项目三细胞化学染色

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,项目三,细胞化学染色,细胞学和化学相结合而形成的一门科学，是以细胞,形态学,为基础，结合运用,化学反应,的原理对血细胞内的各种特定的化学成分,(,如酶类、酯类、铁、蛋白质、核酸等,),，,作,定性、定位、半定量分析,的方法。,定义,第一节 概 述,细胞化学染色,原 粒,原 单,原 淋,POX,染,色,+,弱,+,-,（一）,固定,固定有,物理法,与,化学法,，,物理法,为干燥和火焰固定，,化学法,最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。,血细胞化学染色流程,（二）,显示,1,、,偶氮偶联法,：利用人工合成的酶底物，在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶氮色素，以此证明酶的存在。,2,、,联苯胺法,：粒细胞和单核细胞中的过氧化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧，使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。,3,、,普鲁士蓝法,：细胞内、外铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。,4,、,雪夫反应,：过碘酸氧化细胞内糖类中乙二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用，使无色品红形成红色沉淀。,5,、,金属沉着法,其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色（显示脂质）、荧光显示、放射自显影以及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学诊断。,（三）,细胞化学定量,粗略估量,，以染色反应的强弱，受色的深浅，人为地区别为阴性和各种程度的阳性。,百分法,，只能反映细胞阳性率，不能反映受色强弱。,积分法,，是常用的半定量法，将等级估量与百分率相结合它既反映了细胞阳性率的高低，又反映了细胞受色的强弱。,下面介绍几种常用的细胞化学染色方法,这些方法学在白血病的鉴别诊断上具有重要意义。,酯 酶 染 色,（,SE,、,NSE,）,苏 丹 黑 染 色（,SBB,）,常用细胞化学染色,糖原染色（过碘酸,-,雪夫反应）（,PAS,）,中性粒细胞碱性磷酸酶染色,（,NAP,）,酸性磷酸酶染色（,ACP,）,铁 染 色,过氧化物酶染色,（,POX,）,过碘酸,-,雪夫（,PAS,）反应,【,原理,】,含乙二醇基的,多糖,过碘酸,双醛基,+,无色品红,（,-CHOH-CHOH,）,（,-CHO-CHO,）,(,雪夫试剂,),紫红色化合物,（定位于胞浆中）,称过碘酸,-,雪夫（,PAS,）反应，,以前又称为,糖原染色,【,正常血细胞的染色反应,】,【,正常血细胞的染色反应,】,1,、,粒系,：原粒,（,-,），,以后阶段,（,+,）,且越成熟阳性越强，阳性率达,67.2,，,嗜酸,（浆）、,嗜碱,（颗粒）,（,+,）,2,、,淋巴系,：原淋,（,+,）,或,（,-,），成熟,（,+,）,阳性率,10-50,，多,20,；,3,、,红系,：呈,（,-,）,；,4,、,巨核细胞,：呈,强（,+,）,。,5,、,单核系,：分化差原单,（,-,），,其他,弱（,+,）,。,过碘酸,-,雪夫（,PAS,）反应,正常血细胞,PAS,染色,1.,原始粒细胞（,-,）,2.,早幼粒细胞（,+,）,3.,中性中幼粒细胞（,+,）,4.,中性晚幼粒细胞（,+,）,5.,中性杆状核粒细胞（,+,）,6.,中性分叶核粒细胞（,+,）,7.,嗜碱性粒细胞（,+,）,8.,嗜酸性粒细胞（,+,）,9.,单核细胞（,）,10.,淋巴细胞（,+,）,【,临床意义,】,1,、,鉴别,M,6,与巨幼细胞性贫血：,M,6,：幼红细胞,PAS,强（,+,），,积分率明显。,巨幼贫、再障,：幼红细胞,（,-,）,。,2,、,鉴别三种急性白血病,急粒,：,（,-,）,。