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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,第二章,安 全 防 护,1,1.概念,2.一些国家基因操作平安规那么,3.美国重组DNA研究修改条例,2,1、概念,生物危害Biohazard),生物伦理Bioethics),危险度=生物材料危险性,操作方法危险性,操作量操作时间,操作次数,3,4,3、NIH重组DNA研究修改条例的主要内容,1.物理防护,四个等级：P1P2P3P4,P1级最低级一般微生物实验室,1无特殊防护设备，实验工作在开放式工 作台上进行；,2不与其它建筑物隔开，允许公众进入；,3要严格执行标准的微生物实验造作规程，如操作时门窗关闭；工作台消毒；不用嘴吸移液管，至少用棉花塞，再用嘴吸；禁止在实验室吃喝吸烟等等。,5,P2级实验室(低级)(病原微生物实验室),(1设有生物平安柜(通风橱);,(2限制外人进入;,(3不准穿工作服到室外,更不能到餐厅,其它同P1。,6,P3级实验室中级严格的病原微生物实验室,1与向一般公众开放的地区隔开；,2向实验室提供定向气流，排出的气流那么释放到大气，防止重新进入大楼排出的空气不准再循环；,3一般实验均应在生物平安柜内进行；,4实验室门口标志生物危险信号；,5严禁用嘴吸移液管；,6工作时带手套等等，其它同P1，P2。,7,8,P4实验室高级可防止微生物逃出室外，密闭的严格的病原微生物,1与其他建筑物严格隔离，应是单独建筑物；,2密闭，单独使用的定向气流通风系统；,3进出实验室应经更衣室和淋浴室，等等。,其它同P1,P2,P3,9,2.生物防护,根据载体-受体系统分级，以作受体的情况下，生物防护分三级，表示为：EK1EK2EK3。,1 EK1级：一般常用的载体受体系统，如质粒，入作载体，作受体。,2EK2级：用遗传学方法构建的具有高级生物防护功能的载体-受体系统，在非许可的条件下，即使重组DNA感染非特定受体，一定没有活性如果有活性，一般不会超过10-8一般受体为r-m-su，载体如入，一般携带am突变。,3EK3级：EK3级系统单独用于动物体内实验制定该条例时，尚无EK3级载体-受体系统。,10,3.重组实验采用防护等级规定,1真核DNA重组,a.灵长类 P3+EK3 or P4+EK2,b.哺乳类 P3+EK2,c.鸟类 P3+EK2,d.低等真核生物,能产毒素的 P3+EK2,一般者 P2+EK1,e.植物 P2+EK1,(携带病原体的，P3+EK2),11,2原核DNA重组：,根据供体菌的致病与否，确定防护等级；,一般潜在危险的病原体：P2+EK1,中等程度病原体伤寒沙门氏菌，痢疾志贺氏 菌，霍乱弧氏军等:,P2+EK2,12,3其它,动物病毒 P4+EK3 或 P3+EK3 很严格，因为动物病毒 也包括感染人的病毒,植物病毒 P3+EK1,P2+EK2,真核细胞器DNA,P3+EK1灵长类线粒体,P2+EK2灵长类线粒体,P2+EK1其他真核线粒体，叶绿体,13,4.举例：EK2级防护,Charon Phage的平安特征生物防护,1免疫区缺失 免疫区缺失使其不能维持溶源,化状态，也就是可以有效的杀死感染细胞,Charon 4A那么无int和att 位点；,2N+N为野生型，为溶源化的主要障碍，促,使S,R基因表达，杀死细胞；,3Nin缺失 Nin即不依赖 N基因突变，Nin,使N基因功能正常；,14,4am突变 使之只能在su+宿主中增殖，,在自然界中su+菌株是罕见的；,5限制-修饰系统：只可在r-m-宿主中扩增,可在非修饰菌株中增殖，从而使之在含有限制系统的菌株上不能裂解增殖即限定了它的宿主,可在m-细胞中增殖，难于在r+细胞中增殖(这个细胞只能是m-r-,或m+r-,不存在m-r+细胞,15,
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