实验一光学显微镜技术

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,细胞生物学实验,2014,实验报告,六、作业,一、实验目的,二、实验原理,三、实验材料,五、实验结果及分析,四、实验步骤,实验一 光学显微镜技术,实验目的,了解普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜和微分干涉显微镜的构造、工作原理和使用方法。,学习测微尺的用法并测量细胞的大小。,显微镜,目镜测微尺,(eyepieces or,ocular micrometer),镜台测微尺（,stage micrometer,）,载玻片,盖玻片等。,实验用品,夹竹桃叶片横切片,实验材料,小肠切片,鸡红细胞,洋葱,采鸡血（阿氏液：血,2,：,1),(,阿氏液 红细胞保存液：葡萄糖,2.05g,柠檬酸钠,0.88g,氯化钠,0.42g,加蒸馏水至,100ml,，过滤分装，灭菌后在,0,4,冰箱中可保存两周。,),普通光学显微镜,光镜主要由三部分组成：,（1）光学放大系统：目镜与物镜,（2）照明系统,（3）机械和支架系统,调节光瞳间距，使,左、右两个视场像合二为一,;,调节屈光度,以适应观察者的视力，调节方法随镜的不同而不同,.,物镜标示,将,孔径光阑,缩至物镜数值孔径的60%80%或合适的范围。,注意：当物镜或标本更换时，需重新调节视场光阑和孔径光阑。,注意事项,移动显微镜，一手托镜座，一手拿镜臂,!,更换物镜时，转动,物镜转换盘,!,使用油镜后，用镜头液清洗镜头。只有,100,倍物镜为油镜,，在低倍镜下调焦清晰后，再转到油镜,!,固定切片不要使用油镜,!,暗视野显微镜,原理：,利用暗视野聚光器使入射光束从聚光器斜向照明样品，使之发出反射和散射光。由样品发出的散射光和反射光形成了明亮的物体影象。背景是黑暗的。,相差显微镜,原理：,利用相差装置将透过细胞标本不同区域（密度不同）的光的光程差变成振幅差，从而使细胞内的各种结构之间呈现出清晰可见的明暗差异的显微镜。,在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处：,1.,环形光阑,（,annular diaphragm,）,位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。,2.,相位板,（,annular phaseplate,）,在物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟,1/4,。分为两种：,A+,相板：将直射光推迟,1/4,，两组光波合轴后光波相加，振幅加大，标本结构比周围介质更加变亮，形成亮反差（或称负反差）。,B+,相板：将衍射光推迟,1/4,，两组光线合轴后光波相减，振幅变小，形成暗反差（或称正反差），结构比周围介质更加变暗。,微分干涉显微镜,DIC,利用的是偏振光，有四个特殊的光学组件：偏振器（,polarizer,）、,DIC,棱镜、,DIC,滑行器和检偏器（,analyzer,）。偏振器直接装在聚光系统的前面，使光线发生线性偏振。优点是能显示结构的三维立体投影影像。,四种不同显微镜显微镜所拍摄的体外培养成纤维细胞图像比较,（A）,普通明视场显微镜,（,B）,相差显微镜,（,C）,微分干涉显微镜,（,D）,暗场显微镜,实验内容和方法,细胞形态的观察,细胞大小的测量,不同形状的动植物细胞,一、细胞观察,动物细胞的观察,植物细胞的观察,小肠切片,:,细胞的形状，细胞核，核仁，细胞质,鸡血红细胞,:,红细胞的特点,夹竹桃叶横切片,:,表皮细胞和叶肉细胞,洋葱表皮细胞,:,内表皮细胞,1,、红细胞,2,、中性粒细胞,3,、嗜酸性粒细胞,4,、嗜碱性粒细胞,5,、单核细胞,6,、淋巴细胞,7,、异嗜性粒细胞,8,、凝血细胞,Onion epidermal cells,二、细胞测量,如何使用测微尺,?,如何测量细胞的大小,?,如何计算细胞的大小,?,如何使用测微尺,?,目镜测微尺（,Eyepiece micrometer,）,镜台测微尺（,Stage micrometer,）,目镜测微尺,镜台测微尺,镜台测微尺的格数,目镜测微尺每格的微米数,=-,10,目镜测微尺的格数,如何测量细胞的大小,?,测量一个洋葱表皮细胞的大小,如何计算细胞的体积,?,椭球形,V=4,ab,2,/3,圆球形,V=4/3,r,3,圆柱形,V=,r,2,h,*a:,长半径,;b:,短半径；,r:,半径,;h:,高,作 业,物镜,目镜测微尺的格数,镜台测微尺的格数,目镜测微尺每格的微米数,4X,10X,40X,计算不同倍数物镜下，一格目镜测微尺所代表的长度,。,暗视野、相差、微分干涉显微镜与普通光学显微镜相比在结构上有何特点及用途。,绘洋葱表皮细胞的,模式图,，计算细胞的面积，注明物镜的倍数；说明动物细胞和植物细胞的异同点,。,1,2,3,4,5,平均,长,宽,镜油瓶的使用方法,(1),(2),(3),(4),(5),(6),(7),镜油瓶的使用方法,细胞生物学实验绘图方法与要求,二、用铅笔绘图，线条要明确清晰，图的深浅明暗一律以点的疏密来表,示，点要圆而一致，不得涂暗影或进行其它美术加工。,一、在仔细观察的基础上，选择典型结构进行描绘，要求真实、准确,(,注意各部结,构的比例关系,),。,三、,各部结构名称要在一侧引直线注明。各引线要平行不得交叉。,四、每幅图的大小、位置在纸面上必须安排得当并注意纸面的整洁。,五、绘图完成后在图的下方注明,图名,及,放大倍数,。,