第三章生物制药反应过程设备

Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,Click to edit Master title style,LOGO,第三章生物制药反应过程设备,制药设备及技术,生物制药基本过程如图所示，主要生产设备包括培养基配制及灭菌设备、空气预处理及灭菌设备、生物反应器和分离提取设备。,生物制药基本流程,第一节 培养基配制及灭菌设备,根据不同的细胞生长需要所配制的营养物质即培养基，培养基需要满足以下条件：含有合适的营养物质；合适的,pH,；经灭菌后才能使用。由于大规模的微生物、动植物细胞培养都是纯种培养过程不允许有杂菌污染，所以要对培养基设备进行灭菌。,在发酵工业中，广泛采用的培养基灭菌方法是湿热灭菌，即直接用高压蒸汽将物料升温至,115,140,后，保持一段时间以杀死所有的微生物。培养基的灭菌方法有实罐灭菌和连续灭菌两种。,第一节 培养基配制及灭菌设备,一、培养基实罐灭菌方法及设备,实罐灭菌,：将培养基置于发酵罐中用饱和蒸汽加 热，达到预定灭菌温度后，维持一定时间（,30min,左右），再冷却到发酵温度，然后接种发酵，这种灭菌过程叫做实罐灭菌，又称分批灭菌（工厂里称实消）。,1.,实罐灭菌前的准备,为了保证灭菌的成功，在实罐灭菌前，检查发酵罐是否严密非常重要，发酵罐及附属设备必须全面进行严密度检查，尤其是与发酵罐直接相通的阀门的严密性，在确实无渗漏情况下才开始灭菌。,第一节 培养基配制及灭菌设备,2.,实罐灭菌的操作,实罐灭菌操作就是用表压的饱和蒸汽将培养基灭菌的过程。,实罐灭菌时间与温度的关系,第一节 培养基配制及灭菌设备,图中，,阶段温度与时间的关系如下：,夹套预热阶段，培养基由室温加热至,80-90,，夹套预热是为了防止进入罐内的水蒸气冷凝成水后改变培养基浓度。,直接蒸汽加热阶段，培养基由,80-90,加热至,121.,保温阶段，,121,冷却阶段，,121,冷却至培养温度。,实罐灭菌过程示意图,实罐灭菌动画,第一节 培养基配制及灭菌设备,3.,实罐灭菌时间的计算,根据对数残留公式，实罐灭菌所需的理论时间可以用下式计算：,式中， 为灭菌时间，,s,；,K,为灭菌速度常数，,为开始灭菌时原有菌的个数，个；,为结束灭菌时残留菌的个数，个,第一节 培养基配制及灭菌设备,灭菌速度常数,K,与温度和被杀灭菌的种类有下列关系,通常取,代入上式得：,式中，,A,为系数， ；,E,为灭菌时所需活化能，,J/mol,；,R,为气体常数，,8.314J/,（,mol.K,）；,T,为热力学温度，,K,。,第一节 培养基配制及灭菌设备,二、培养基连续灭菌方法及设备,连消,：,培养基的连续灭方法就是将发酵罐预先进行灭菌，将配好的培养基在向发酵罐输送的同时进行加热、保温和冷却，然后连续进入已灭好菌的发酵罐中。,空消,：又称空罐灭菌。培养基的灭菌如果是采用连续灭菌法，则发酵罐应在加入灭菌的培养基前先行单独灭菌，即发酵罐罐体的灭菌。,第一节 培养基配制及灭菌设备,（一）培养基连续灭菌流程,培养基连续灭菌示意图,第一节 培养基配制及灭菌设备,（二）连续灭菌的基本设备,连续灭菌的基本设备一般包括：,配料预热罐,：将配好的料液预热到,60,70,，以避免灭菌时由于料液与蒸汽温度相差过大而产生水汽撞击声；,加热器：,作用主要是使高温蒸汽与料液迅速接触混合，并使料液的温度很快升高到灭菌温度（,135,左右）；,维持罐,：加热器加热的时间很短，通过维持管达到彻底灭菌的效果；,冷却管：,从维持罐出来的料液要经过冷却管进行冷却后，输送到预先已经灭菌过的罐内。,第一节 培养基配制及灭菌设备,.,加热器,（）塔式加热器,培养基从塔底由连消泵,打入，打料速度控制在,使物料在蒸汽导入管与,设备外壳的空隙间流速,为左右。料液与,小孔中喷出的蒸汽连续,混合，在塔内停留,20,30s,后，从塔的上部流出。,塔式加热器,第一节 培养基配制及灭菌设备,（,2,）喷射式加热器,料液在中间进入，蒸汽则在周围环隙中进入，同时在喷嘴出口处有一个扩大端，扩大端顶端上方设置了一块弧形挡板，增强了蒸汽与料液的混合加热效果。料液在进入加热器时的流速约为左右，蒸汽喷口的环隙面积约为喷嘴外径的一倍，扩大管高度一般为,1,米左右。此种加热器结构简单，噪声少，无震动,。,喷射式加热器,第一节 培养基配制及灭菌设备,2,、维持罐,维持罐的结构,高温培养基由进料口管道进入容器底部，因进料管由圆筒上部侧面伸入罐内通至下部，使料液自下向上流动，缓缓上升至出料口流出，如无返混，培养基在维持罐中的停留时间就是连续灭菌工艺所要求的保温时间或灭菌时间,。,第一节 培养基配制及灭菌设备,由于容器直径较大，培养基在容器内的流速较小，这样在维持罐中物料的返混现象是不可避免的。因此，在维持罐设计时，取高径比为较合适，且外壁要有保温层。设计培养基在维持罐中实际停留时间一般将理论灭菌保温时间乘上,3,5,倍。,第一节 培养基配制及灭菌设备,维持罐体积的计算,-,维持罐体积，,m,3,；,料液体积流量，,m,3,/h,；,物料在维持罐中停留时间，,min,，,充满系数，取。,第一节 培养基配制及灭菌设备,3,、冷却设备,（,1,）喷淋冷却器,喷淋冷却器的最上端有一个淋水槽，将水通过喷淋装置均匀地淋在水平的排管上，以冷却管内的培养基。喷淋冷却器冷却效果的优劣与淋水装置的安装是否合理关系极大。为了增加传热推动力，高温培养基应由底端进、上端出，物料在管道里流速。为了强化喷淋冷却器的冷却效果，该设备应放在通风的场所。,第一节 培养基配制及灭菌设备,（,2,）真空冷却器,真空冷却器,真空冷却器的结构如图，其工作原理是高温培养基从维持罐进入真空冷却器内，在真空下，水分立即汽化使培养基温度下降。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,一、空气除菌方法及发酵用无菌空气的质量标准,1.,空气除菌方法,(1),热杀菌,(2),辐射杀菌,(3),静电除菌,(4),过滤除菌是目前生物工业生产中最常用、最经济的空气除菌方法，它采用定期灭菌的干燥介质来阻截流过的空气所含的微生物，从而获得无菌空气。