第二章 中药化学成分提取、分离和鉴定的一般方法

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第,2,章 中药化学成分提取、分离 和鉴定的一般方法,目的要求,了解中药化学成分的类型及理化性质。,掌握,中药有效成分的提取、分离方法。,了解中药有效成分结构鉴定的方法。,教学内容,第,1,节 中药中所含各类化学成分简介,第,2,节 中药化学成分预试验,第,3,节 提取、分离中药有效成分常用的方法,第,4,节 中药化学成分鉴定和结构研究简介,第,5,节 药理供试样品的配制,第1节 中药中所含各类化学成分简介,生物碱,糖和苷,醌类,苯丙素类,黄酮类,强心苷,皂苷,萜类和挥发油,其他成分,生物碱（,alkaloids）,生物体内的含氮有机物，有似碱的性质（能与酸成盐），有生理活性。,盐酸小檗碱,(,Berberine,hydrochloride),苷类（,glycosides）,苷元与糖或糖的衍生物通过苷键（缩醛键）连接而成的化合物。苷易水解成苷元和糖。,人参皂苷,Rb1,(,ginsenoside,Rb1,),水解,糖类（,saccharides,）,单糖：无色晶体，味甜。易溶于水，难溶于有机溶剂。,低聚糖：,210个单糖缩合而成。味甜，溶于水，难溶于,有机溶剂。,多糖：10个以上单糖脱水缩合而成。无甜味，大多不溶于水。,D-,葡萄糖,L,鼠李糖,D,葡萄糖醛酸,(,D-glucose,),(L-,rhamnose,) (D-,glucuronic,acid),-D-Gal-(14)-D-Glc-D-Fru-(16)-(14) -,-D-Glc,醌类（,quinones,）,具有醌式结构化合物。分子中多有酚,OH，,有一定酸性。,大黄酚 大黄酚,-D-,葡萄糖苷,(,chrysophanol,) (chrysophanol-8-D-glucoside),苯丙素类（,phenylpropanoids,）,以苯丙基（,C6-C3）,为基本骨架的化合物。,香豆素,：,具有苯骈,-,吡喃酮母核的一类天然化合物。,木脂素,：有两分子苯丙素衍生物聚合而成的天然化合物。,七叶内酯 五味子酯甲,(,aesculetin,) (,schisantherin,A),黄酮类（,flavonoids,）,两个苯环通过三碳链连接而成（,C6-C3-C6）,的化合物。多有酚,OH，,有一定酸性。,黄芩素 黄芩苷,(,baicalein,) (,baicalin,),萜类和挥发油（,terpeonids,and volatile oils ）,萜类,：由甲戊二羟酸衍生、分子式符合（,C,5,H,8,）,n,的衍生物。,挥发油,（,精油）：可随水蒸气蒸馏的与水不相混溶的无色或淡黄色透明油状液体。,薄荷醇 细辛醚,(menthol) (,asarone,),强心苷（,cardica,glycosides ）,对心脏有显著生理活性的甾体苷类。无色，有旋光性、对粘膜有刺激性。,洋地黄毒苷,(,digitoxin,),皂苷（,saponins,）,由螺甾烷类或三萜类化合物与糖结合的低聚糖苷，前者为甾体皂苷，后者为三萜皂苷。无色，对粘膜有刺激性，有吸湿性、发泡性和溶血性。,薯蓣皂苷 人参皂苷,Rb1,(,dioscin,) (,ginsenoside,Rb1),其他成分,有机酸,鞣质,氨基酸、蛋白质和酶,植物色素,树脂,油脂和蜡,无机成分,微量元素,第,2,节 中药化学成分预试验,目的：初步判定中药中含有哪些化学成分，为设计,提取、分离方案奠定基础。