,急淋,：,强（,+,），,急单,：,（,+,），强弱不定。,3,、,鉴别戈谢病和尼曼,-,匹克病,戈谢细胞,强（,+,），,尼曼,-,匹克细胞呈,（,-,弱,+,）,。,过碘酸,-,雪夫（,PAS,）反应,糖原染色（,PAS,染色）,A,、,AML-M6,（,+,）,；,B,、,MA,（,-,）,PAS,染色,A,、,CLL,；,B,、,ALL,原始、幼稚淋巴细胞均,阳性,，呈粗颗粒状阳性,幼稚红细胞 阴性,【,原理,】,偶氮偶联法：,血细胞内的酸性磷酸酶在酸性（,pH 5.0,）条件下水解基质液中的磷酸萘酚,AS-BI,，释放出萘酚,AS-BI,，后者与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。,酸性磷酸酶（,ACP,）染色,【,原理,】,抗酒石酸酸性磷酸酶染色,：,用相同方法制备两份基质液，一份加入适量的,L-,酒石酸（左旋酒石酸）,另一份不加酒石酸。取两张相同标本的涂片，分别用这两种不同的基质液做酸性磷酸酶染色。,如果血细胞内的酸性磷酸酶耐,L-,酒石酸，两张涂片均呈阳性；如不耐,L-,酒石酸，不加,L-,酒石酸的涂片呈阳性反应，而加,L-,酒石酸呈阴性反应。,酸性磷酸酶（,ACP,）染色,【,正常血细胞的染色反应,】,粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞、血小板、浆细胞、巨噬细胞均呈阳性。,酸性磷酸酶（,ACP,）染色,【,临床意义,】,1.,诊断多毛细胞白血病,多毛细胞呈,阳性,（常呈强阳性），阳性反应,不被,L-,酒石酸抑制,。,CLL,的淋巴细胞和恶性淋巴瘤细胞,ACP,染色也可呈,阳性，但可被,L-,酒石酸抑制。,2.,鉴别戈谢细胞和尼曼,-,匹克细胞,前者阳性，,不被,L-,酒石酸抑制,；后者,阴性,。,3.,T,淋巴细胞和,B,淋巴细胞的鉴别,T,淋巴细胞,ACP,呈,阳性,反应；,B,淋巴细胞,ACP,呈,阴性,或弱阳性反应。,酸性磷酸酶（,ACP,）染色,多毛细胞白血病酸性磷酸酶染色,多毛细胞呈阳性反应,酯 酶 染 色,根据,酯酶特异性高低分为,:,特异性酯酶,(,氯乙酸,AS-D,萘酚酯酶,),非特异性酯酶,pH,值不同,酸性酯酶,(,酸性,-,醋酸萘酚酯酶,),碱性酯酶,(-,丁酸萘酚酯酶,),中性酯酶,-,醋酸萘酚酯酶,醋酸,AS-D,萘酚酯酶,中性粒,细胞类,单核巨噬,细胞类,【,原理,】,血细胞内的氯乙酸,AS-D,萘酚酯酶水解基质液中的氯乙酸,AS-D,萘酚，产生,AS-D,萘酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。,本试验常用的重氮盐为坚牢紫酱,GBC,，形成的有色沉淀为红色。,（一）氯乙酸,AS-D,萘酚酯酶,(NAS-DCE),染色,【,临床意义,】,1.,急性粒细胞白血病,原始粒细胞呈,阳性,或阴性。,2.,急性早幼粒细胞白血病,早幼粒细胞呈,强阳性,。,3.,急性单核细胞白血病,原始单核及幼稚单核细胞几,乎呈,阴性,。,4.,急性粒,-,单核细胞白血病,原始粒细胞及早幼粒细胞,呈阳性，原始单核及幼稚单核细胞呈阴性。,5.,急性淋巴细胞白血病和急性巨核细胞白血病,白血,病细胞均呈阴性。,（一）氯乙酸,AS-D,萘酚酯酶,(NAS-DCE),染色,（一）氯乙酸,AS-D,萘酚酯酶,(NAS-DCE),染色,【,正常血细胞的染色反应,】,1.,粒细胞系统,分化差的原始粒细胞呈阴性，分化好,的呈阳性，自早幼粒细胞至成熟中性,粒细胞均呈阳性。嗜酸性粒细胞呈阴,性或弱阳性，嗜碱性粒细胞呈阳性。,2.,单核细胞系统,绝大多数为阴性。,3.,其他细胞,如淋巴细胞、浆细胞、巨核细胞、有核,红细胞、血小板等均呈阴性；,肥大细胞呈阳性。,急性粒细胞白血病（,M,2a,）氯乙酸,AS-D,萘酚酯酶染色,1.,原始粒细胞，呈弱阳性；,2.,幼稚粒细胞，呈强阳性；,3.,中性杆状核粒细胞，呈强阳性,【,原理,】,血细胞内的,-,醋酸萘酚酯酶在,pH,中性,的条件下，水解基质液中的,-,醋酸萘酚，释放出,-,萘酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。