,1.,空气除菌方法,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,2.,发酵用无菌空气的质量标准,（,1,）空气的压强 一般要求空气压缩机出口空气的压强控制在（表压）。,（,2,）空气流量 发酵用无菌空气的设计和操作中常以通气比或,VVM,来计算空气的用量。,（,3,）空气的温度 一般控制进入发酵罐的空气温度可比培养温度高,10,左右。,（,4,）空气的相对湿度 进入总过滤器的压缩空气的相对湿度控制在,60%,70&,左右。,（,5,）压缩空气的洁净度 在设计空气过滤器时，一般按染菌机率为,10,-3,来计算，即,1000,次发酵周期所用的无菌空气只允许,1,次染菌。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,二、 压缩空气过滤除菌工艺流程,空气除菌流程是根据生物工业生产中对无菌空气的要求（无菌程度、空气压力、温度和湿度）和空气的性质，并结合采气环境的空气条件和所用除菌设备的特性而制定的。空气过滤除菌有多种流程，下面介绍几个较为典型的设备流程。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,图,3-10,两级冷却、加热的空气除菌流程,1-,粗过滤器；,2-,空气压缩机；,3-,空气储罐；,4-,第一冷却器；,5,；旋风分离器；,6-,第二冷却器；,7-,丝网除沫器 ；,8-,空气加热器；,9-,总过滤器,1.,两级冷却、加热空气除菌流程,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,该流程的特点是两次冷却、两次分离、适当加热。经第一冷却器冷却后温度在,30,35,，大部分的水、油都已结成较大的颗粒，且雾粒浓度较大，故适宜用旋风分离器分离。第二冷却器使空气冷却到,20,25,，经进一步冷却后析出一部分较小雾粒，宜采用丝网分离器分离，发挥丝网能够分离较小直径的雾粒和分离效率高的作用。压缩空气经两次冷却、两次分离后，相对湿度仍较高，经加热器加热空气，使其相对湿度降低至,50,60%,后进入空气总过滤器，以保证过滤器的正常运行。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,2,、冷热空气直接混合式空气除菌流程,冷热空气直接混合式空气除菌流程,1-,粗过滤器；,2-,压缩机；,3-,贮罐；,4-,冷却器；,5-,丝网分离器；,6-,空气过滤器,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,压缩空气经粗过滤器过滤后经空气压缩机压缩，然后进入到空气贮罐。空气从贮罐出来后分成两部分，一部分进入冷却器，冷却到较低温度，经分离器分离水、油雾后与另一部分未处理过的高温压缩空气混合，此时混合空气已达到温度为,30,35,、相对湿度为,50,60%,的要求，再进入过滤器过滤。,其特点是可省去第二次冷却后的分离设备和空气加热设备，流程比较简单，适用于中等含湿地区 。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,3,、高效前置过滤空气除菌流程,高效前置过滤空气除菌流程,1-,高效前置过滤器；,2-,压缩机；,3-,贮罐；,4-,冷却器；,5-,丝网分离器；,6-,加热器；,7-,过滤器,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,该流程采用了高效率的前置过滤设备，利用压缩机的抽吸作用，使空气先经中、高效过滤后，再进入空气压缩机，这样就降低了主过滤器的负荷。经高效前置过滤后，空气的无菌程度已相当高，再经冷却、分离，进入主过滤器过滤，就可获得无菌程度很高的空气。此流程的特点是采用了高效率的前置过滤设备，使空气经过多次过滤，因而所得的空气无菌程度比较高。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,三、压缩空气预处理设备,压缩空气预处理阶段,：,一般将空气除菌流程中，空 气过滤器以前的部分称为压缩空气预处理阶段。,压缩空气在进入空气过滤器前要将其夹带的水滴、油滴去除。,水滴,是由于空气经压缩和冷却后，空气中的水气发生相变而析出；,油滴,是来自空气压缩机活塞环的润滑油被空气带出来的。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,以两级冷却、加热空气除菌流程为例：,1,、吸风塔,1,、高度,10m,2,、顶部设有防雨罩,3,、截面流速设计,8m/s,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,空气系统吸风塔,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,2,、前置粗过滤器,主要作用是捕集较大的灰尘颗粒，防止压缩机受损，同时也可减轻总过滤器负荷。粗过滤器一般要求过滤效率高，阻力小，否则会增加空气压缩机的吸入负荷和降低空气压缩机的排气量。,空气经过前置粗过滤器处理后尘埃含量大大减少。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,3,、空气压缩机,为了克服输送过程中过滤介质等阻力，吸入的空气必须经空压机压缩，空气压缩机的作用是提供动力，以克服随后的各个设备的阻力。目前国内常用的空压机有往复式空压机、螺杆式和涡轮式空压机。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,（,1,）往复式空气压缩机,依靠活塞在汽缸内的往复运动将空气抽吸和压出，因此出口压力不够稳定，产生空气脉动。