,1.,预试验的分类,2.,预试验的方法,3.,预试验供试液的制备,1.预试验的分类,单项预试：重点检查某类成分。,系统预试：全面检查各类成分。,2.预试验的方法,试管法,纸片法,薄层及纸色谱法,3.预试液的制备,水浸液,5g/50ml,水，浸泡过夜，过滤。滤液,A,用以检查氨基酸、多肽、蛋白质；滤渣水浴60加热10,min，,过滤。滤液,B,用以检查糖、 有机酸、苷、鞣质、水溶性生物碱等。,乙醇提取液,中性醇提液：5,g/50ml 95%,乙醇，水浴加热回流20,min，,过滤。滤液用以检查黄酮、蒽醌、香豆素、萜、苷等。,酸性醇提液：2,g/10ml 0.5%,盐酸乙醇溶液，水浴加热回流10,min，,过滤。滤液用以检查生物碱等。,石油醚提取液,1,g/10ml，,浸泡2-3,h，,过滤。,滤液用以检查挥发油、萜类等。,常用显色剂：,生物碱：碘化铋钾试剂 棕红色,酚：三氯化铁试剂 蓝色,有机酸：溴酚蓝试剂 蓝色背景黄色斑点,皂苷：磷钼酸试剂 蓝-蓝紫色,内酯、香豆素：异羟肟酸铁试剂 蓝-紫,黄酮：三氯化铝试剂、盐酸-镁粉、乙酸镁试剂 +,蒽醌：氢氧化钾试剂 红色,强心苷：3,5-二硝基苯甲酸试剂 紫红色,氨基酸：茚三酮试剂 +,挥发油：油斑试验 无斑点,有机化合物：硫酸试剂,第,3,节 提取分离中药有效成分常用的方法,概述,提取方法,分离纯化方法,影响因素,1.,概述,（,1,）中药化学成分的构成特点,同种植物含有多种结构类型的化学成分,总成分含量少而种类多,有效成分含量低,（,2,）提取分离前进行文献调研,研究进展,a.,做过否？,b.,研究的深度和广度如何？,c.,如何开展？,药材鉴定,a.,原植物的拉丁学名,b.,采集地点和时间,c.,药及部位,d.,民间药用情况,（,3,）已知,/,未知成分研究策略,已知成分：结构类型，确定提取、分离路线；,未知成分：系统预试验，活性跟踪；,2.,提取方法,溶剂提取法,水蒸气蒸馏法,超临界流体萃取法,其他方法,（,1,）溶剂提取法,原理：相似相溶。,溶剂穿透入药材粉末的细胞膜，溶解溶质，形成细胞内外溶质的浓度差，将溶质渗出，进行提取。,范围：所有化学成分。,溶,剂,沸点,介电常数,(20,),溶解度,溶剂,/,水,%,水,/,溶剂,%,石,油,醚,环,己,烷,30-120,80.7,1.89,2.02,苯,乙,醚,氯,仿,乙酸乙酯,正,丁,醇,80,35,61,77,118,2.29,4.34,4.81,6.02,17.8,0.175,6.04,0.815,6.07,7.45,0.063,1.465,0.072,2.98,20.5,丙,酮,乙,醇,甲,醇,水,56,78,65,100,20.7,24.3,32.6,80.4,任意混合,石油醚,环己烷,苯,氯仿,乙醚,乙酸乙酯,丙酮,乙醇,甲醇,水,常用溶剂的性质,中药各类成分的极性与提取溶剂的关系,植物成分极性强弱,植物成分结构类型,适于提取溶剂,亲脂性强,叶绿素、脂肪油、挥发油,石油醚,亲脂性较强,游离生物碱、苷元、甾类、萜类,、,某些有机酸,乙醚、氯仿,中等,极性,中偏小,某些苷类,(,如强心苷等,),氯仿,-,乙醚,(2:1),中 等,某些苷类,(,如黄酮苷类,),乙酸乙酯,中偏大,某些苷类,(,如蒽醌苷、皂苷等,),正丁醇,亲水性较强,极性大的苷、糖类、氨基酸等,丙酮、乙醇、甲醇,亲水性强,蛋白质、粘液汁、糖类、氨基酸、无机盐、苷类,水,（,1,）溶剂提取法,选择溶剂注意点：,a.,对有效成分溶解度大，对杂质溶解度小,b.,不与化学成分起化学变化,c.,经济、易得、使用安全 。