人类辅助生殖技术应用概述

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/3,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/3,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/3,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/3,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/3,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/3,*,人类辅助生殖技术应用概述,中山大学附属第一医院,徐艳文,2020/11/3,1,人工授精,夫精人工授精,赠精人工授精,常规体外受精,-,胚胎移植（,in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET,）,常规体外受精,单精子卵胞质内注射,（,intracytoplasmic sperm injection, ICSI,）,射出精,睾丸,/,附睾精,植入前遗传学诊断（,preimplantation genetic diagnsosi, PGD,）,人类辅助生殖技术,2020/11/3,2,适应证,男方因素,宫颈因素,免疫因素,女方排卵障碍,不明原因性不孕,步骤,夫精人工授精,临床妊娠率,10-15%,2020/11/3,3,促排卵治疗,诱发排卵,有排卵障碍的情况下,以诱发单个卵泡或少数卵泡的发育为目的,超排卵,在可控制的范围内诱发多卵泡发育和成熟,为,ART,奠定基础,治疗的对象很多本身有正常的排卵功能,2020/11/3,4,中山大学附属第一医院,IUI,中促排卵的作用,授精时间更精确,纠正排卵障碍,提供更多可用的卵子,2020/11/3,5,中山大学附属第一医院,适应证,输卵管盆腔因素,子宫内膜异位症,排卵障碍经促排卵治疗无效,严重少弱畸精症,无精症,反复,IUI,失败,免疫性不孕,常规体外受精,-,胚胎移植（,in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET,）,2020/11/3,6,步骤,药物促排卵,经阴道穿刺取卵,体外授精,胚胎培养,胚胎移植,胚胎冷冻,新鲜周期失败后解冻胚胎移植,常规体外受精,-,胚胎移植,in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET,2020/11/3,7,GnRH,激动剂：达必佳，达菲林,GnRH,拮抗剂：加尼瑞克，思则凯,Gn,：,重组,FSH,：果纳芬，普丽康,尿源性,FSH,：丽申宝，福特蒙,尿源性,FSH,和,LH,：贺美奇，,HMG,主要药物,2020/11/3,8,促排卵方案,-,短效长方案,GnRH-a 0.1mg qd,月经第二十天黄体中期,GnRH-a 0.05mg qd,Gn,14-21,天,垂体达降调节标准,主导卵泡达,18mm,时注射,HCG,，,36hr,后取卵,2020/11/3,9,促排卵方案,-,长效长方案,月经第二十天黄体中期,GnRH-a 1.3mg,单次注射,Gn,14-21,天,垂体达降调节标准,主导卵泡达,18mm,时注射,HCG,，,36hr,后取卵,2020/11/3,10,促排卵方案,-,拮抗剂方案,Gn,主导卵泡达,18mm,时注射,HCG,，,36hr,后取卵,月经第,2-3,天启动,促排,5-6,天加拮抗剂,2020/11/3,11,ART,临床治疗风险,穿刺并发症,血栓栓塞,妊娠相关并发症,其它风险,2020/11/3,12,经阴道穿刺取卵术并发症,严重并发症（,0.5%-1.5%,）,阴道出血,100ml 0.8%,盆腔感染,0.6%,盆腔脓肿,卵巢扭转,盆腔出血,卵巢过度刺激综合征,2020/11/3,13,取卵术后卵巢改变,非常脆,容易撕裂,通过测定,Hb,和,Hct,的变化，推测通常取卵术后平均出血量,232,130 