另外，为了降低活塞在气缸内往复运动产生的热量，需用油润滑气缸与降温，从而使空气中带入油雾，导致传热系数降低，增加后续的空气净化处理难度。目前，空气压缩机制造厂为克服其夹带较多油量的缺陷，采用添加了二硫化钼的聚四氟乙烯活塞环以取代原钢制活塞环，使夹带的油滴大为减少。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,（,2,）涡轮式空气压缩机,此类空气压缩机是由电动机带动或用蒸汽涡轮机带动，靠涡轮高速旋转时所产生的“空穴”现象，吸入空气并使其获得较高的离心力，再通过固定的导轮和涡轮形成机壳，使部分动能转变为静压后输出。离心式空气压缩机具有体积和重量小而流量很大、出气均匀、不夹带油雾等特点，是理想的生物加工过程供气设备。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,（,3,）,螺杆式空气压缩机,利用高速旋转的螺杆在气缸里瞬间组成空腔并因螺杆的运动将腔内空气压缩后输出。,优点,是整机安装，占地面积小，压缩空气中不含油雾且排气平稳；,缺点,是维护保养技术要求高，适合于大中型发酵企业。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,空气经过压缩机的压缩后,接受了机械功,温度会显著上升。空气被压缩后压强越高,温度也上升得越高。空气压缩过程，压强与温度之间的关系：,式中，,T,1,、,T,2,为空气压缩前后的绝对温度，,K,；,P,1,、,P,2,为压缩前后空气的绝对压强，,Pa,；,K,为绝热过程，一般在发酵工厂净化系统设计时取。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,4,压缩空气贮罐,贮罐的作用：,（,1,）消除脉动维持罐压的稳定。,（,2,）使部分液滴在罐内沉降。,（,3,）保温灭菌。,压缩空气贮罐,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,空气贮罐是一个钢制圆柱容器，罐顶上装有安全阀、压力表；罐底安装排污阀；罐壁设有人孔，便于检修。压缩空气进罐时应切向进入以降低空气贮罐的噪音。,贮罐的设计 ，若空压机采用双气缸一级压缩，贮罐容积可用下式计算：,式中，,V,为贮罐容积，,m,3,；,Vp,为气缸的容积，,m,3,；,n,为压缩比。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,5,、空气冷却器,空气冷却器的作用是使压缩空气除水减湿。,冷却设备通常采用双程或多程立列管式换热器，冷却水走管程，压缩空气走壳程。空气的给热系数很低，一般只有,420KJ/,（,m,2,h,），设计时应采用恰当的措施来提高它的传热系数，否则将需要很大的传热面积。为提高换热器的传热系数应在壳程安装圆缺型折流板。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,6,、气液分离器,为防止空气空气夹带水滴进入总过滤器使,过滤介质失效，要将析出的水滴除去。,旋风分离器,：初级分离水滴采用。对直径,10um,的水滴除去效率在,60%,70%,。,丝网分离器,：除去,2,5um,的水滴或油滴。,目前发酵工厂采用旋风分离器作为粗除水器,其后再安装金属丝网除沫器作为精细除水器。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,（,1,）旋风分离器,旋风分离器,工作原理,：含雾沫的空气从圆筒上侧的进气管以切线方向高速进入，在环隙中高速旋转，在离心力的作用下，水滴或油滴被抛向管壁，然后沿着管壁流下。分离出雾沫后空气从圆筒顶的排气管排出，油水滴沉降下来自锥底落入集液斗。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,（,2,）丝网除沫器,丝网除沫器,工作原理,：当夹带水滴或油滴的气体穿过金属丝网层时，水滴或油滴被拦截在金属丝网上，液滴慢慢变大，当重力大于金属网的吸附力时就自然滴下来,。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,7,、空气加热器,分离油、水后空气的相对湿度仍然为,100,，当温度稍微下降时就会析出水来，使过滤介质受潮。所以除水后的压缩空气进入总空气过滤器之前要把相对湿度降到,60%,70%,。,常用的方法是采用换热器来加热达到降湿的要求。一般采用列管式换热器，空气走管程，蒸汽走壳程。,经预处理后的空气进入到空气过滤器。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,四、空气除菌设备,空气除菌方法很多，介质过滤是发酵工业上常使用的方法。它采用定期灭菌的干燥介质来阻截流过的空气中所含的微生物，从而制得无菌空气。,目前工业化微生物发酵企业一般都采用二级空气过滤除菌，即总过滤器粗滤除菌和每个发酵罐单独配备分过滤器相结合的方法以达到无菌，以下介绍几种常用空气除菌设备。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,1,、棉花活性炭过滤器,棉花是常用的过滤介质，最好选用纤维细长疏松的未脱脂新鲜产品，因为脱脂棉花易吸水而使体积变小；贮藏过久的棉花纤维变脆，易发脆甚至断裂，造成过滤阻力增大。,活性炭的表面积大，通过表面的吸附作用而吸附微生物。常用的活性炭是小圆柱体，要求活性炭质地坚硬、不易压碎、颗粒均匀，填装时要筛去粉末。活性炭的过滤效率比棉花低，但具有阻力小，吸附力强（可吸附空气中有害物质，如油、水）的特点，通常与棉花介质一起使用，以减少过滤层的阻力。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,棉花活性炭过滤器是立式圆筒形（图,3-16,），内部填充过滤介质。