O,3,I,-,I,2,采用标准品平行对照测定,A,、,可消除温度、,pH,、操作、环,境等条件的影响,B,、,使本法测定结果与微生物检定,法一致,3.,条件,（,1,）,弱酸性,pH4.5,碱,I,2,IO,3,-,+I,-,酸,普鲁卡因与碘在酸性条件,下会产生复盐沉淀,（,2,）,温度,24,26,温度,38,未水解的供试品亦消耗碘,（,3,）,水解时间,以水解,20,分钟后的,耗碘量最大,（,4,）,反应时间,反应,20,分钟后，,耗碘量随时间的,变化较小，可减小含量测定的误,差。,4.,特点,（,1,）,灵敏度高,样品,:,碘,=1:8,（,2,）,反应条件、实验操作要求高,V,对,、,V,对空,V,样,、,V,样空,1,份含量,加试剂次序、反应时间、滴定速度相同,4I,2,8I,-,5.,计算,原料,制剂,电位配位滴定法（汞量法）,（,二,）,1.,原理,SH,R,OH,-,-,青霉素族,（,水解,）,青霉素族,ChP,2.,方法,醋酸盐缓冲液,pH4.6,滴定,水解,(,降,),空,醋酸盐缓冲液,V,(NO,3,),2,Hg,pH4.6,滴定,样,品,以未经水解的样品作空白测定,3,、,讨论,（,1,）,水解必须完全,（,2,）,汞盐滴定液用,EDTA,标定,（,3,）,空白试验 消除已降解产物干扰,（,4,）,优点,不需标准品,4,、,计算,可见,-,紫外分光光度法,（,三,）,1,、,酸水解,-,铜盐法,稳定剂,nm,Cu,pH,A,320,4,+,2,青霉烯酸,青霉素族,（水解）,2,、,硫醇汞盐法,（,1,）,原理,青霉烯酸硫醇汞盐,青霉素族,HgCl,2,（,咪唑,）,咪唑,（,2,）,方法,对照品法,计算,pH 9,（,3,）,注意,侧链有,-NH,2,时，需加醋酐先,将其乙酰化后才能发生上述,反应,pH9,3,、,羟肟酸比色法,Fe,3+,/3,H,+,红色,NaOH,HCl,NOH,H,2,-,b,内酰胺类,羟肟酸衍生物,HPLC,法,（,四,）,ChP,内标法校正因子,外标法,特点,快速、高效、灵敏,专属性强、重现性好,一法多用（鉴别、检查、含测）,返 回,第三节 氨基糖苷类抗生素,链霉素 双氢链霉素,新霉素 卡那霉素,庆大霉素 巴龙霉素,链霉素,链霉胍,+,链霉糖,+,N-,甲基,-L-,葡萄糖胺,苷元,糖,链霉双糖胺,链霉胍,链霉糖,N-,甲基,-L-,葡萄糖胺,链霉胍,链霉糖,N-,甲基,-L-,葡萄糖胺,巴龙霉素,D-,葡萄糖胺,+,脱氧链霉胺,+D-,核糖,+,巴龙霉糖,巴龙胺,苷元,巴龙二糖胺,糖,D-,葡萄糖胺,脱氧链霉胺,D-,核糖,巴龙霉糖,庆大霉素,糖,苷元,绛红糖胺,+,脱氧链霉胺,+,加洛糖胺,糖,绛红糖胺,紫素胺,2-,脱氧链霉胺,加洛糖胺,N-,甲基,-3-,去氧,-4-,甲,基戊糖胺,绛红糖胺,紫素胺,2-,脱氧链霉胺,加洛糖胺,N-,甲基,-3-,去氧,-4-,甲,基戊糖胺,庆大霉素,C,复合物,庆大霉素,C,1,R=H,R,1,、,R,2,=CH,3,庆大霉素,C,2,R=R,2,=H,R,1,=CH,3,庆大霉素,C,1a,R,、,R,1,、,R,2,=H,庆大霉素,C,2a,R=CH,3,R,1,=R,2,=H,庆大霉素,C,2b,R=R,1,=H,R,2,=CH,3,一,、,结构与性质,多与硫酸成盐,链霉素,3,个,庆大霉素,5,个,碱性中心,碱性,（一）,水溶性,溶解性,（二）,链霉素,pH5,7.5,庆大霉素,pH2,12,稳定,稳定性,（,四,）,UV,（,三,）,坂口反应,N-,甲基葡萄,糖胺反应,麦芽酚反应,二,、,鉴别,茚三酮反应,（,一,）,羟基胺结构,Molisch,试验,（,二,）,氨基糖苷类,H,+,糠醛,羟甲基糠醛,-,萘酚,蒽