,常用操作方法：,浸渍法,渗漉法,煎煮法,回流提取法,连续回流提取法,影响提取效率,的,因,素,原料粉碎度,提取时间,提取温度,设备条件,回流提取装置,冷凝管,通气侧管,药材,虹吸管,溶剂,水浴,索氏提取装置,优劣对比：,浸渍：简便，但效率低，用水时易发霉。,渗漉：效率高，效果好（较澄清）；但溶剂消耗大，费时。,煎煮：简便，但杂质溶出多，难过滤。,回流提取：效率高，但溶剂消耗大，操作烦琐。,连续回流提取：效率高,溶剂消耗少,但操作烦琐。,*,后三种不适宜加热易分解成分的提取。,（,2,）水蒸气蒸馏法,原理：与水蒸气产生共沸点。,范围：适用于具有挥发性的，能随水蒸气蒸馏而不被破坏，与水不发生反应，且难溶或不溶于水的成分的提取。如,挥发油,、小分子量的生物碱等。,（,3,）超临界流体提取法,原理：用处于超临界条件下的特殊流体（介于气体和液体之间）为溶剂，具有更低的黏度和更高的扩散速度，对许多物质有很强的溶解能力。,如,CO,2,：,Tc,31.4,，,Pc 7.37Mpa,范围：,适用于对热及化学不稳定的成分、低极性的成分的提取。,特点,：接近室温工作，适用对热不稳定的成分，无有机溶剂残留，对环境无公害，提取效率高，节约能耗等。但对设备要求高。,（,4,）其他方法,升华法,樟脑（樟木） 咖啡因（茶叶）,压榨法,固相提取法,超声提取法,微波提取法,酶提取法,3.,分离纯化方法,利用溶解度差异进行分离,利用分配系数差异进行分离,利用吸附性能差异进行分离,利用分子大小不同进行分离,其他方法,（,1,）溶解度差异,原理：相似相溶。,方法：重结晶法、沉淀法等。,溶解度差异,原理：被分离组成在两种互不相溶的溶剂中的分配系数（,K,）的不同达到分离。,K,与萃取次数的关系：,分离因子（,b,值）,与分离难易的关系：,方法：简单萃取法、连续萃取法、液滴逆流法（,DCCC,）、高速逆流法（,HSCCC,）、气相色谱法（,GC,）、液相色谱法（,LC,）等。,b,= K,A,/ K,B,K,值与萃取次数成反比。,即,K,值越大，萃取次数越少，反之越多。,b,值越大，越易分离；,b,1,时，无法分离,（,2,）分配系数差异,简单萃取法,用于比水轻的溶剂 用于比水重的溶剂,连续萃取器,液滴逆流分配装置图,能在短时间内分离成两相，并可生成有效的液滴。由于流动相形成液滴，在较细的萃取管中与固定相有效接触、不断摩擦形成新的表面，促进溶质在两相溶剂中的分配 ，且不会产生乳化现象 。,（,3,）吸附性能差异,物理吸附（表面吸附）,规律：“相似者易于吸附”,特点：无选择性、可逆吸附、快速,原理：吸附与解吸附的往复循环,三要素：吸附剂（硅胶、氧化铝、活性炭） 、溶质,(,被分离物,),、溶剂,极性强弱的判断：,(1),亲水性基团与极性成正比，亲脂性基团成反比；,(2),游离型化合物亲脂、极性弱，解离型亲水、极性强。,溶剂的极性：依据介电常数来决定,极性吸附剂,：吸,附剂一定时，溶质极性越强，洗脱剂极性也应越强。,非极性吸附剂：吸附剂一定时，溶质极性越强，洗脱剂极性应越弱。