通常总的高度,L,中，上下棉花层厚度为总过滤层的,1/4,1/3,，中间活性炭层为,1/2,l/3,，在铺棉花层之前先在下孔板铺上一层,30,40,目的金属丝网和织物,(,如麻布等,),，使空气均匀进入棉花滤层。填充物按下面的顺序安装：,孔板铁丝网麻布棉花麻布活性炭麻布棉花麻布铁丝网孔板,棉花活性炭过滤器是立式圆筒形（图,3-16,），内部填充过滤介质。通常总的高度,L,中，上下棉花层厚度为总过滤层的,1/4,1/3,，中间活性炭层为,1/2,l/3,，在铺棉花层之前先在下孔板铺上一层,30,40,目的金属丝网和织物,(,如麻布等,),，使空气均匀进入棉花滤层。填充物按下面的顺序安装：,孔板铁丝网麻布棉花麻布活性炭麻布棉花麻布铁丝网孔板,图,3-16,棉花活性炭过滤器,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,工作过程：,通常空气从圆筒下部切线方向进入，从上部排出，出口不宜安装在罐顶，以免检修时拆装管道困难。过滤器上方应装有安全阀、压力表，罐底装有排污孔。要经常检查空气冷却是否安全，过滤介质是否潮湿等情况。过滤器进行加热灭菌时，一般是自上而下通入（表压）的干燥蒸汽，维持,45min,，然后用压缩空气吹干备用。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,2,、滤纸类过滤器,图,3-17,旋风式滤纸过滤器,这类过滤器的过滤介质主要是玻璃纤维纸，结构如图所示。超细玻璃纤维纸是用上好的无碱玻璃喷吹成丝状纤维，再以造纸法做成，纤维间的孔隙约为,1,，厚度约为，填充率为,14.8%,，一般应用时需将,3,6,张滤纸叠在一起使用。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,优点：,与棉花活性炭过滤一样，都属于深层过滤技术。这类过滤介质的过滤效率相当高，对于大于的颗粒的去除率为,99.99%,以上，同时阻力也比较小，压力降较小；,缺点：,强度不大，特别是受潮后强度更差。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,3,、新型空气过滤器,传统的棉花活性炭、玻璃纤维棉为过滤介质的总过滤器因阻力大，装料不便，过滤效率难以保证逐渐被新型的微孔膜空气过滤器取代，常用的滤芯是,DMF(,聚四氟乙烯聚合膜,),，如图,3-18,所示，具有耐高温消毒、孔径小、流量大、强疏水性等特性。,图,3-18,新型空气过滤器滤芯,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,4,、空气分过滤系统,工业化生产中，发酵罐的容积趋于大型化，一般发酵罐体积都在,60,100 m,3,左右，如果染菌造成发酵罐倒罐将导致重大经济损失，因而保证无菌空气的质量是非常重要的。常规的生产工艺是经总过滤除菌的压缩空气在进入发酵罐之前再经过分过滤器除菌处理。国内采用的空气分过滤器的过滤介质有两大类：,（,1,）耐高温高分子膜材 如聚偏氟乙烯微孔膜、聚四氟乙烯微孔膜等，由这些滤材做成的滤芯，可耐蒸汽,125,左右灭菌,30min,、反复灭菌达,160,次。,（,2,）金属烧结膜材 如镍制微孔膜、不锈钢微孔膜等。该类膜材的滤芯机械强度大，可重复高温蒸汽灭菌和多次再生，使用寿命长。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,以我国生产的,DJ-K,系列空气过滤器为例：,图,3-19 DJ-K,系列空气过滤器分过滤系统示意图,P-,压力表,T-,温度表,V-,空气阀,U-,排污阀,K-,取污阀,Z-,蒸汽阀,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,DJ-K,系列空气过滤系统包括：,DJ-KZ,蒸汽过滤器、,DJ-KY,预过滤器和,DJ - KF,精过滤器三部分组成。,蒸汽过滤器,介质为超细不锈钢纤维；,预过滤器,介质为聚丙烯滤膜；,精过滤器,介质为聚四氟乙烯滤膜，外壳用,304,不锈钢制成。,DJ-K,系列过滤器的空气流量范围从,3,/ min,200m,3,/ min,。,运行时，由空气总过滤器出来的压缩空气先经过,DJ-Ky,型空气预过滤器，除去空气管道中的铁锈微粒，再经,DJ-KF,空气精过滤器后进入发酵罐。定期灭菌时，蒸汽先经过,DJ-KZ,蒸汽过滤器，除去蒸汽中夹带的铁锈水，以防止精过滤器的微孔滤膜堵塞。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,DJ-K,系列空气过滤器具有以下性能特点：,(1),采用耐蒸汽灭菌的聚四氟乙烯,( PTFE),微孔滤膜作为过滤介质。可在,121 ,125 ,之间蒸汽消毒,30,分钟、反复,160,次。,(2),采用的,PTFE,膜是带支撑的微孔滤膜,并带强正电荷,具有较强的静电吸附作用,故较之一般的膜过滤器具有更高的过滤精度和强度,;,(3) PTFE,膜过滤器是一种强疏水性的膜材料,因此对过滤高湿性的空气极为有利。,第二节 发酵用压缩空气预处理及除菌设备,5,、空气过滤器的操作要点,为了使空气过滤器始终保持干燥状态，当过滤器用蒸汽灭菌时，应事先将蒸汽管和过滤器内部的冷凝水放掉；开始时先将夹套预热，然后将蒸汽直接冲入介质层中：小型过滤器的灭菌时间约为半小时，蒸汽从上向下冲；大型过滤器的灭菌时间约为,l h,，蒸汽一般先从下向上冲半小时，再从上向下冲半小时。,在使用过滤器时，如果发酵罐的压力大于过滤器的压力,(,这种情况主要发生在突然停止进空气或空气压力忽然下降,),，则发酵液会倒流到过滤器中来。因此，在过滤器通往发酵罐的管道上应安装单向阀门。,第三节 生物反应器,生物反应器,是指利用,生物体,（如,微生物、动植物细胞,）或,酶,所具有的特殊功能，在体外进行生物化学反应以获得其代谢产物或生物体的设备，,它的作用,是为细胞代谢提供一个适宜的物理和化学环境，使细胞能更快更好的生长以得到更多需要的生物量或代谢产物。