mL,避免在卵巢内横向摆动,2020/11/3,14,卵巢过度刺激综合征,（,ovarian hyperstimulation syndrome, OHSS,）,-,促排卵,最严重的医源性并发症,-,正常妊娠中罕见,*,发生率,:,-,轻度：,8 23%,-,重度,：,3.5-8%,COH -,轻中度：,7.3%,-,重度：,4.2%,2020/11/3,15,病理及临床表现,体液外渗,毛细血管,通透性增加,胸水、腹水、心包,积液、全身水肿,低血容量,血液浓缩,高凝状态,肾灌注减少,少尿、无尿,电解质紊乱,血栓形成,氮质血症,腹胀、恶心、呕吐,咳嗽、气促,2020/11/3,16,卵巢过度刺激综合征,（,ovarian hyperstimulation syndrome, OHSS,）,临床表现,卵巢体积显著增大,血液浓缩，腹腔积液，胸腔积液,少尿,电解质紊乱,血栓形成、,ARDS,及多器官功能衰竭,2020/11/3,17,OHSS,分度,分类,卵巢大小,症状,轻度,5-10cm,1,级：腹胀不适,2,级：,1,级症状,+,恶心、呕吐及,/,或腹泻,中度,10cm,3,级：,2,级症状,+,超声确定腹水,4,级：,3,级症状,+,腹水、胸水的临床表现和呼吸困难,重度,12cm,5,级：,4,级症状,+,血液浓缩，血粘度增加、低血容量，肾灌注减少及少尿,2020/11/3,18,OHSS,分度,根据,OHSS,发生的时间，又分为早发型,OHSS,和晚发型,OHSS,早发型发生在,HCG,后,3,7,天，其发生与卵巢对促性腺激素的反应性有关，并且被外源性,HCG,激发,晚发型,HCG,后,12,17,天，多伴有多胎妊娠，系内源性,HCG,所致,晚发型,OHSS,程度往往比早发型严重,2020/11/3,19,体外授精,-,胚胎移植的实验室步骤,2020/11/3,20,实验室仪器设备,实验室质控,体外授精,胚胎培养,胚胎移植,胚胎冷冻,胚胎解冻,体外授精,-,胚胎移植的实验室步骤,2020/11/3,21,A,、显微操作系统,B,、程序冷冻仪及液氮罐,C,、,CO,2,浓度测试仪和温度测试仪,D,、电子天平，超纯水仪和渗透压仪,E,、冰箱,F,、空气净化设备,G,、,CO,2,和,N,2,，混合气体气瓶,实验室的仪器和设备,2020/11/3,22,1,、显微镜,A,、相差显微镜,B,、体视镜,C,、倒置显微镜,D,、荧光显微镜,实验室的仪器和设备,2020/11/3,23,IVF,工作站,实验室的仪器和设备,2020/11/3,24,CO2,培养箱：,实验室的仪器和设备,Thermo,K-system G-185,Cook MINC Benchtop Incubator,2020/11/3,25,1,、质量控制：,温度：,233 ,湿度：,30,60%,气压： ,10Pa,尘埃：百级（配子操作区），万级（胚胎实验室），十万级（更衣室，取精室）,可挥发有机物（,VOC,）： ,0.5ppm,振动，光照及噪音：,胚胎培养实验室的质量控制和管理,2020/11/3,26,2,、管理：,A,、按功能和清洁度分区,B,、实验室禁止吃，喝，抽烟以及使用化妆品,C,、培养箱和温台的监测,D,、冰箱的监测,E,、液氮罐的监测,胚胎培养环境的质量控制和管理,2020/11/3,27,实验室禁止使用酒精等可挥发性有机物和紫外照射,可用蒸馏水擦拭台面,可用专用洗涤剂擦拭可能会被污染的台面或者区域,可使用吸尘器吸走灰尘,培养箱的清洁和消毒,实验室的清洁,2020/11/3,28,1,、温度和湿度：,37.00.1,，,90%,2,、,pH,：,7.1 ,pHi 7.2,，,7.2 pHe 