,（,3,）吸附性能差异,化学吸附：,特点：有选择性、不可逆吸附,原理：产生化学反应,酸性物质与氧化铝发生化学反应,碱性物质与硅胶发生化学反应,氧化铝容易发生结构的异构化,半化学吸附：,特点：吸附力介于上述二者之间,原理：氢键吸附，如聚酰胺、大孔树脂等,（,4,）分子大小差异,原理,透析法（半透膜膜孔的分子筛作用）,凝胶滤过法,(,三维网状结构的分子筛作用,),超滤法,(,分子大小不同引起的扩散速度的差别,),超速离心法,(,溶质在超速离心作用下沉降性的差别）,三要素,载体,(,葡聚糖凝胶,),、溶质,(,被分离物,),、洗脱剂,应用,蛋白质的脱盐精制；蛋白、多糖的分离；大分子化合物如糖苷类成分的精制,（,5,）离解度不同（离子交换树脂）,原理,利用酸、碱化合物在解离状态时与阴、阳离子树脂产生离子交换的原理达到分离的方法。,三要素,固定相,(,离子交换树脂,),、溶质,(,被分离物,),、洗脱剂,应用,酸、碱类化合物如氨基酸、生物碱、有机酸的分离,常用色谱分离方法介绍 ：,吸附剂 分离原理 吸附规律 应 用,硅胶 吸附原理 弱酸性、极性吸附剂 广泛（酸、碱及,化合物极性越大、 中性成分均可）,吸附能力强（难洗脱）,溶剂极性越小，吸附力越强,氧化铝 吸附原理 碱性、极性吸附剂 碱性、中性成分,吸附规律同上 （酸性成分与铝络合）,活性炭 吸附原理 非极性吸附剂 从稀水溶液中富集微量物质,吸附规律与上相反 脱色（脂溶性色素）,聚酰胺 氢键吸附 形成氢键越多，吸附力越强 黄酮、蒽醌的分离,大孔吸附树脂 吸附原理 非极性化合物易被非极性树脂吸附 糖与苷的分离,吸附色谱,类 型 固定相 流动相 应 用,正相色谱 水, BAW,系统 极性、中极性物质分离,（以,PPC,为例）,反相色谱,ODS 20.2 105 1mg,左右,制备用高压液相色谱（,HPLC,）, 5mg,中压液相色谱,( MPLC ) 5.0520.2 105 100mg,低压液相色谱,( LPLC ) 10mg,液,-,液分配色谱（分配原理）,葡聚糖凝胶色谱,类 型 原 理 溶胀溶剂 应 用,葡聚糖凝胶 分子筛（大小） 水 多糖、多肽、,（,Sephadex,G,） 蛋白质分离,羟丙基葡聚糖凝胶 分子筛（糖苷） 水、极性有机溶剂 不同类型,（,SephadexLH-20,） 吸附原理（苷元） 或二者的混合溶剂 化合物分离,离子交换吸附树脂,树脂类型 原 理 应 用,阳离子交换树脂 离子交换 从酸水溶液中吸附碱性成分（生物碱）,强酸性（,R-SO3-H,+,） （阳离子） （除去酸性、中性成分）,弱酸性（,-COO-H,+,）,阴离子交换树脂 离子交换 从碱水溶液中吸附酸性成分（有机酸）,强碱性（,RN+(CH3)3CI,-,） （阴离子） （除去碱性、中性成分）,弱碱性,(,伯、仲、叔胺,),（,6,）其他纯化方法,盐析法,中药水提液，加无机盐达到一定浓度（饱和），有些成分则分离。,常用盐：,NaCl,Na,2,SO,4,MgSO,4,(NH,4,),2,SO,4,等。,例，三颗针提取小檗碱加,NaCl,。,分馏法,利用不同成分的沸点不同而分离。,常用于挥发油、生物碱等。,例，毒芹总碱中毒芹碱,166-167,，羟基毒芹碱,226,。,4.,影响因素,光照,酸碱,温度,溶剂,层析过程,光照,酸,碱,溶剂,层析过程,第,4,节 中药化学成分鉴定和结构研究简介,化合物的纯度测定,结构研究的主要程序,结构研究的主要方法,结构研究实例,1.