资源描述
单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,离子交换色谱,运用与分析,主讲,：许先融,编辑,：,谢晓敏,资料搜集,：刘佳娜 李春凤 甘权贤,资料整理,：李扬帆 刘雁,08,中药分析与鉴定（,1,）班,基本原理：,离子交换色谱,（,ion exchange chromatography,，,IEC,）,以离子交换树脂作为固定相，树脂上具有固定离子基团及可交换的离子基团。当流动相带着组分电离生成的离子通过固定相时，组分离子与树脂上可交换的离子基团进行可逆变换。根据组分离子对树脂亲合力不同而得到分离。,主要用于分离离子或可离解的化合物，包括,氨基酸,，,多肽,，,核酸,，,核苷,等各种,生物大分子,。,离子交换色谱的运用：,分离纯化生物大分子,Po+ZDo=Pb+ZDb,重视,Po:,流动相中溶质的浓度；,Pb:,填料表面上被吸附的溶质浓度,;,Do:,流动相中洗脱剂的浓度；,Db:,填料表面上洗脱剂的浓度；,Z:,蛋白质在吸附过程中从填料表面上,被置换的洗脱剂的数目；,以离子交换色谱快速纯化 8 一,淀粉酶为例,研究探讨离子交换色谱,本研究利用合成的强阴离子交换柱很好地分离了,a-,淀粉酶粗品,其活性 回收率高达,96%,比活性达,388ug/mg,蛋白质纯度提高,30,倍。此法的研究成功 为大规模制备高纯度,a-,淀粉酶提供了一个新工艺路线。,高纯度的,8,一淀粉酶可作为酶试剂,研究生物作用的特性、酶反应机理,测定 生化反应的平衡常数。,1.0,摘要：,2.0,实验部分,2.1,标准酶液配制,用微量天平准确称取,5mg,高纯度的,a-,淀粉酶试剂,于小离心 试管中,准确加,1.0ml,水,溶解后,在,1300r/min,的高速离心机上离心,5min,小心转移上部清液于另一离心试管中,此液相当于,1062u/ml,活力,.,3.0,结果与讨论,3.1,洗脱剂,为获得高的洗脱效率,本实验选用,0.02mol/L Tris-2mol/LNacl(PH6.0),体系作为洗脱剂,.,（,Tris-,指三羟甲基氨基甲烷）,由图,2,可知,在,2.0mol/L,以下,随盐浓度的增加,洗脱能力增大,活性回收率提高,。洗脱液中离子强度对洗脱效率的影 响可归结为离子交换平衡的移动,这种色谱行为表明该固定相具有典型的阴离子交换特性,符合离子交换色谱的洗脱规律。但在,2.0mol/L,以上,随盐浓 度增 加洗脱 能力下降,。这种反常现象,可能是由于,离子交换柱的多功能特性,引起。,实验证明,离子交换柱不仅有离子交换的作用,而且还表现一定的疏水作用的。并且这种疏水作用,随溶液离子强度发生变化。当洗脱剂 浓度大于,2.0mol/L,时,由于溶液的表面张力过大,离子交换剂的疏水作用变得明显,对蛋白质疏水缔合作用增强,故被吸附,的蛋白质难以洗脱,因而 活性回收率下降。所以选择抓,Nacl,浓度为,2.0mol/L.,3.3 PH,对活性回收率的影响,总结,凡在溶液中能够电,离的物质通常都可以用离子,交换色谱法进行分离。它不仅适,用于无机离子混合物的分离，亦可用,于有机物的分离，例如氨基酸、蛋白质等生物大分子，因此应用范围较广。不过它容易受柱长，流速，,PH,，离子强度等的影响。,08,中鉴,1,班,离子交换色谱,谢谢,
展开阅读全文