,第三节 生物反应器,优良的生物反应装置应具有,：严密的结构，能承受一定的压力和温度且便于维修；良好的传质、传热和混合的性能；严密的结构且易于清洗和维修；灵敏的检测和控制仪表，适用于自动化控制；动力消耗小，能获得最大的生产效率和经济效益。,在制药工业中，生物反应器主要包括：,微生物反应器,，几乎所有抗生素生产都是利用发酵罐进行微生物培养；另一类是指,动、植物细胞生物培养反应器,，用来生产疫苗、单克隆抗体、多肽和蛋白质类、植物皂苷等药物。,第三节 生物反应器,一、微生物培养反应器,（一）通用式发酵罐,通用式发酵罐,通用式发酵罐属于机械搅拌式发酵罐，是指既具有机械搅拌又有压缩空气分布装置的发酵罐。由于这种型式的发酵罐是目前大多数发酵工厂最常用的，所以称为“通用式”。,第三节 生物反应器,1,、发酵罐,的结构,第三节 生物反应器,主要是实验用和用作种子罐。其容积为：实验室用为,1L-50L,，中试用为,50L-5000L,，种子罐为,50L-20000L,。,10L,台式发酵罐,种子罐,小型通用式发酵罐,第三节 生物反应器,大型机械搅拌,通风发酵罐,生产用的发酵罐日趋大型化。大型化的优点是提高了生产量,减少了能源消耗，节约生产成本，便于自动化控制,第三节 生物反应器,大,型,发,酵,罐,第三节 生物反应器,通用式发酵罐主要由罐体、搅拌器、挡板、轴封、空气分布器、传动装置、传热装置、冷却管、消泡器、人孔、视镜等组成，,（,1,）罐体,罐体材料,：复合不锈钢，衬里不锈钢板厚,2,3mm,。且应有一定的承压能力,2,；温度,130,。,罐顶上的接管有,：进料管、补料管、排气管、接种管和压力表 接管等。,罐身上的接管有,：冷却水进出管、空气进管、温度计管和测控仪表接口。,为了减少接管，如进料管、补料口和接种管合为一,个接口。罐体内要求双面焊接，焊接面要光滑无砂眼和,死角，防止杂菌潜伏在缝隙中。,第三节 生物反应器,图,3-21,一般大中型发酵罐罐顶部件布置图,第三节 生物反应器,已经加工成型的椭圆封头，正在加工中的筒体以及冷却蛇管,第三节 生物反应器,(2),搅拌装置,搅拌装置的作用,:,打碎气泡，加速和提高溶氧,;,使生物细胞,悬浮分散在发酵体系中，维持适当的气,-,液,-,固三相,混合,;,强化传质、传热过程。,发酵罐常用涡轮式搅拌器和旋桨式搅拌器。,涡轮式搅拌器,：是液体在搅拌器内作径向和切线运动,具,有流量小、压头较高的特点。为了避免气泡沿轴上,升，在搅拌器中央设有圆盘。叶片的形式分为平叶,式、弯叶式、箭叶式等。,螺旋转式搅拌器,：使液体作轴向和切向运动，具有循环,量大、压头低的特点。,第三节 生物反应器,b,六弯叶圆盘涡轮桨,a,六平叶圆盘涡轮桨,c,六箭叶圆盘涡轮桨,d,半管叶圆盘涡轮桨,e,圆弧叶圆盘涡轮搅拌桨,f,螺旋桨式搅拌器,图,3-23,发酵罐各种搅拌桨结构类型,第三节 生物反应器,径向流型,:,流体的流动方向垂直于搅拌轴，沿轴向流入，径向流出，碰到容器壁面分成两股流体分别向上、向下流动，再回到叶端，不穿过叶片，形成上、下两个循环流动称为，如图,3-22,（,a,）。,轴向流型：,流体的流动方向平行于搅拌轴，流体由桨叶推动，沿轴向流入，轴向流出，遇到容器底部再向上，形成上下循环动，如图,3-22,（,b,）所示。,图,3-22,搅拌流型,第三节 生物反应器,涡轮式搅拌器：,产生径向流型，,由于圆盘的存在，使罐内的流动分成上、下两个循环区,。,剪切力大，有利于破碎气泡，不利于微生物生长。涡轮式搅拌器具有结构简单、传递能量高、溶氧速率高等优点，但存在的缺点是轴向混合差，搅拌强度随着与搅拌轴距增大而减弱，当培养液较粘稠时，混合效果下降。,螺旋桨式搅拌器：,产生轴向流型，中间的液体向下运动，靠近罐壁的流体向上运动，,具有循环量大、压头低的特点，,混合均匀程度高且混合效果较好，但重量较大，价格贵。,第三节 生物反应器,搅拌器的选用,涡轮搅拌器产生径向流型，气体分散能力强，但是功率消耗大，作用范围小；,螺旋桨式搅拌器产生轴向流型，混合性能好，功率消耗低，作用范围大，但对气体的控制能力弱，对气泡的分散效果差。,近些年来国外已开始将轴向流型搅拌器应用到发酵罐上。径向型涡轮搅拌器由于圆盘的存在，使罐内的流动分成上、下两个循环区。虽然区域内能充分混合，但两个区域间则混合不均，相反轴向流型搅拌器则不存在分区循环等,系列缺欠，能使全罐达到良好的循环状态,第三节 生物反应器,国外实践结果表明：在保持单罐产量一定的条件下，以三层搅拌器为例，最下层仍采用径向型的涡轮搅拌器，其余两层改用轴向流型搅拌器时，与三层均采用径向流型搅拌器相比，功率消耗可降低,15,30,国内医药行业在,50m,3,发酵罐内，上两档改装轴流向型搅拌器，作土霉素发酵试验表明，不但消耗功率下降，发酵指数也提高了近,15, 。,第三节 生物反应器,（,3,）挡板,在搅拌过程中会产生切向流，由于切向分速度的作用，液体在罐内做圆周运动，产生的离心力使罐内液体在径向分布抛物线型，中心形成下凹现象。,图,3-24,无挡板及加挡板搅拌流型,第三节 生物反应器,图,3-24,（,a,）可以看出,不带挡板,的情况下，发酵液中间的液面下陷，形成一个很深的漩涡。因为在搅拌过程中会产生切向流，由于切向分速度的作用，液体在罐内做圆周运动，产生的离心力使罐内液体在径向分布抛物线型，中心形成下凹现象。当搅拌转速增大时，这个现象会更严重，甚至可能使搅拌器不能完全浸没在发酵液中，导致搅拌功率下降。,图,3-24,（,b,）是,加了挡板,的搅拌流型。液体从搅拌器径向甩出，遇到挡板后形成向上、向下两部分垂直方向运动，向上部分经过液面后，流经轴中心而转下。由于挡板的存在，有效地阻止了罐内液体的圆周运动，下凹现象消失。,第三节 生物反应器,挡板的作用,：,改变液流的方向，促使液体激烈翻动，增加溶解氧；防止搅拌过程中液面中央形成旋涡而导致搅拌器露在料液以上，起不到搅拌作用。,全挡板条件：,指罐内加了挡板使旋涡基本消失,或指达到消除液面旋涡的最低挡板条件。