化合物的纯度测定,晶形,结晶均匀、一致,熔点,熔点明确、敏锐，熔距,0.5-1.0,薄层色谱或纸色谱,三种以上不同展开剂展开，均呈现单一斑点,HPLC,、,GC,等色谱方法,呈现单一色谱峰,2.结构研究的主要程序,初步推断,化合物类型,测定分子式，,计算不饱和度,确定官能团、,结构片断、骨架,推断平面结构,确定主体结构,1.,观察样品在提取、分离过程中的行为,2.,测定理化常数，如溶解度、色谱行为、定性反应等,3.,结合文献调研,1.,高分辨质谱（,HR-MS,）,2.,元素分析（,EA,）,3.,同位丰度比法,1.,测定解析波谱数据（,UV,IR,NMR,MS,）,2.,官能团定性定量分析,1.,综合分析谱学数据及定性、定量分析结果,2.,与已知化合物进行比较,1.,测定,CD,或,ORD,2.,测定,NOE,或,2D,NMR,3.X,射线衍射分析,4.,人工合成,3.结构研究的主要方法,（,1,）确定分子式、分子量，计算不饱和度,分子式的确定,元素分析法 实验式（结合分子量） 分子式,同位素丰度比法（,500,） ,HR-MS ,分子量、分子式,不饱和度的计算,U=1+n,4,-0.5(n,1,-n,3,),MS,冰点下降法,沸点上升法,粘度法,凝胶滤过法,3.结构研究的主要方法,（2）化学法确定化合物结构骨架与官能团,颜色反应,化学反应,3.结构研究的主要方法,（3）波谱法研究化合物结构,UV,IR,NMR,MS,ORD,CD,X-,射线单晶衍射,紫外可见吸收光谱（,UV-,vis,）,定义,分子中的电子可因光线照射从基态跃迁至激发态，其中,-*、n-*,跃迁由吸收紫外光或可见光引起，此区域测得的光谱为紫外可见光谱。测定样品量很少。,应用,已知化合物：化合物的初步鉴定及含量测定。,未知化合物：推断骨架，如含共轭双键、,-,不饱和羰基、芳香化合物等。,电子跃迁与,UV-,vis,光谱,藏茴香酮的,UV,光谱,定义,分子中价键的伸缩及弯曲振动在光的红外区域（4000-500,cm,-1,）,引起吸收，测得的图谱为红外光谱。反映功能团与波长的关系。只需5,-,10,g。4000-1500cm,-1,为特征区，1,500-500cm,-1,为指纹区。,应用,已知化合物：测定红外光谱叠图或检索红外光谱数据。,未知化合物：用于确定官能团以及芳环取代的判断等。,红外光谱（,IR,）,s-(-)-,藏茴香酮的,IR,光谱,定义,化合物分子在磁场中受电磁波的辐射，有磁距的,1,H,原子核吸收一定能量产生能级的跃迁，即发生核磁共振，以吸收峰的频率对吸收强度作图所得。氢同位素中，,1,H,丰度最大，信号灵敏，,1,H-NMR,易测，应用广。,应用,测定化学位移（,0-20ppm）、,谱线的积分面积及裂分情况（重峰数及偶合常数），提供分子中,1,H,的类型、数目及相邻原子或原子团的信息。,核磁共振氢谱（,1,H-NMR,）,化学位移（,Chemical shift,）,1,H,核因周围化学环境不同，其外围电子云密度以及绕核旋转时产生的磁的屏蔽效应也不同。不同类型的,1,H,共振信号出现在不同的区域，可识别。,峰面积,由于,1,H,谱上积分面积与分子中的总质子数相当，故如知分子式，可据此算出每个信号所相当的,1,H,数。