7.4,3,、气体：,CO2,和,O2,4,、渗透压：,270,290mOsm/kg,胚胎培养系统,2020/11/3,29,培养基的基本组成,水：,99%,无机盐：维持培养基的渗透压和酸碱度,碳水化合物：提供胚胎发育的能量,氨基酸：促进胚胎体内外发育,维生素：调控细胞代谢,激素和生长因子：促进胚胎发育,大分子物质：维持胶体渗透压，中和毒素,抗氧化剂：减少氧自由基对胚胎的损伤,螯合剂：螯合重金属离子,抗生素：防止污染,胚胎培养系统,2020/11/3,30,培养液配制和平衡,胚胎培养系统,2020/11/3,31,2020/11/3,32,单气培养：,CO2(5-6%),，,O2(21%),和,N2(74%),三气培养：,CO2(5-6%),，,O2(5%),和,N2(90%),优势：更接近生理状态（,2-8% O2,）,单气培养和三气培养,2020/11/3,33,1,、精子的形态结构,精子和卵子,精子形态,精子变态示意图,2020/11/3,34,2,、卵子的形态结构,卵母细胞颗粒细胞复合体,GV,期,MI,期,MII,期,2020/11/3,35,异常卵母细胞,2020/11/3,36,1,、常规体外授精,体外授精,精卵混合,精卵结合,2020/11/3,37,2,、卵胞质内单精子注射（,ICSI,）,2020/11/3,38,人胚胎体外发育,2020/11/3,39,异常受精,单原核,多原核,三原核,无原核,2020/11/3,40,胚胎发育阶段：卵裂球的数目,胚胎形态学评分：,胚胎的碎片评分：,卵裂期评分标准,8-1-1,8-2-1,8-2-3,2020/11/3,41,1,期：囊胚腔小于胚胎体积的一半,2,期：囊胚腔大于胚胎体积的一半,3,期：完全囊胚，囊胚腔与胚胎体积相等,囊胚的发育阶段,1,期,2,期,3,期,2020/11/3,42,4,期,5,期,6,期,4,期：扩张囊胚，囊胚腔大于胚胎，透明带变薄,5,期：孵化囊胚，胚胎部分孵出,6,期：完全孵化囊胚,2020/11/3,43,胚胎移植数目：,35,岁以下第一周期：,2,个,35,岁以上或者第二周期以上：,3,个,单胚胎移植：,胚胎移植,2020/11/3,44,胚胎移植管装载,胚胎移植管,空气,空气,胚胎,培养基,2020/11/3,45,1,、精子冷冻：,2,、卵子冷冻：,3,、胚胎冷冻：,4,、生殖组织冷冻：,配子和胚胎的冷冻及复苏,2020/11/3,46,程序化冷冻（慢速冷冻）,玻璃化冷冻（快速冷冻）,冷冻方法,2020/11/3,47,Slow cooling,- 0.3C/min,慢速冷冻法,将胚胎放入含有一定浓度的冷冻保护剂处理后，慢速降温（,0.23/min,）,在这个过程中，随着细胞外温度的逐渐降低和细胞外冰晶的形成，细胞以一种平衡的方式逐步脱水。直到温度降至,-150 ,，至于液氮保存。,2020/11/3,48,Vitrifi,c,ation,- 50.000C/min,1 sec.,玻璃化冷冻法,采用更高浓度的冷冻保护剂处理细胞，快速降温，使细胞内外的液体均达到玻璃化状态,2020/11/3,49,玻璃化冷冻过程（两步平衡法,）,在不同浓度的冷冻液中进行平衡,ES,VS,2020/11/3,50,2.,装管,3.,投入液氮，在液氮罐中保存。,2020/11/3,51,冷冻前,置入冷冻液后,0min,置入冷冻液后,4min,置入冷冻液后,8min,2020/11/3,52,囊胚冷冻前人工皱缩,皱缩前,皱缩后,2020/11/3,53,控制性超排卵,B,超监测下取卵,体外受精和胚胎培养,胚胎活检,对活检的细胞进行检测,选择胚胎移植入宫腔,植入前遗传学诊断,(PGD),2020/11/3,54,常染色体隐性遗传病,-thalassaemia,Cystic fibrosis,Spinal muscular atrophy,Sickle cell disease,常染色体显性遗传病,Huntingtons disease,Myotonic dystrophy,Charcot-Marie-Tooth disease,性染色体遗传病,Fragile X syndrome,DMD,Haemophilia,PGD,适应证,-,单基因性疾病,2020/11/3,55,PGD,适应证,-,染色体病,相互易位,罗氏易位,非整倍体筛查,2020/11/3,56,胚胎活检,卵裂期活检,囊胚期活检,2020/11/3,57,男方,45,，,XY,，,t(13;14)(p10;q10),胚胎,D 3 FISH,结果与,D 5/ D 6 array CGH,结果对比,2020/11/3,58,非整倍体筛查,-SNP,芯片,2020/11/3,59,2020/11/3,60,谢谢,2020/11/3,61,