竖立的蛇管、列管、排管也可以起挡板作用,.,装设,4,6,块即可满足全挡板条件。,挡板宽度：（,）,D,挡板与罐壁之间的距离：,挡板宽度的,(1/5,1/8),，避免形成死角，防止物料与菌体堆积。,第三节 生物反应器,（,4,）通气装置,通气装置的作用是向发酵罐内吹入无菌空气，并使空气均匀分布。通气管的出口应位于最下层搅拌器的正下方，空气由通气管喷出上升时，被搅拌器打碎成小气泡，与培养液充分混合。空气分布装置的形式有环形管及单管。,第三节 生物反应器,图,3-25,环形空气分布管,环形管,：该装置以环径为搅拌器直径的倍较有效，喷孔直径为,5,8mm,，喷孔向下，喷孔的总截面积约等于通风管的截面积。这种空气分布装置的空气分散效果不如单管式。同时由于喷孔容易堵塞，现已很少采用。,第三节 生物反应器,图,3-26,单管式空气分布装置,单管式,：,是工厂常用的。单管式管口对正罐底中央，装于最低一挡搅拌器下面，喷口朝下，管口与罐底的距离约,40mm,，该距离可根据溶氧情况适当调整，通常通风管的空气流速取,20,米,/,秒。为了防止吹管吹入的空气直接喷击罐底，加速罐底腐蚀，可在罐底中央焊上直径为,100,300mm,的不锈钢保护板，叫补强板，可延长罐底寿命。,第三节 生物反应器,（,5,）轴封,定义：运动部件与静止部件之间的密封叫作轴封。如搅,拌轴与罐盖或罐底之间。,作用：使罐顶或罐底与轴之间的缝隙加以密封，防止泄,漏和污染杂菌。,形式：填料函和端面轴封两种。目前多用端面式轴封。,端面式轴封又称机械轴封。密封作用是靠弹性元,件（弹簧、波纹管等）的压力使垂直于轴线的动,环和静环,光滑表面,紧密的,相互贴合,，并作,相对转,动,而达到密封。,第三节 生物反应器,图,3-27,填料函轴封,1-,转轴；,2-,填料压盖；,3-,压紧螺旋；,4-,填料箱体；,5-,铜环；,6-,填料,填料函轴封,：由填料箱体、填料底衬套（铜环）、填料压盖和压紧螺栓等零件构成，使旋转轴达到密封的效果。,填料箱体固定在发酵罐顶盖的开口法兰上，将转轴通过填料函，然后放置有弹性的密封填料，放上填料压盖，拧紧压紧螺栓。填料受压后，产生弹性变形堵塞了填料和轴之间的间隙，转轴周围产生一定的径向压紧力，起到密封作用。,第三节 生物反应器,优点：,填料函密封具有结构简单，填料拆装方便的特点。,缺点：,死角多，很难彻底灭菌，容易渗漏及染菌；轴的磨损较严重；增加由于摩擦所损耗的功率，产生大量的摩擦热；寿命较短，需经常更换填料。由于上述原因，现在好气性发酵罐中已经很少使用。,第三节 生物反应器,端面轴封,单端面机械轴封示意图,端面轴封又称机械轴封，系指两块密封元件垂直于轴线的光洁而平直的表面上相互贴合，并作相对转动而构成密封的装置。端面轴封由弹性元件（弹簧、波纹等）、动环和静环组成。,第三节 生物反应器,单端面机械轴封,双端面机械轴封装置,第三节 生物反应器,端面密封原理：,密封作用是靠弹性元件（弹簧、波纹管等）的压力使垂直于轴线的动环和静环光滑表面紧密的贴合，并作相对转动而达到密封，机械轴封有三个密封点：,静环与罐体之间的密封,通常用各种形状有弹性的辅助密封圈来防止液体从静环与罐体之间泄漏,这是一静密封。,动环与轴之间的密封,也是用各种形状有弹性的辅助密封圈来防止液体从动环与轴之间泄漏,这是一个相对静止的密封。但当端面磨损时，允许其作补偿磨损的轴向移动，这个补偿移动是靠弹簧或波纹板来实现的。,动环与静环之间的密封,靠弹性元件（弹簧、波纹管等）和密封液体压力在相对运动的动环和静环的接触面（端面）上产生一适当的压紧力使两个光洁、平直的端面紧密贴合,端面间维持一层极薄的液体膜达到密封的作用。,第三节 生物反应器,机械轴封的优缺点,优点：,密封可靠，在一个较长的使用期中不会泄漏或很少泄漏；清洁，无死角，可以防止杂菌污染；使用寿命较长，质量好的可使用,2,5,年；维修周期长，在正常工作的情况下，不需要维修；摩擦功率耗损少，一般约为填料函密封的,10,50,；适用范围广，能用于低温、高温、高真空、高压、各种转速以及各种腐蚀性、磨蚀性、易燃、易爆、有毒介质的密封。,缺点：,结构复杂，需要一定的加工精度和安装技术。,第三节 生物反应器,（,6,）机械消沫装置,由于发酵液中含有大量的蛋白质，故在强烈的通气搅拌下将产生大量的泡沫，严重的泡沫将导致发酵液外溢和增加染菌机会。减少发酵液泡沫较实用有效的方法是加入消沫剂或使用机械消泡装置将泡沫打碎，通常生产上是将这两种方法联合使用。消泡装置就是安装在发酵罐内转动轴的上部或安装在发酵罐排气系统上、可将泡沫打破或将泡沫破碎分离成液态和气态两相的装置。,第三节 生物反应器,安装在发酵罐内的消泡器,最简单实用的为,耙式消泡器,，可直接安装在上搅拌的轴上，消泡耙齿底部应比发酵液面高出适当高度。因为泡沫的机械强度较小，当少量泡沫上升时，耙齿可将泡沫打碎。由于这一类消泡器安装在搅拌轴上，往往因搅拌转速太低而效果不佳。,图,3-29,耙式消泡器,第三节 生物反应器,图,3-30,半封闭涡轮消沫器,对于下伸轴发酵罐，罐顶空间较大，可以在顶部安装,半封闭涡轮消沫器（,图,3-30,），在高速旋转下泡沫可直接被涡轮打碎或被涡轮抛出撞击到壁面而粉碎；消沫效果较好。,第三节 生物反应器,安装在发酵罐外的消泡器,图,3-31,旋风离心式消泡器,这类消泡器安装于发酵罐的排气口上，如离心式消泡器。工作原理与旋风分离器相同，当夹带泡沫的气流以切线方向进入分离器中，由于离心力的作用，液滴被甩向器壁，经回流管返回发酵罐，气体则从中间管排出，这种分离器只能分离含有少量液滴的气体，且对小泡沫不能全部破碎分离。,第三节 生物反应器,图,3-32,改进的旋风离心式消泡器,图,3-32,为改进的旋风离心式消泡器，它可以和消泡剂盒配合使用，并根据发酵罐内的泡沫情况自动添加消泡剂。,第三节 生物反应器,3-33,碟片式消泡器,碟片式消泡器,碟片式消泡器装在发酵罐的顶部，如图,3-33,所示，当泡沫溢上与碟片式消泡器接触时，泡沫受高速旋转离心碟的离心力作用，将泡沫破碎分离成液态及气态两相，气相沿碟片向上，通过通气孔沿空心轴向上排出，液体则被甩回发酵罐中而达到消泡目的。