,信号的裂分及偶合常数,磁不等同的两个或两组,1,H,核在一定距离内会因相互自旋偶合干扰而使信号发生分裂，表现出不同的裂分，如,s,inglet,、,d,oublet,、,t,riplet,、,q,uartet,、,m,ultiple,等。,不同类型氢核化学位移的大致范围,NOE,效应,当两个质子,H,A,和,H,B,在空间非常接近时，对,H,A,做饱和照射时，,H,B,的信号强度会增加，这种现象称为,NOE,效应。,当照射,3.84ppm,（,OCH,3,）信号时，,6.88ppm,处,5-H,的信号增强，,判断,OCH,3,应处于,6-C,上。,2DNMR,1,H-,1,H COSY：,相邻质子间的偶合关系。,13,C-,1,H COSY：,HMQC，,1,H,和与其直接相连的,13,C,的偶合关系。,HMBC，,1,H,和与其远程偶合的,13,C,的关系。,乙酸乙酯的,1,H-,1,H COSY,图谱,定义,化合物分子在磁场中受电磁波的辐射，有磁距的,1,3,C,原子核吸收一定能量产生能级的跃迁，即发生核磁共振，以吸收峰的频率对吸收强度作图所得。,应用,提供的结构信息是分子中各种不同类型及化学环境的碳核化学位移（,0-200ppm），,异核偶合常数及弛豫时间，其中利用度最高的是化学位移。,核磁共振碳谱（,13,C-NMR,）,噪音去偶谱（全氢去偶谱,COM,或宽带去偶谱,BBD,）,采用宽频的电磁辐射照射所有,1,H,使之饱和后测定,1,3,C-NMR,谱。,1,H,对,1,3,C,的偶合全部消除，所有,1,3,C,信号在图谱上均作为单峰出现，无法确定连接的,1,H,数，但对判断,1,3,C,信号的化学位移很方便。,选择氢核去偶谱（,SPD,）或远程选择氢核去偶谱（,LSPD,）,对某个或某几个氢核进行照射，以消除其偶合影响。此时峰形发生改变的信号只是与之有偶合关连的,1,3,C,信号。,DEPT,通过改变照射,1,H,核的脉冲宽度（,）或设定不同的驰豫时间，使不同类型的,1,H,信号在谱图上呈单峰并分别呈现正向峰或倒置峰，灵敏度高，信号间重叠少，一种常规测定方法。,-,紫罗兰酮的质子非去偶谱,-,紫罗兰酮的噪音去偶谱,-,紫罗兰酮,9,位羰基的,LSPD,谱,a.,质子非去偶谱,b.,照射,7-H,8-H,c.,照射,7-H,10-H d.,质子噪音去偶谱,e.,照射,10-H f.,照射,8-H,10-H,-,紫罗兰酮的,DEPT,谱,定义,MS,是记录分析样品在质谱仪中经高温气化（,300,），在离子源受一定能量冲击产生阳离子，同时发生某些化学键的有规律的断裂，而后在稳定磁场中按质量和电荷之比（,m/z,）顺序进行分享并通过检测器表达的图谱。,应用（测定分子式和分子量）,已知化合物：通过比较质谱图进行鉴定。,未知化合物：由碎片峰及裂解特征推定或复核分子的部,分结构。,质谱（,MS,）,EI-MS,（电子轰击电离, electron impact ionization,）,测定时需先加热气化再电离，故易热分解或难气化的化合物，测不到分子离子峰。,FD-MS,（场解析电离, field desorption ionization,）,将试样稀溶液涂在钨丝发射极上，通过真空密封系统进入离化室作为阳极，再安装阴极，加,10kV,的高电压使其电离。适用于热不稳定、极性大、难挥发的化合物。高质量区的信息较为详尽。