动物细胞融合与单克隆抗体第二课时

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,一、动物细胞融合,1.概念：,动物细胞融合（cell fusion）也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为,杂交细胞,。,2、原理：,细胞膜的流动性,动物细胞融合与单克隆抗体,诱导方法：,物理方法：,化学法：,生物法：,灭活的病毒,电激等,聚乙二醇（PEG),3.融合过程：,诱导融合的方法？灭活病毒,植物细胞杂交与动物细胞融合的比较,比较项目,植物体细胞杂交,动物细胞融合,原理,融合前处理,使用的酶,诱导方法,主要用途,细胞膜的流动性细胞的全能性,细胞膜的流动性,纤维素酶、果胶酶,物理方法,（,离心、振荡、电激）,化学方法（,PEG,）,物理、化学方法,灭活的病毒,获得杂种植株,制备单克隆抗体,去除细胞壁后诱导原生质体融合,使细胞分散后诱导细胞融合,4.意义：,突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。,5.应用：,最重要的用途是,制备单克隆抗体,思考,？,1.抗体由何种细胞产生？,如何产生,？,2.抗体,的化学本质是什么？,与抗原作用的特点？,主要分布在哪里？,3.用传统的方法如何获得抗体,？,二、单克隆抗体的制备,抗体的传统生产方法,从,血清,中分离抗体,该法制备抗体的特点：,产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。,多种效应B细胞,动物体内,多种抗体,抗原,单克隆抗体的制备,单克隆,抗体,:,单个细胞克隆产生的,化学性质单一,特异性强的抗体,利用效应B细胞产生抗体的功能,利用肿瘤细胞无限增殖的特性,利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞,利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞,设计方案：,单克隆抗体的制备,过程,杂交,细胞,灭活的病毒等手段,小鼠骨髓瘤细胞,B淋巴细胞,经免疫,的小鼠,提取,杂交瘤,细胞,第一次筛选,用特定的,选,择性培养基,第二次筛选,能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞,体外培养,注射到小鼠腹腔,提取单克隆抗体,整个制备过程为何要经过两次筛选？,第一次,筛选得到杂交瘤细胞（多种），,在特定的,选择性培养基,上,未融合的亲本细胞(浆细胞和骨髓瘤细胞)和融合的具有同种核的细胞(BB融合细胞、瘤瘤融合细胞)都会死亡,只有融合的杂种细胞(,杂交瘤细胞,)才能生长。,第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再,筛选出能产生特异性抗体的细胞群,。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的,单克隆,确有,单个细胞,克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是,杂交瘤细胞,。,植物体细胞杂交,动物细胞融合(单克隆抗体的制备),过程,第一步,原生质体的制备(酶解法),正常小鼠免疫处理,第二步,原生质体的融合(物、化法),动物细胞的融合(物、化、生法),第三步,杂种细胞的筛选与培养,杂交瘤细胞的筛选与培养,第四步,杂种植株的诱导与鉴定,单克隆抗体的提纯,意义和用途,(1)克服远源杂交不亲和的障碍，大大扩展了杂交的亲本组合范围,(2)克服有性杂交的母系遗传现象，获得细胞质基因的杂合子，研究细胞质遗传,(1)制备单克隆抗体等,(2)诊断、治疗、预防疾病,三、,单克隆抗体的应用,（1）作为诊断试剂,最广泛应用,准确、高效、简易、快速,（如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）,（2）运载药物,生物导弹=单克隆抗体+药物，,治疗肿瘤）,(“生物导弹”,单抗导向，药物为弹头),B,体外培养,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞,足够数量的细胞群,注射到,小鼠腹腔,A,C,下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌单克隆抗体的实验方案,2、该方案能达到预期效果吗？为什么？,4、图中B为_过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能_,又能_。,1、该实验方案的目的是_,3、A是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生_,5、C过程指细胞培养，该过程包括_培养和_培养两个阶段，其中_代以内的的细胞属于细胞株。,制备单克隆抗体,B细胞,抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,50,例1：,1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）,A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的淋巴细胞,A,巩固练习,2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）,诱导融合的方法完全相同,B.,所用的技术手段基本相同,C.,操作步骤基本相同,D.,都能形成杂种细胞,D,3.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（）,A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合,B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成,C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成,D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成,D,4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（）,APEG B灭活的病毒 C电刺激 D离心,B,5.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （）,淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞,小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞,A.B.,C.D.,C,6.“生物导弹”是指（）,A.单克隆抗体,B.杂交瘤细胞,C.产生特定抗体的B淋巴细胞,D.在单克隆抗体上连接抗癌药物,D,A、B细胞为动物细胞,请据图回答问题:,A细胞,B细胞,C细胞,D细胞,(1)若A细胞为骨髓瘤细胞B细胞为淋巴细胞,那么D细胞称为,细胞,D细胞具有两个亲本细胞的特征,一方面因具有骨髓瘤细胞的,性质,通过,方式产生大量细胞,我们称之为,过程;另一方面能分泌大量的抗体,我们把该过程分泌的抗体称,.,杂交瘤,连续分裂,有丝分裂,单克隆,单克隆抗体,练一练,(2)D细胞中产生的抗体其化学本质是,合成该物质的场所是,它是由,控制合成的,合成过程包括,和,两个重要步骤.,球蛋白,核糖体,基因,转录,翻译,(3)D细胞中产生的抗体具有,作用,与血清抗体相比其优越之处在于,强,高.,免疫,特异性,灵敏度,(4)若A为人细胞,B为鼠细胞,用同位素标记A细胞膜上的蛋白质,B不标记,在C细胞时,检测结果发现整个细胞一半有放射性另一半没有.在D细胞时,检测结果发现整个细胞都有放射性,请解释原因,.,构成细胞膜的蛋白质分子大都可以流动,