该设备除沫效果好，但投资较大。,第三节 生物反应器,（,7,）传热装置,因发酵需要恒温下进行，而发酵工程中，生物氧化产生的热能和机械搅拌产生的热能回改变发酵温度影响生产。所以需要有传热装置。,传热装置：夹套、内蛇管、外盘管等。根据实际生产选择合适的装置。目前采用较多的是外盘管，将半圆形的型钢、角钢制成螺旋形焊接在发酵罐的外壁，同时提高冷却剂的流速和质量，以提高传热系数。,第三节 生物反应器,夹套式传热装置,多用于容积较小的发酵罐或种子罐（,5m,3,以下）优点是结构简单，加工容易，罐内死角少，容易清洗灭菌；缺点是传热壁较厚，冷却水流速低，降温效果差。,竖式蛇管传热装置,蛇管分组安装在发酵罐内，有四、六或八组不等。优点是冷却水在罐内的流速大，适用于冷却水温度较低的地区，水的用量较少。,立式蛇管,虽具有传热系数高的优点,但占据了发酵罐容积，据计算罐内立式蛇管体积约占发酵罐容积的,1.5 %,。此外，罐内蛇管也给罐体清洗带来了不便，弯曲位置容易被蚀穿,。,第三节 生物反应器,目前新型发酵罐的冷却面移至罐外，采用外盘管作为传热装置。该蛇管是将半圆形的型钢、角钢制成螺旋形，或将条形钢板冲压成半圆弧形焊接在发酵罐的外壁，同时提高冷却剂的流速和流量，以提高传热系数。该装置提高了发酵罐的容积，且罐体容易清洗，增强了罐体强度，因而可降低罐体壁厚，使整个发酵罐造价降低。,第三节 生物反应器,2,、通用式发酵罐的计算,图,3-34,通用式发酵罐的几何尺寸,H,0,-,筒身高度,D-,罐径,W-,挡板宽度,B-,下搅拌器距底间距,s-,两搅拌器间距,d-,搅拌器直径,h-,封头高度,H,L,-,液位高度,（,1,）发酵罐的几何尺寸,通用式发酵罐的有关几何尺寸、符号如图,3-34,。,H,0,3,d/D=1/2,1/3,W/D=1/8,1/12,第三节 生物反应器,图,3-34,通用式发酵罐的几何尺寸,H,0,-,筒身高度,D-,罐径,W-,挡板宽度,B-,下搅拌器距底间距,s-,两搅拌器间距,d-,搅拌器直径,h-,封头高度,HL-,液位高度,其中,H,0,/D,称高径比，指罐筒身高与罐径之比，是通用式发酵罐的特性尺寸参数，高径比的合理取值既要保证传质效果好、空气利用率高，又要保证综合经济指标和理和使用方便。在抗生素工业中，一般种子罐采用；发酵罐。,第三节 生物反应器,（,2,）发酵罐的容积计算,罐的总容积,式中， 为罐圆柱部分的体积， ； 是上或下封头体积， ， 取决于封头的形状，如果是椭圆形封头，则有：,式中， 为椭圆封头的直边高度，,m,；,D,为罐的内径，,m,。,第三节 生物反应器,式中， 为椭圆封头的直边高度，,m,；,D,为罐的内径，,m,。,第三节 生物反应器,罐的有效容积,罐的有效容积是指罐的实际装料体积，与罐的总容积之间关系如下：,式中， 为装料系数，实际生产中，因通气和搅拌会导致发酵液面上升和产生泡沫，因此罐中实际装料量不能过大，一般取。,罐公称容积,发酵罐的“公称容积”指罐的筒身容积加底封头容积之和，其值为整数，一般不计入上封头的容积，平常所说的多少体积的发酵罐是指罐的“公称容积”。,第三节 生物反应器,（,3,）发酵罐数量的计算,在一定生产能力下，发酵罐个数,式中,发酵罐个数，个；,每个发酵周期相当的天数，,d,，如发酵周期,72h,，则 天；,每个发酵罐的总容积；,每天需要生产的发酵液量，,m,3,/d,第三节 生物反应器,（,4,）发酵罐冷却面积计算,“发酵热”的计算,通常称发酵过程中产生的净热量为“发酵热”，其热平衡方程式表示如下：,式中， 为生物体生命活动过程中产生的热量； 为机械搅拌放出的热量； 为发酵过程通气带出的水蒸汽所需的汽化热及空气温度上升所带走的热量； 为发酵罐外壁和大气间的温差而散失的热量。可近似计算：,第三节 生物反应器,一般发酵热的大小因品种或发酵时间不同而异，通常发酵热的平均值为,10500,33500,。由于生物氧化作用产生的热量不能通过简单的计算求得，一般要靠实测求得。在实验测量中，维持培养液温度恒定不变的情况下，定时测量发酵罐中传热装置冷却水进、出口的温度和冷却水用量就可由下式求得：,式中， 为发酵液每小时放出的最大热量，,kJ/h,；,W,为冷却水流量，,kg/h,；,c,为冷却水比热容， ,),；,t,1,、,t,2,为冷却水进出口温度，。,第三节 生物反应器,传热面积的计算,可按传热方程式来确定,：,式中，,F,为发酵罐的传热面积，,m,2,；,K,为换热装置的传热系数， ）； 为发酵液与冷却水间的平均温度差， 可通过下式计算：,式中， 为发酵液温度, ,；,t1,、,t2,为冷却水进、出口温度，。,第三节 生物反应器,（二）机械搅拌自吸式发酵罐,1,、机械搅拌自吸式发酵罐的特点,与传统的机械搅拌通风发酵罐相比，自吸式发酵罐具有如下的优点与不足：,(1),不必配备空气压缩机及其附属设备，节约设备投资约,30,左右，减少厂房占地面积。,(2),气泡小，气液均匀接触，因而溶氧系数高、能耗较低。,(3),设备便于自动化、连续化，减少劳动力，生产效率高、经济效益高。,第三节 生物反应器,图,3-34,机械搅拌自吸式发酵罐,自吸式发酵罐,是负压吸入空气的，故发酵系统不能保持一定的正压，较易产生杂菌污染，同时，必须配备低阻力损失的高效空气过滤系统。由于结构上的特点，大型自吸式充气发酵罐的搅拌充气叶轮的线速度在,30m/s,左右，在叶轮周围形成强烈的剪切区域。因此该反应器只适用于酵母和杆菌等耐受剪切应力能力较强的微生物发酵生产。,第三节 生物反应器,2,、机械搅拌自吸式发酵罐的工作原理,（,a,）四叶轮转子,（,b,）定子,转子,由罐底向上升入的主轴带动，当转子转动时空气则由导气管吸入。空气管与转子相连接,在转子启动前,先用液体将转子浸没,然后启动马达使转子转动。由于转子高速旋转,液体或空气在离心力的作用下,被甩向叶轮外缘,在这个过程中,流体便获得能量,若转子的转速愈快,旋转的线速度也愈大,则流体,(,其中还含有气体,),的动能也愈大,流体离开转子时,由动能转变为静压能也愈大,在转子中心所造成的负压也越大，因此空气不断地被吸入，甩向叶轮的外缘，通过,定子,而使气液均匀分布甩出。