,FAB-MS,（快原子轰击电离, fast atom bombardment,）,从离子枪射出的一次离子经加速后在碰撞室通过交换电荷，产生高速中性离子，该中性离子撞击试样即可使之电离，得到分子离子及进一步裂解的碎片。碎片类型与,FD-MS,相同，但低质量区的结构信息也较为详尽。,桂皮酸乙酯,EI-MS,图,Balanitin-1,的,FD-MS,图,ORD,（旋光谱，,Optical,Rotatory,Dispersion,）,定义,用不同波长的偏振光照射光学活性化合物，并用波长对比旋光度或摩尔旋光度作图所得的曲线。,应用,推断不对称分子的构型和构象。,CD,（圆二色谱，,Circular,Dichroism,）,定义,记录化合物在紫外光与可见光区所产生的椭圆偏振光的椭圆度与波长的关系。,CD,谱是透过介质后的光的吸收曲线，而,ORD,则是它的分散曲线。,应用,测定手性化合物的构型、构象、确定某些官能团在手性分子中的位置等。,X,射线单晶衍射,定义,通过测定化合物晶体对,X,射线的衍射谱，再通过计算机用数学方法解析衍射谱，再还原为分子中各原子的排列关系，最后获得每个原子在某一坐标系中的分布，给出化合物化学结构，获得分子的全貌，是一种很好的测定化合物分子结构的方法。同时还能测定出化合物结构中的键长、键角、构象、绝对构型等结构细节。,应用,测定大分子物质结构。,4.结构研究举例,今由某药材中分离得到一种成分,A,，测得下列数据：,无色针晶，,mp 154-156,，,a 59(EtOH),易溶于,MeOH,EtOH, H,2,O,，难溶于,CHCl,3, Et,2,O,Molish,反应（），,FeCl,3,反应（）,IR(cm,-1,): 32503500, 1610, 1590, 1575, 1075, 1045, 1020, 1010, 860, 830,MS (,m/z,): 286 (M+), 163, 145, 127, 124 (100%),；其乙酰物,m/z,496,（,M+,）,苦杏仁酶水解后得一个溶于乙醚的针晶,B,及,D-,葡萄糖,酶水解后所得针晶,B,，测得下列数据：,mp 112115,元素分析,C 67.4% H 6.50%,Gibbs,反应（），,FeCl,3,反应（,+,）,MS (,m/z,): 124 (M+),1,H-NMR (d): 3.97 (1H, t, D2O,交换消失,),4.51 (2H, d),6.78, 7.18 (4H, AA, BB,系统,),8.20 (1H, s, D2O,交换消失,),第,5,节,中药药理供试样品的配制,常用制剂,中药制剂浓度表示法,1.常用制剂,（1）水溶液,易溶于水的成分用蒸馏水或生理盐水配制,用稀酸或稀碱溶液时,pH4-9,为宜。可加热或加增溶剂。,（2）低浓度有机溶剂,适用于易溶于有机溶剂，而难溶于水的提取物。常用乙醇、丙二醇等,，,含量10%。可加入增溶剂，有机溶剂:增溶剂:水=1:1:8。,（3）油剂,适用于不溶于水而易溶于油的成分，用精制植物油配制。,（4）乳剂,适用于脂溶性物质。用精制植物油配制，常用吐温-80、,PEG-400,等。油:乳化剂:水=1:1:8。,（5）混悬剂,适用于油、水中均不溶的提取物。常用助悬剂5%淀粉、0.5%,CMC-Na、1%,西黄芪胶等。,（6）冻干剂,适用于对热不稳定的成分如蛋白质、鞣质等。提取物经冷冻干燥，临用前用水配制。,（7）固体制剂,难于制成上述剂型的中药提取物，直接粉碎,。,2.