一轮复习微生物的培养

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,课题1 微生物的实验室培养,专题,2:,微生物的培养与应用,微生物包括哪五类：,病毒,细菌,放线菌,真菌,原生动物,特点：,结构都相当简单,个体多数十分微小,.,通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构,.,且体内一般不含有叶绿素,.,不能进行光合作用,.,原核生物界,原生生物界,真菌界,病毒界,一、基础知识：,(,一,),微生物,芽孢,有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的,休眠体，叫做芽孢。,芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸,3,小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌,.,菌落：,单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的,子细胞群体，,叫做菌落,。,菌落是鉴定菌种的重要依据。,菌落,细菌的,菌落特征因种而异,细菌的代谢类型,根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。,自养菌,:,分类,举例,?,异养菌,:,腐生菌,寄生菌 大部分病原菌,光合自养型,:,光合细菌,化能自养型,:,硝化细菌,铁细菌,硫细菌,真菌,（二）培养基,1.,定义：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。,2.,营养组成：一般都含有,水、碳源、氮源,和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对,PH,、氧气以,特殊营养物质,的要求。,误认为所有微生物培养基中均需加入,“,生长因子,”,点拨,碳源、氮源、水分、无机盐、生长因子是微生物生长必需的五大营养成分，但大多数培养基中都含碳源、氮源、水分、无机盐四类物质，可能不需额外添加,“,生长因子,(,如维生素,),”,，,这是因为许多微生物可自行合成这些生长因子，而对那些合成能力有限或不能合成生长因子的微生物,(,如乳酸菌,),，则需在培养基中添加诸如维生素等生长因子。,3.,培养基的类型和用途,（1）按物理状态分：,固体培养基,和,液体培养基,。其中,固体培养基用于,菌种保存及分离、鉴定菌落、活菌计数等，,液体培养基常用于发酵工业。,（,2,）按成分分：,天然培养基,和,合成培养基。,合成培养基,:,根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。,优点：,标准化生产，组分和含量相对固定,;,成本低,缺点,：,缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。,天然培养基：,天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。,优点,：,营养成分丰富，培养效果好,缺点,：,来源受限,;,成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析,;,易发生支原体污染,;,（,3,）,选择培养基与鉴别培养基的比较,种类,制备方法,原理,用途,举例,选择培养基,培养基中加入,某些化学物质,依据某些微生物对某些物质或环境条件的嗜好、抗性而设计,从众多微生物中分离所需的微生物，并增加其数目,加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌,鉴别培养基,培养基中加入,某种指示剂或化学药品,依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中的特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计,鉴别不同种类的微生物,伊红美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌,选择培养基制备方法或实例,选择培养基的具体实例：,1.,加入青霉素的培养基：分离酵母菌、霉菌等真菌,2.,加入高浓度食盐的培养基：分离金黄色葡萄球菌,3.,只有尿素作为惟一氮源的培养基：分离出分解尿素的细菌,4.,不加氮源的无氮培养基：分离固氮菌,5.,只有纤维,素,作为惟一碳源的培养基：分离分解纤维素的细菌,6.,不加含碳有机物的无碳培养基,:,分离自养型微生物,（）,消毒定义：,指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物,。（,不包括芽孢和孢子）,消毒与灭菌的概念及两者的区别,（,2,）灭菌的定义,：,使用强烈的理化因素杀死物体内外,所有的,微生物，包括芽孢和孢子，而达到,完全无菌,之过程。灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。,条件,结果,常用方法,应用范围,消毒,较为温和的物理或化学方法,仅杀死物体表面或内部的部分微生物,煮沸消毒法,日常用品,巴氏消毒法,不耐高温的液体,化学药剂消毒法,用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源,灭菌,强烈的理化因素,杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子,灼烧灭菌法,接种工具,干热灭菌法,玻璃器皿、金属用具,高压蒸汽灭菌法,培养基及容器,项目,优点,缺点,适用范围,平板划线法,可以观察菌落特征，对混合菌进行分离,不能计数,适用于好氧菌,稀释涂布平板法,可以计数，可以观察菌落特征,吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延,适用于厌氧菌和兼性厌氧菌,不明确每次划线操作中,“,灼烧接种环,”,的目的或误认为划线结束后,“,不必灼烧接种环,”,平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的不同,第一次操作：杀死接种环上原有的微生物。,每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。,划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,（,一,）,筛 选 菌 株,原理,它的氮源只含有尿素，只有能合成分解尿素的脲酶的细菌才能生长。脲酶广泛的存在于植物，微生物，动物中。,尿素被脲酶分解之后产生了，氨气和二氧化碳，氨气溶于水，二氧化碳几乎不溶于水。所以，溶液呈碱性。,分解纤维素的微生物的分离,纤维素,C,1,酶,C,x,酶,纤维二糖,葡萄糖苷 酶,葡萄糖,刚果红能与纤维素形成,红色复,合物，而不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应,。,纤维素酶,：,由,微生物,分泌的一种复合酶，包括,C,1,酶,、,C,x,酶和葡萄糖苷酶，由于它们的协同作用，最终将纤维素分解成葡萄糖。,1,.,菌株筛选原理的比较,土壤中分解尿素的细菌,分解纤维素的微生物,选择培养基的成分：尿素作为唯一的氮源,鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，若,pH,升高，指示剂变红，说明细菌能分解尿素,选择培养基（,液体,）的成分：纤维素作为唯一的碳源,鉴定方法：刚果红染色法，即刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈,混淆两种,“,对照组,”,与,“,重复组,”,(1),两种对照组作用比较,判断培养基中,“,是否有杂菌污染,”,，需将未接种的培养基同时进行培养。,判断选择培养基,“,是否具有筛选作用,”,，需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。,(2),重复组的设置及作用,为排除偶然因素对实验结果的干扰,，在每一稀释度下宜设置,3,个平板作重复组，选择菌落数均在,30,300,且数目相差不大的三个平板，用,“,平均值,”,代入计数公式予以计算菌落数。,微生物计数的方法专项归纳,(,考纲最新添加内容,),1,.,间接计数法,(,也叫活菌计数法,),：,常用的是稀释涂布平板法。,(1),原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少个活菌。,(1),原理：利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量，,但不能区分细菌的死活。,计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定面积,(1 mm,2,),和高,(0.1 mm),的计数室，在,1 mm,2,的面积里又被划分成,25,个,(,或,16,个,),中格，每个中格进一步划分成,16,个,(,或,25,个,),小格，但计数室都是由,400,个小格组成的。,2,.,显微镜直接计数法,3,.,滤膜法,以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例，将已知体积的水过滤后，将滤膜放于伊红,美蓝培养基上培养，在该培养基上，大肠杆菌菌落呈现深紫色带金属光泽，可根据培养基上深紫色带金属光泽的菌落数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。,