农产品分析3-2

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第三节,氨,氨,基,基酸的,测,测定,氨基酸,分,分析,氨基酸,是,是组成,蛋,蛋白质,的,的基本,单,单位，,也,也是蛋,白,白质的,分,分解产,物,物。全,氨,氨基酸,和,和个别,氨,氨基酸,的,的分析,测,测定是,研,研究蛋,白,白质、,酶,酶的化,学,学组成,及,及性质,的,的重要,手,手段。,生物学,及,及农业,科,科学的,许,许多领,域,域都需,要,要分析,氨,氨基酸,，,，在评,价,价谷物,的,的蛋白,质,质营养,价,价值时,需,需要测,定,定游离,氨,氨基酸,及,及蛋白,质,质中氨,基,基酸的,组,组成。,动植物,产,产品中,的,的氨基,酸,酸以多,种,种形式,存,存在，,大,大致可,分,分为构,成,成蛋白,质,质的氨,基,基酸和,游,游离氨,基,基酸两,种,种。另,外,外，还,有,有微量,的,的由肽,键,键连接,的,的几个,氨,氨基酸,，,，以及,与,与糖或,脂,脂结合,在,在一起,的,的。在,人,人类和,动,动物营,养,养学上,，,，各种,氨,氨基酸,含,含量的,高,高低是,很,很重要,的,的，特,别,别是几,个,个限制,性,性氨基,酸,酸。若,缺,缺乏这,些,些氨基,酸,酸，人,与,与动物,不,不仅不,能,能发育,，,，还会,引,引起某,些,些疾病,，,，而这,些,些氨基,酸,酸在贮,存,存和加,工,工过程,中,中极易,损,损失破,坏,坏。,测定它,们,们的含,量,量已成,为,为衡量,谷,谷物、,饲,饲料蛋,白,白质,的重要,标,标准之,一,一。,成人必,需,需氨基,酸,酸共有,种：赖氨酸,、,、色氨,酸,酸、苯,丙,丙氨酸,、,、蛋氨,酸,酸、苏,氨,氨酸、,异,异亮氨,酸,酸、亮,氨,氨酸、,缬,缬氨酸,。,。,如果饮,食,食中经,常,常缺少,上,上述氨,基,基酸，,可,可影响,健,健康。,对,对婴儿,来,来说，,组,组氨酸,也,也是必,需,需氨基,酸,酸。,必需氨基酸,的,的种类、数,量,量及构成比,例,例，越接近,机,机体合成蛋,白,白质所需的,各,各种氨基酸,的,的量及其组,成,成则机体对,氨,氨基酸的利,用,用率越高。,氨基酸的测,定,定,氨基酸分析,方,方法包括测,定,定氨基酸总,含,含量及测定,全,全氨基酸中,每,每种氨基酸,含,含量两个方,面,面。,测定氨基酸,总,总量的方法,与,与蛋白质分,析,析有密切关,系,系，许多测,定,定蛋白质全,氮,氮含量的方,法,法如凯氏定,氮,氮法及各种,比,比色法均可,用,用于测定氨,基,基酸的总含,量,量。,此外，测定,氨,氨基酸总含,量,量的方法还,有,有氨基酸的,甲,甲醛滴定法,及,及茚三酮比,色,色法。,有关氨基酸,的,的测定方法,很,很多，近些,年,年来氨基酸,分,分析采用了,一,一系列微量,分,分析及高效,率,率的分离方,法,法。,例如，薄层,层,层析、气相,色,色谱、液相,色,色谱、氨基,酸,酸自动分析,仪,仪等方法。,氨基酸自动,分,分析仪是测,定,定氨基酸的,专,专门仪器,氨,氨基,酸自动分析,仪,仪的,最大优点是,氨,氨基酸不用,衍,衍生,可直,接,接对其分离,从而避免了,由,由于衍生所,造,造成的测定,误,误差，因其,方便、快捷,、,、准确,实,现,现多种氨基,酸,酸的同时测,定,定,，已广泛应用,于,于各个行业,测,测定氨基酸,。,。,原理,氨基酸分析,仪,仪的中心是,离,离子交换层,析,析柱，当流,动,动相（缓冲,溶,溶液）推动,氨,氨基酸流经,装,装有阳离子,交,交换树脂的,色,色谱柱时（,日,日立835-50为磺,酸,酸型Na,+,柱），氨基,酸,酸与树脂中,的,的交换基团,进,进行离子交,换,换，当用不,同,同的PH值,的,的缓冲溶液,进,进行洗脱时,，,，因交换能,力,力不同而将,氨,氨基酸混合,物,物分开。