重大动物疫病采样监测技术

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,重大动物疫病采样 监测技术,中牟县动物疫病预防控制中心,席双艺,一、畜禽血液采集技术,（一）、血液采集的要求：,1、所有采血用具均应事先消毒、干燥处理；,2、采血部位要进行剪毛、清拭并按常规进行消毒。,3、怀疑传染病时，采血过程要防止到处流散，检后的残余血液及所用器皿要进行消毒处理。,4、需抗凝的要加入抗凝剂。,5、需分离血清的血液，试管要静置、斜放，便于血清晰出。,6、注意安全。,二、各种畜禽采样方法及部位,（一）、牛:多采用颈静脉采血、尾静脉采血。,1、颈静脉采血一般在颈静脉沟的上1/3和中1/3交界处的颈静脉内。,2、尾静脉采血在尾根腹侧中部。,牛颈静脉采血,牛颈静脉采血,牛尾静脉采血,（二）、猪：多采用耳静脉采血、前腔静脉采血,1、耳静脉采血（适用于大猪）在耳下缘1/2处。,2、前腔静脉采血，胸浅窝内，即在第一肋骨和胸骨柄结合处前方。,猪耳静脉采血,猪前腔静脉采血,猪前腔静脉采血,（三）、家禽：多采用鸡翅内侧静脉采血、鸡心脏采血,1、鸡翅内侧腋静脉，肉眼可见。,2、鸡心脏采血，鸡仰卧保定，鸡头部朝向，拔去胸上部少许羽毛，用手指在胸骨上方、嗉囊下方摸得一凹窝，右手持针，自胸骨上方凹窝斜向前下方心脏方向刺入，边刺边抽动活塞，若刺入心脏，便有血液涌入注射器，术毕，局部消毒。,注意：此法采血后，多会引起鸡只死亡，仅适用于淘汰鸡的采血。,鸡翅静脉采血,鸡翅静脉采血,鸡翅静脉采血,鸡心脏采血,三、畜禽病料采集技术,（一）、样品采集的原则,1、适时采样。根据检测要求及检测对象和检验项目的不同，选择适当的采样时机十分重要。样品是有时间要求的，应严格按规定时间采样，有临床症状需要作病原分离的，样品必须在病初的发热期或症状典型时采样，病死的动物，应立即采样。,2、合理采样。根据诊断检测的要求，须严格按照规定采集各种足够数量的样品外，不同疫病的需检样品各异，应按可能的疫病侧重采样。对未能确定为何种疫病的，应全面采样。,3、典型采样。选取未经药物治疗、症状最典型或病变最明显的样品，如有并发症，还应兼顾采样。,4、无菌采样。供病原学及血清学检验的样品，必须无菌操作采样，采样用具、容器均须无菌处理，尸体剖检需采集样品的，先采样后检查，以免人为污染样品。,5、适量采样。采集样品的数量要满足诊断检测的需要，并留有余地，以备必要时复检使用。,6、样品处理。采集的样品应一种样品一个容器，立即密封，根据样品的性状检验要求的不同，作暂时的冷藏、冷冻或其它处理。,7、安全采样。既要保护采样人员，以要防止病原外泄，还要防止样品受到污染。,8、样品包装。主要是密闭，防止样品损坏、污染和外泄等意外发生。,9、迅速送检。应尽快送实验室进行检测，延误送检时间，会影响到检测质量和结果的可靠性。,四、组织样品的采集,组织样品一般由扑杀动物或病死动物解剖采集。从尸体采样时，先剥去动物胸腹部皮肤，以无菌器械将腹腔打开，根据检验目的和生前疫病的初步诊断，无菌采集不同的组织。,1、病毒检验样品。作病毒检验的组织，必须以无菌技术采集，组织应分别放入灭菌的容器内并立即密封，贴上标签，放入冷藏容器立即送实验室。如果时间较长，可作冻结状态运送。,2、细菌检验样品。供细菌检验的组织样品，应新鲜并以无菌技术采集。如遇尸体已经腐败，某些疫病的致病菌仍可采集于长骨或肋骨，从骨髓中分离细菌。采集的所有组织分别放入灭菌的容器内并立即密封，贴上标签，放入冷藏容器立即送实验室。,猪解剖采样,五、粪便样品的采集,1、病毒检验样品。分离病毒的粪便必须新鲜。少量采集时，以灭菌的棉拭子从直肠深处或泄殖腔粘膜上蘸取粪便，并立即投入灭菌的试管内密封，或在试管内加入少量PH7.4的保护液再密封。