,（二）,-,醋酸萘酚酯酶,(-NAE),染色,【,正常血细胞的染色反应,】,1.,单核细胞系统,分化差的原始单核细胞呈阴性，,分化好的原始单核细胞呈阳性，,幼稚单核及单核细胞也呈阳性，,阳性反应能被氟化钠抑制。,2.,粒细胞系统,各期粒细胞多数呈阴性，少数呈弱,阳性，,阳性反应不能被氟化钠抑制,。,（二）,-,醋酸萘酚酯酶,(-NAE),染色,【,正常血细胞的染色反应,】,3.,淋巴细胞系统 各期淋巴细胞多呈阴性，少数呈弱,阳性，阳性反应,不能被氟化钠抑制,。,4.,其他细胞 巨核细胞和血小板呈阳性，,阳性反应不,能被氟化钠抑制,；少数有核红细胞呈弱,阳性，,阳性反应不能被氟化钠抑制,；浆,细胞呈阴性。,（二）,-,醋酸萘酚酯酶,(-NAE),染色,【,临床意义,】,1.,急性单核细胞白血病,单核系细胞多呈,阳性，阳性,反应能被氟化钠抑制,。,2.,急性粒细胞白血病 原始粒细胞呈阴性或弱阳性，,阳性反应不能被氟化钠抑制,。,3.,急性早幼粒细胞白血病 早幼粒细胞呈强阳性，,阳,性反应不能被氟化钠抑制,。,（二）,-,醋酸萘酚酯酶,(-NAE),染色,【,临床意义,】,4.,急性淋巴细胞白血病 原始淋巴细胞及幼稚淋巴细,胞呈阴性或阳性，,阳性反应,不被氟化钠抑制。,5.,急性粒,-,单核细胞白血病 原始粒细胞呈阴性至阳,性，,阳性反应不被氟化钠,抑制,；原始单核及幼稚单,核细胞呈阳性，,单核系阳,性反应能被氟化钠抑制,。,（二）,-,醋酸萘酚酯酶,(-NAE),染色,A,图：急性单核细胞白血病,-NAE,染色,原始、幼稚单核细胞多呈强阳性,B,图：急性单核细胞白血病,-NAE,氟化钠抑制染色,原始、幼稚单核细胞阳性反应被氟化钠抑制,（与,A,图为同一标本）,A,B,【,原理,】,血细胞内的,-NBE,在,pH,碱性,条件下，水解基质液中的,-,丁酸萘酚，释放出,-,萘酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。,（三）,-,丁酸萘酚酯酶（,-NBE,）染色,【,正常血细胞的染色反应,】,1.,粒细胞系统 各阶段粒细胞呈阴性。,2.,单核细胞系统,分化差的原始单核细胞呈阴性，,分化好的原始单核细胞呈阳性，,幼稚单核及单核细胞呈阳性，,阳,性反应能被氟化钠抑制,。,3.,淋巴细胞系统,T,淋巴细胞、非,T,非,B,淋巴细胞可呈,阳性，,B,淋巴细胞呈阴性。,4.,其他细胞 巨核细胞、有核红细胞、浆细胞呈阴,性或弱阳性；组织细胞也可呈阳性，,但不被氟化钠抑制。,（三）,-,丁酸萘酚酯酶（,-NBE,）染色,【,临床意义,】,与,-NAE,染色的临床意义相同。,（三）,-,丁酸萘酚酯酶（,-NBE,）染色,【,原理,】,血细胞中的酸性,-,醋酸萘酚酯酶在,pH,弱酸性,(pH 5.8),条件下，可水解基质液中的,-,醋酸萘酚，产生,-,萘酚，进而与重氮盐六偶氮付品红形成不溶性红色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。,（四）酸性,-,醋酸萘酚酯酶（,ANAE,）染色,【,正常血细胞的染色反应,】,1.,单核细胞系统,单核系细胞常呈弥散型强阳性，,阳性反应可被氟化钠抑制,。,2.,淋巴细胞系统,T,淋巴细胞呈阳性，而,B,淋巴细胞,多数呈阴性。,3.,其他细胞 粒系细胞一般为阴性或弱阳性，但此,反应,不被氟化钠抑制,；红系细胞、巨,核系细胞含量较少。,（四）酸性,-,醋酸萘酚酯酶（,ANAE,）染色,【,临床意义,】,1.,可粗略地鉴别,T,、,B,淋巴细胞,2.,鉴别其它急性白血病细胞类型同,-NAE,染色。,3.,多发性骨髓瘤、多毛细胞白血病细胞多为阳性；恶性组织细胞病呈强阳性；霍奇金淋巴瘤网状高铁红细胞,(R-S,细胞,),呈阳性。,（四）酸性,-,醋酸萘酚酯酶（,ANAE,）染色,M,3,M,1,、,M,2a,M,5,ALL,POX,染色,强阳性,阳性或阴性,阴性或弱阳性,阴性,SB,染色,强阳性,阳性或阴性,阴性或弱阳性,阴性,NAS-DCE,染色,强阳性,阳性或阴性,阴性或弱阳性,阴性,-NAE,染色,强阳性,阴性或阳性,阳性或强阳性,阴性或阳性,-NAE+NaF,不抑制,不抑制,抑制,不抑制,-NBE,染色,阴性,阴性,阳性