,第三节 生物反应器,自吸式发酵罐,是靠转子转动形成的负压而吸气通风的，吸气装置是沉浸于液相的，所以为保证较高的吸风量，发酵罐的高径比,H/D,不宜取大，且罐容增大时，,H/D,应适当减少，以保证搅拌吸气转子与液面的距离为,2,3m,。对于黏度较高的发酵液，为了保证吸风量，应适当降低罐的高度。为了保证发酵罐有足够的吸气量，搅拌器的转速应比一般通用式的要高。功率消耗量应维持在,3,左右,.,第三节 生物反应器,(,三,),气升环流式发酵罐,1,、气升环流式发酵罐的特点,(1),反应溶液分布均匀：,(2),较高的溶氧速率和溶氧效率：,(3),剪切力小，对生物细胞损伤小,（,4,）传热良好：,(5),结构简单，易于加工制造。,（,6),操作和维修方便：,第三节 生物反应器,2,、气升环流式发酵罐的工作原理,（,a,）内循环气升式发酵罐,（,b,）外循环气升式发酵罐,图,3-36,气升环流式发酵罐,第三节 生物反应器,内循环气升式发酵罐,图,3-36,（,a,）,：发酵罐装有导流筒，将发酵液分为上升区（导流筒内）和下降区（导流筒外），在上升区的下部安装了空气喷嘴。加压的无菌空气通过喷嘴喷射进到发酵液中，通过气液混合物的湍流作用而使空气泡分割细碎，与导流筒内的发酵液密切接触，供给发酵液溶解氧。由于导流筒内形成的气液混合物密度降低，加上压缩空气的喷流动能，因此使导流筒内的液体向上运动；到达反应器上部液面后，一部分气泡破碎，二氧化碳排出到反应器上部空间，而排出部分气体的发酵液从导流筒上边向导流筒外流动，导流筒外的发酵液因气含率小，密度增大，发酵液则下降，再次进入上升管，形成循环流动，实现混合与溶氧传质。,第三节 生物反应器,外循环气升式发酵罐,图,3-36,（,b,）,：,在罐外装设上升管，上升管两端与罐底及罐上部相连接，构成一个循环系统。在上升管的下部装设空气喷嘴，空气喷嘴以,250,300m/s,的速度喷入上升管，借喷嘴的作用使空气泡分割细碎，与上升管的发酵液密切接触。由于上升管内的发酵液轻，加上压缩空气的喷流动能，使上升管的液体上升，罐内液体下降而进入上升管，形成反复的循环，供给发酵液所耗的溶解气量，使发酵正常进行。,第三节 生物反应器,二、动物细胞培养反应器,动物细胞培养是从动物取出体内细胞，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体细胞生存、生长并维持结构和功能的一门技术。,通过动物细胞培养可以生产出许多与人类健康和生存密切相关的药品和生物制品，如从病毒疫苗到干扰素；从诊断试剂到治疗蛋白、单克隆抗体等，形成了一项独特的高新技术产业，显示了巨大的工业发展前景。,第三节 生物反应器,动物细胞培养与植物细胞、微生物细胞培养相比较的区别：,（,1,）,动物细胞没有细胞壁，因而对剪切力非常敏感，因此搅拌要柔和。,（,2,）动物细胞对培养基的营养要求非常苛刻，需要在多种氨基酸，维生素，辅酶，核酸，激素和血清等物料配制成的培养液中才能很好地生长；,（,3,）动物细胞对于培养环境的适应性差，对环境更加敏感，包括,pH,、溶解氧、温度等都比微生物有更高的要求。,（,4,）动物细胞相对于微生物来说，生长比较缓慢，因而培养时间较长，而且动物细胞的培养条件有非常适合杂菌的生长，所以需要更为严格的防污染措施。,第三节 生物反应器,动物细胞体外培养的特性有两类：,一类是贴壁培养,，即细胞在培养时需要贴附于壁上。原来是圆形的细胞一经贴壁就迅速铺展，然后开始有丝分裂，并很快进入对数生长期。一般在数天后铺满生长表面，形成致密的细胞单层。当细胞生长到表面相互接触时，就停止分裂增殖，这种现象称为接触抑制。所以如需继续培养，就要将单层细胞再分散，稀释后再重新接种，进行传代培养，大多数动物细胞属于贴壁依赖性细胞；,二是悬浮培养,，细胞可以像微生物一样悬浮培养，为非贴壁依赖型。它们主要是血液、淋巴组织细胞或肿瘤细胞，能在培养器中自由悬浮生长，可采用类似微生物培养的方法进行培养。,滚瓶系统,传统的用于动物细胞培养的反应器是滚瓶，当在滚瓶中装入培养液并接种后，平放在一个装置上，使滚瓶缓慢旋转，动物细胞就在滚瓶内壁贴壁生长繁殖，培养到一定时间后将细胞收获。目前许多生物制品工厂就用,4,30l,大小的成千上万个滚瓶进行培养，来生产疫苗。,滚瓶系统具有结构简单、投资少、技术成熟等优点，但是滚瓶系统劳动强度大，占用空间大，细胞产率低。,单克隆抗体技术,1975,年英国科学家,Milstein,和,Kohler,将产生抗体的,B,淋巴细胞与肿瘤细胞融合，成功建立了单克隆抗体技,术，而获得,1984,年诺贝尔医学和生理学奖。,每个,B,淋巴细胞仅专一地产生、分泌一种针对某种抗,原决定簇的特异性抗体，而肿瘤细胞可以无限增殖，因,此杂交瘤细胞既可无限生长又能分泌大量单克隆抗体。,单克隆抗体技术的最主要优点是可以用不纯的抗,原分子大量制备纯一的单克隆抗体。,动物克隆,生物繁殖后代通常是以精、卵细胞结合的有性生殖方式进行。通过体细胞繁殖个体的方法称为无性繁殖。克隆是指离体条件下的无性繁殖。,1981,年,Imenses,率先报告用小鼠幼胚细胞核克隆出正常小鼠。随后，,1984,年,Willadsen,用未成熟羊胚细胞核克隆出一头羊。,英国,PPI,生物技术的罗斯林（,Roslin,）研究所的维尔穆特,(Wilmut),博士,1997,年,2,月,27,日在世界著名权威杂志,Nature,宣布的用乳腺细胞的细胞核克隆出一只绵羊“ 多莉,(Dolly) ”,的消息。“多莉”的诞生，既说明了体细胞核的遗传全能性，也翻开了人类以体细胞核竞相克隆哺乳动物的新篇章。此项技术因而荣登美国,Science,周刊评出的,1997,年十大科学发现 的榜首。,绵羊,B,乳腺细胞核,易核卵,融合卵,绵羊,C,子宫,多莉,植入,植入,生产,克隆多莉羊示意图,取出,未受精卵,去核,电激,体