鸡神经病靶酯要点

,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Company Logo,*,Click to edit Master title style,成年鸡神经病靶酯酶的同一性和特征描述,制作者,:,吕飞燕,Contents,小结,实验结果,所选用的材料与方法,文章的主要内容总结,文章出处及作者简介,文章出处及作者简介,文章出处：,GENE 2009.01,作者及其简介：常平安，伍一军等,伍一军，男，安徽桐城人。佐治亚医学院分子医学与遗传学系基因调控专业博士后，现任中国科学院动物学研究所研究员，中科院研究生院教授，博士研究生导师。主持分子毒理学实验室，专业方向为分子毒理学，主要研究领域为神经毒理学、环境毒理学以及药物引起的神经疾病。主要研究兴趣在于环境有害化学物质的神经毒性机制；,神经病靶标酯酶引发迟发性神经毒性的分子机理；,文章的主要内容总结,这篇文章主要讲,NTE,的基因排序。,NTE,的基因中的活性部位。,NTE,的基因中不同部位被,GFP,标记后主要在哺乳动物中的分布。,GFP,标记的,cNTER,可以被,macroautophagy,和蛋白酶体这两种东西破坏，而导致其含量下降。,NTE,的概念及其基本特点,神经病变靶标酯酶,(neuropathy target esterase ,NTE),是在研究有机磷化合物引起的迟发性神经病变,(organophosphate2induced delayed neuropathy ,OPIDN),的发生机制过程中发现的。通常认为,NTE,的抑制和“老化”是,OPIDN,发生的前提,。,NTE,是一个由,1 327,个氨基酸组成的跨膜蛋白。将不同的,NTE,肽段在大肠杆菌中重组表达,发现具有有机磷敏感性和戊酸苯酯水解活性的重组多肽至少含有,727-1216,氨基酸序列,这一重组多肽被称为,NTE,酯酶活力域,(NTE esterasedomain ,NEST),。以往的研究结果提示,NTE,除了具有酯酶活力外,NEST,在神经细胞分化和神经系统发育中起着重要作用,。,NTE,不仅存在于脑、脊髓和周围神经，在外周淋巴细胞内含量也很高。,所选用的材料与方法,成年鸡及各个实验用的一些基本试剂。,1.,分子克隆鸡,NTE,基因的调控序列。,2.,鸡,NTE,序列的扩展和延伸。,3.,质粒的构建,4.,细胞培养和转染,5.,给细胞施加,MG132,AC,3-MA,雷帕霉素等处理因素。,6.Western blotting,分析。,7.NTE,活性检,8.,共聚焦显微镜测定,简介,实验结果,鸡的完整的,NTE,序列是,4501bp,组成,（,base pair kilo-base pair DNA,碱基对数目,生物学上描述,DNA,常用的,kb,、,nt,、,bp kb=,千碱基对,kilobase nt,核苷酸,nucleotide bp,碱基对,base pair,）,鸡的,NTE,有两个不同的区域，其中一个是推定的调节区（,cNTER,）,另外一个是催化区，也叫,NTE,酶的活性区域,序列分析表明，鸡的,NTE,的排列与人和鼠的,NTE,排列有高度的相似性，其中与人有,80%,的相似性，与鼠有,79%,的相似性。,实验结果二，,cNEST,是有,NTE,活性的，而不是,cNTER,是用细胞转染的方法来证明的。,就是用,GFP,来标记,cNEST,和,cNTER,的羧基端，,48h,的转染后，用,Western blot,法来测定下她们的分子量，结果表明他们的分子量分别为,65,和,83kDa,NTE,活性测定是在,HEK293T cells,中看,GFP,的表达。,Distribution of GFP tagged cNTER and cNEST protein inmammalian cells,因为,cNTER and cNEST,都用,GFP,来标记，所以,cNTER and cNEST,的分布可以用荧光显微镜直接分析出来,荧光显微镜结果,NTER,和,NEST,分子量的测定,不同处理因素对,cNTER,的影响,Discussion,相对于哺乳动物的,PNPLAs,，鸡的,PNPLAs,尚未引起足够的重视。尽管成年母鸡常被用作,OPIDN,的动物模型。但是关于,NTE,的排序和分子特征知道的很少。,在目前的研究中，鸡的,NTE,被完整的分离出来，并且在氨基酸水平与人和小鼠有高度的相似性。,另外，蛋白质结构和区域与人也有高度的相似性。,An ER like localization of pcNTER-GFP was observed and cNTE was reasonably,considered to be an ER-anchored protein.,cNTE may be degraded by macroautophagy.,.,Chicken NTE was an ER-anchored protein,An ERlike localization of pcNTER-GFP was observed and cNTE was reasonably,considered to be an ER-anchored protein.,Therefore, cNTE may be degraded by macroautophagy.,that cNTE was degraded by the proteasome and the similar,D-box sequences may act as recognition signal for degradation.,However, further studies are required to determine whether these,residues affect the degradation of cNTE.,总结,In summary, chicken NTE gene was firstly identified. By characterization of the regulatory and esterase activity domain of chicken NTE,chicken NTE was confirmed to be an ER-anchored protein and be degraded by macroautophagy and the proteasome pathway.,These results may provide some newclue to reveal the mechanismof OPIDN because NTE was proposed as the initial target during the process of OPIDN.,Thank You !,