贴上标签冷藏送实验室。,2、细菌检验样品。作细菌检验的粪便，最好在动物使用抗菌药物之前，从直肠或泄殖腔粘膜上采集，采样方法与供病毒检验的相同。可投入无菌缓冲盐水管内，贴上标签冷藏送实验室。,3、寄生虫检验样品。粪便样品应选取新排出的或直接从直肠内采得，以保持虫体或虫体节片及虫卵的固有形态，一般寄生虫检验的粪便用量较多。采得的粪便以冷藏不冻结状态送实验室。,粪便采集用品,粪便采集用品,粪便采集用品,六、畜禽疫病的样品采集,（一）、口蹄疫样品的采集,口蹄疫病毒在病畜的水疱皮内及其淋巴液中含毒量最高。在水疱发展过程中，病毒进入血流，分布到全身各种组织和体液。在发热期血液内的病毒含量最高，退热后在奶、尿、口涎、泪、粪便等都含有一定量的病毒。,1、组织样品,（1）、样品的选择：用于病毒分离、鉴定的样品以发病动物未破裂的水泡皮和水泡液为最好。对临床健康但怀疑带毒的动物可在扑杀后采集淋巴结、脊髓、肌肉等组织样品作为检测材料。,（2）、样品的采集和保存：样品采集部位可用清水清洗(切忌使用酒精、碘酒等消毒剂消毒、擦拭)，剪取病畜的新鲜水泡皮35克放入灭菌小瓶中，加适量50甘油磷酸盐缓冲液(pH7.4)，加盖密封；也可采用无菌器具采集水泡液至少1毫升，装入灭菌小瓶中(可加适量抗菌素)，加盖密封。尽快冷冻保存。,（3）、在无法采集水泡皮和水泡液时，可采集淋巴结、脊髓、肌肉等组织样品35克装入洁净小瓶内，加盖密封尽快冷冻保存。样品的包装瓶上均要贴上标签，写明采样地点，动物种类，编号，时间等。,2、牛、羊(OP液)样品采集,（1）、样品采集：被检动物在采样前禁食(可饮水)12小时，以免胃内容物反流污染OP液。采样探杯在使用前经02柠檬酸或2氢氧化钠浸泡5分钟，再用洁净水冲洗。每采完一头动物，探杯要重复进行消毒并充分清洗。采样时动物站立保定，将探杯随吞咽动作送入食道上部1015cm处，轻轻来回移动23次，然后将探杯拉出。,（2）、样品的保存：将采集到的810mLOP液倒入25 mL以上的灭菌玻璃容器中，容器中应事先加有810mL磷酸缓冲液(0.04molL、pH74)，密封后充分摇匀后尽快冷冻保存，用于病原检测，做出追溯性诊断。,3、血清样品采集,怀疑曾有疫情发生的畜群，错过组织样品采集时机时，可无菌操作采集动物血液，每头不少于10mL。无菌分离血清装入灭菌小瓶中，加盖密封后冷藏保存，通过检测抗体，做出追溯性诊断。,猪口蹄疫样品采集,羊(OP液)样品采集,牛(OP液)样品采集,牛(OP液)样品采集,（二）、禽流感的样品采集,1、至少从5只濒死禽采集样品。样品包括：泄殖腔拭子和气管拭子(置于缓冲液中)各5个；气管和肺的混样5个，肠管及内容物的混样5个；肝、脾、肾和脑等组织样品各5个。,2、分别采集至少10个病鸡的血样。采集10只病禽的血样，使用一次性采血器，心脏或翅静脉采血，每只禽采血样2ml3ml，经离心或自然析出血清后，将血清移到指形管中。封好口，贴好标签。不同禽只的血样不能混合。,（三）、猪瘟样品的采集,猪瘟病毒复制的主要部位是扁桃体，然后经淋巴管进入淋巴结，继续增殖，随即到达外周血液，从这时起病毒在脾、骨髓、内脏淋巴结和小肠的淋巴结组织繁殖到高滴度。,样品：全血、骨髓、淋巴结、扁桃体、肾脏、脾脏,（四）、猪链球菌样品采集,致病性链球菌经呼吸道或其它途径（受损的皮肤和粘膜）进入机体后，首先在入侵处繁殖，很快进入淋巴管和淋巴结。继之冲破淋巴屏障，沿淋巴系统扩散到血液中，引起菌血症，最后导致各个实质器官严重病变。,样品：生前：抗凝全血,死后：肝脏、脾脏,（五）、新城疫样品采集,新城疫病毒存在于病鸡所有器官、体液、分泌物和排泄物，以脑、脾和肺含毒量最高，骨髓含毒时间最长。,样品：眼分泌物、泄殖腔拭子、脾脏、气管粘膜、脑等。,