中药制剂浓度表示法,（,1,）生药量,单味中药：如生附子水煎液 0.125,g/ml,中药复方：如麻黄汤水煎液 3,g/ml,（,2,）有效部位含量,（,3,）摩尔浓度（,mol/L，M）,小结：,1.,植物中存在的各类化学成分。,2.各提取方法的原理及操作，重点溶剂法。,3.各分离方法的原理及操作，重点萃取法、色谱法。,思考题：,1.,填空题,（,1,）常用有机溶剂中极性最小,石油醚,，极性最大,水,。,（,2,）铅盐沉淀法一般在,水或稀醇,溶液中，先加,中性醋酸铅或碱式醋酸铅,，后加,硫化氢气体或硫酸钠等试剂,。,2.,选择题,（,1,）中药成分最节省的提取方法是,A.,回流法,B.,渗漉法,C.,连续回流法,D.,浸渍法,E.,煎煮法,（,2,）常用溶剂中不能与水完全混溶的溶剂是,A.,乙醇,B.,丙酮,C.,乙醚,D.,正丁醇,E.,氯仿,3.,判断题,（,1,）色谱法是分离中药成分单体最有效的方法。,正确,（,2,）铅盐沉淀法常用于中药生产中除去杂质。,正确,4.,问答题,（,1,）常用提取方法有哪些？各有何优、缺点或适用情况？,（,2,）试述各分离方法的原理及操作。,自测题：,（,1,）常用提取方法有哪些？各有何优、缺点或适用情况？,溶剂提取法,原理：相似相溶。,范围：所有化学成分。,水蒸气蒸馏法,原理：与水蒸气产生共沸点。,范围：适用于具有挥发性的，能随水蒸气蒸馏而不被破坏，与水不发生反应，且难溶或不溶于水的成分的提取。如挥发油、小分子量的生物碱等。,超临界流体萃取法,原理：用处于超临界条件下的特殊流体（介于气体和液体之间）为溶剂，具有更低的黏度和更高的扩散速度，对许多物质有很强的溶解能力。,如,CO2,：,Tc,31.4,，,Pc 7.37Mpa,范围：适用于对热及化学不稳定的成分、低极性的成分的提取。,（,2,）试述各分离方法的原理及操作。,溶解度差异,原理：相似相溶。,方法：重结晶法、沉淀法等。,分配系数的差异,原理：被分离组成在两种互不相溶的溶剂中的分配系数（,K,）的不同达到分离。,方法：简单萃取法、连续萃取法、液滴逆流法（,DCCC,）、高速逆流法（,HSCCC,）、气相色谱法（,GC,）、液相色谱法（,LC,）等。,吸附性能差异,物理吸附（表面吸附）,规律：“相似者易于吸附”,特点：无选择性、可逆吸附、快速,原理：吸附与解吸附的往复循环 三要素：吸附剂（硅胶、氧化铝、活性炭） 、溶质,(,被分离物,),、溶剂,化学吸附,：,特点：有选择性、不可逆吸附,原理：产生化学反应,酸性物质与氧化铝发生化学反应,碱性物质与硅胶发生化学反应,氧化铝容易发生结构的异构化,半化学吸附：,特点：吸附力介于上述二者之间,原理：氢键吸附，如聚酰胺、大孔树脂等,分子大小差异,原理,透析法（半透膜膜孔的分子筛作用）,凝胶滤过法,(,三维网状结构的分子筛作用,),超滤法,(,分子大小不同引起的扩散速度的差别,),超速离心法,(,溶质在超速离心作用下沉降性的差别,三要素,载体,(,葡聚糖凝胶,),、溶质,(,被分离物,),、洗脱剂,应用,蛋白质的脱盐精制；蛋白、多糖的分离；大分子化合物如糖苷类成分的精制,离解度不同（离子交换树脂）,原理,利用酸、碱化合物在解离状态时与阴、阳离子树脂产生离子交换的原理达到分离的方法。,三要素,固定相,(,离子交换树脂,),、溶质,(,被分离物,),、洗脱剂,应用,酸、碱类化合物如氨基酸、生物碱、有机酸的分离,