,非极性氨基,酸,酸,甘氨酸、丙,氨,氨酸、缬氨,酸,酸、亮氨酸,、,、异亮氨酸,、,、苯丙氨酸,、,、脯氨酸,极性氨基酸极性中性氨,基,基酸：,色氨酸、酪,氨,氨酸、丝氨,酸,酸、半胱氨,酸,酸、蛋氨酸、,天,天冬酰胺、,谷,谷氨酰胺、,苏,苏氨酸,酸性氨基酸,：,：,天冬氨酸、,谷,谷氨酸,碱性氨基酸,：,：,赖氨酸、精,氨,氨酸、组氨,酸,酸,其中：属于,芳,芳香族氨基,酸,酸的是：,色氨酸、酪,氨,氨酸、苯丙,氨,氨酸,属于亚氨基,酸,酸：,脯氨酸,含硫氨基酸,：,：,半胱氨酸、,蛋,蛋氨酸,洗脱的顺序,为,为,：,酸性氨基酸,和,和极性较大,的,的氨基酸,其,其次是非极,性,性的和芳香,性,性氨基酸，,最,最后是碱性,氨,氨基酸（赖,氨,氨酸、精氨,酸,酸、组氨酸,）,）,。相对分子,质,质量小的比,相,相对分子质,量,量大的先下,来,来，被洗脱,的,的氨基酸用,茚,茚三酮显色,，,，进行定量,比,比色分析。,利用经硫化,的,的阳离子交,换,换柱,可分,离,离二十多种,氨,氨基酸,将,分,分离得到的,氨,氨基酸与水,合,合茚三酮反,应,应生成兰紫,色,色化合物,在可见,光,光范围(570nm和440nm)测定吸光,度,度,从而完,成,成检测和定,量,量测定。,与氨基酸的,标,标准溶液相,比,比较,从而,确,确定各种氨,基,基酸的含量,，,，根据与标,样,样物比较相,对,对保留时间,和,和加入标样,使,使峰增高法,进,进行定性,采,采用内标和,标,标准曲线法,进,进行定量。,内标法,:,内标法是将,一,一定量的纯,物,物质作为内,标,标物,加入,到,到准确称量,的,的试样中,根,根据被测物,和,和内标物的,质,质量及在色,谱,谱图的峰面,积,积或峰高的,变,变化,就可,以,以看出标准,品,品和样品进,样,样体积的差,别,别。,内标物要满,足,足以下要求,：,：,1.试样中,不,不含有该物,质,质；,2.与被测,组,组分性质比,较,较接近；,3.不与试,样,样发生化学,反,反应；,4.出峰位,置,置应位于被,测,测组分附近,，,，且无组分,峰,峰影响。,试样配制：,准,准确称取一,定,定量的试样,W,，加入一定,量,量内标物,m,S,外标法也称,为,为标准曲线,法,法:,外标法就是,用,用标准品的,峰,峰面积或峰,高,高与其对应,的,的浓度作一,条,条标准曲线,测出样品,的,的峰面积或,峰,峰高,在标,准,准曲线上查,出,出其对应的,浓,浓度,特点及要求,：,：,1.,外标法不使,用,用校正因子,，,，准确性较,高,高，,2.操作,条,条件变化对,结,结果准确性,影,影响较大。,3.对进样,量,量的准确性,控,控制要求较,高,高，适用于,大,大批量试样,的,的快速分析,。,。,测定,样品处理,除去脂肪等,杂,杂质后的待,测,测样品，可,直,直接上柱分,析,析。,若测定蛋白,质,质样品的氨,基,基酸组成，,必,必须经酸水,解,解把蛋白质,完,完全变成游,离,离氨基酸后,才,才能上柱分,析,析,。蛋白质中的,胱氨酸、半,胱,胱氨酸、蛋,氨,氨酸和色氨,酸,酸,在酸水解条,件,件下不稳定,，,，需采用另外,的,的处理方法,，,，即,胱氨酸、半,胱,胱氨酸和蛋,氨,氨酸首先在,控,控制条件下,用,用过甲酸氧,化,化,，使它们转变,为,为对酸稳定,的,的氧化物磺,基,基丙氨酸和,蛋,蛋氨酸砜，然后,再用盐酸水,解,解法,从蛋白质中,分,分离出来.,色,氨,氨,酸,酸,则,则,采,采,用,用,碱,碱,水,水,解,解,法,法,从,蛋,蛋,白,白,质,质,中,中,分,分,离,离,出,出,来,来,。,。,样,品,品,分,分,析,析,把,经,经,处,处,理,理,后,后,的,的,样,样,品,品,上,上,柱,柱,分,分,析,析,，,，,上,上,柱,柱,的,的,样,样,品,品,量,量,视,视,自,自,动,动,分,分,析,析,仪,仪,的,的,灵,灵,敏,敏,度,度,而,而,定,定,。,。,一,一,般,般,为,为,每,每,种,种,氨,氨,基,基,酸,酸,0.1nmol,左,右,右(,水,水,解,解,样,样,品,品,干,干,重,重,约,约,0.3mg,),。,。,根,据,据,峰,峰,出,出,现,现,的,的,时,时,间,间,来,来,确,确,定,定,氨,氨,基,基,酸,酸,的,的,种,种,类,类,，,，,从,峰,峰,的,的,高,高,度,度,和,和,宽,宽,度,度,可,可,算,算,出,出,各,各,种,种,氨,氨,基,基,酸,酸,的,的,精,精,确,确,含,含,量,量,。,实,验,验,条,条,件,件,实,验,验,仪,仪,器,器:HITACHI835-50,型,型,高,高,速,速,氨,氨,基,基,酸,酸,自,自,动,动,分,分,析,析,仪,仪,色,谱,谱,条,条,件,件:,色,色,谱,谱,柱,柱:2.6mmID,150mm;,柱,柱,温,温:53,;,流,速,速:0.225mL/min,。,。,测,定,定,条,条,件,件,：,：,必,必,须,须,在,在pH5,5.5,，,，100,下,下,进,进,行,行,反,反,应,应,时,时,间,间,为,为10,15min,，,，,生,生,成,成,的,的,紫,紫,色,色,物,物,质,质,在,在570nm,下,下,进,进,行,行,比,比,色,色,测,测,定,定,。,。,其,其,生,生,成,成,的,的,黄,黄,色,色,化,化,合,合,物,物,在,在440nm,下,下,进,进,行,行,比,比,色,色,测,测,定,定,。,。,样,品,品,中,中,氨,氨,基,基,酸,酸,的,的,浓,浓,度,度,835-50,型,型,号,号,氨,氨,基,基,酸,酸,分,分,析,析,仪,仪,器,器,的,的,氨,氨,基,基,酸,酸,适,适,宜,宜,浓,浓,度,度,为,为1-10nmol/50ml,，,，,脯,脯,氨,氨,酸,酸6nmol,50ml,。,。,缓,冲,冲,液,液,的,的pH,与,与Na,+,浓,度,度,溶,液,液,的,的pH,值,值,和,和,钠,钠,离,离,子,子,浓,浓,度,度,对,对,氨,氨,基,基,酸,酸,的,的,分,分,离,离,有,有,很,很,大,大,关,关,系,系,，,，,配,配,制,制,不,不,当,当,会,会,影,影,响,响,峰,峰,的,的,位,位,置,置,，,，,甚,甚,至,至,会,会,使,使,个,个,别,别,氨,氨,基,基,酸,酸,丢,丢,失,失,，,，,因,因,此,此,应,应,特,特,别,别,精,精,心,心,配,配,制,制,。,。,柱温,氨,氨基,酸,酸的,分,分离,与,与柱,温,温有,关,关,835型,氨,氨基,酸,酸分,析,析仪,柱,柱温,规,规定53,.,树脂,的,的污,染,染,污染,的,的树,脂,脂也,会,会使,分,分辨,率,率降,低,低。,微,微生,物,物、,蛋,蛋白,质,质污,染,染（,游,游离,氨,氨基,酸,酸样,品,品）,、,、金,属,属离,子,子污,染,染、,油,油腻,污,污染,等,等。,除氨,在色,谱,谱柱,前,前附,加,加一,除氨,柱,柱,，除,去,去缓,冲,冲液,、,、试,样,样或,流,流路,系,系统,中,中混,入,入的,氨,氨，,防,防止,氨,氨在,分,分离,过,过程,中,中被,洗,洗脱,下,下来,。,。因,此,此，,除,除氨,柱,柱可,重,重复,连,连续,使,使用,。,。,茚三,酮,酮的,氧,氧化,茚三,酮,酮很,易,易氧,化,化，,氧,氧化,后,后显,色,色效,率,率降,低,低，,甚,甚至,变,变质,失,失效,。,。因,此,此，,除,除注,意,意N,2,气保,护,护外,，,，茚,三,三酮,试,试剂,不,不可,过,过量,配,配制,和,和长,期,期使,用,用,。,柱层,析,析的,阳,阳离,子,子交,换,换树,脂,脂,是磺,酸,酸型,强,强阳,离,离子,交,交换,树,树脂,（,（苯,乙,乙烯-二,乙,乙烯,基,基苯,）,）。,定,量,量,测,测,定,定,的,的,依,依,据,据,是,氨,氨,基,基,酸,酸,和,和,茚,茚,三,三,酮,酮,反,反,应,应,生,生,成,成,紫,色,色,化,化,合,