性传播疾病STD实验室相关检查业务学习用

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,*,性病实验室检查班,后业务学习,地点：,行政楼5楼会议室,时间：201,4,年,11,月23日,性传播疾病实验室相关检查,一、梅毒、淋病、,非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、生殖器疱疹、软下疳、细菌性阴道病；,二、各性病的实验室检测的检测,方法及临床意义；,概述,历史上：（传统,）,把通过性活动传染的疾病称为性病,（Venereal diseases, VD）,主要指:,梅毒,(syphilis),淋病,(gonorrhea),性病肉芽肿,软性下疳四种,又称经典性病,概念更新,上世纪年代以来发现,许多病原体也可以通过,性生活,传播,概念有了大幅度的更新,迄今为止大约已发现余种性病,同时：,四种性病大都有了明确诊断手段及治疗方法，明显地得到了抑制,性病的发病“顺位谱”，有了变化，鲜为人知的性病提前，而久为人知的性病占到了后位,1970年，世界卫生组织把旧名称“性病”改为“性传播疾病”。,（Sexually transmitted diseases, STD）,性病（VD）：,是指通过性交传染的、具有明显生殖器损,害症状的全身性疾病。4种,性传播疾病（STD）：,是指通过性接触可以传染的一组传染病,在,我国,人们简称为性病 。包容20余种,病毒,生殖器疱疹,单纯疱疹病毒(HSV) (主要由HSV-2引起),生殖器CMV感染,巨细胞病毒(CMV,),乙型肝炎,乙型肝炎病毒(HBV),甲型肝炎,甲型肝炎病毒(HAV),尖锐湿疣,人乳头瘤病毒(HPV),生殖器传染性软疣,传染性软疣病毒,获得性免疫缺陷综合征,(AIDS)人类免疫缺陷病毒(HIV,),非细菌性微生物,性病性淋巴肉芽肿,(CT,L型引起),非淋菌性尿道(宫颈) 炎,沙眼衣原体(CT,DK型引起),解脲支原体（UU）,人型支原体(MH),生殖道支原体(GU),梅毒,梅毒(苍白)螺旋体(TP),细菌,淋病,奈瑟淋病双球菌(NG),腹股沟肉芽肿,肉芽肿荚膜杆菌(DG,CBG),软下疳,杜克雷嗜血杆菌（HD),细菌性阴道炎,加特纳嗜血杆菌(GV),志贺氏菌属,痢疾志贺氏菌感染,弯曲杆菌病,弯曲杆菌,B群链球菌,阴部感染及阴道病,细菌性阴道病,某些阴道厌氧菌,真菌,由白色念珠菌/拟酵母菌：,念珠菌性阴道炎,念珠菌性龟头包皮炎,外阴阴道真菌感染,表浅部真菌：,股癣,原虫 ：,滴虫性阴道炎 尿道炎（阴道毛滴虫）,阿米巴病（溶组织阿米巴原虫）,蓝氏贾第鞭毛虫感染,体表寄生虫：,阴虱病（阴虱）,阴部疥（疥螨）,让患者能接受,社会性很强的疾病,我国重点防治的性病,艾滋病,(AIDS),梅毒,(syphilis),尖锐湿疣(condyloma acuminatum),淋病(,Gonorrhea),生殖器疱疹(,genital herpes),非淋菌性尿道炎(NGU),软下疳(,chancroid),性病性淋巴肉芽肿(,lymphogranuloma Venereum),STD的诊断：,病史接触史,临床表现,实验室检查,STD监测和疗效判断的重要依据,实验室检查,性病实验室检查特点,诊断技术种类较多（,形态学、微生物学、免疫学、分,子生物学等许多检测方法）,临床检验工作中不确定性,（需借助图谱病原体形态,典型和不典型，可借助书籍资料篇幅有限,疾病的社会性,（,健康、精神、经济、家庭和声誉,）,性病实验室诊断原则,慎重：,不能盲目滥用各种非标准检测方法、注重社会效益,和客观条件，,新技术：,对待新技术一定要科学比对，慎重使用,梅毒,一、梅毒的临床分期,后天梅毒 ：,一期梅毒,二期梅毒,三期梅毒(晚期梅毒),先天梅毒（胎传梅毒）,梅毒一期皮损-硬下疳,梅毒二期皮损,梅毒晚期损害,二、梅毒的实验室诊断,1.检查病原体的试验,2.检测抗体血清学检查,检查病原体的试验,1.暗视野显微镜检查法（,WHO推荐）,2.Fontana-Tribondean镀银染色法,（难、敏感性差）,3.单克隆免疫银光法（DFI）-PCR,暗视野显微镜下见纤细螺旋状微生物，长约414 m，宽约2 m，814个规则的螺旋，折光性强，运动缓慢，有规律。,螺旋有三种活动方式，旋转式， 蛇形式，伸缩式。,暗视野显微镜检查临床意义,1.可确证梅毒-直接检查到梅毒螺旋体,2.对早期现症梅毒检测最好的方法（一期、二期梅毒皮损或淋巴节结、孕妇羊膜穿刺）,需要仪器设备：暗视野显微镜,选择试验注意事项,1.清洁皮损表面,用生理盐水清洁，,不能用消毒液,2.取材-渗出液、尽量避免出血,（降低阳性率）,3.口腔溃疡要谨慎,4.阴性结果不能排除梅毒可能性-,取材不当、皮损致数量不足、近期使用抗生素、损害接近自然消退等,梅毒血清学检查,【原理】,当机体感染梅毒螺旋体后，经过一定潜伏期，在血清中产生一定数量的抗类脂质抗体（,非特异性的反应素,）和抗密螺旋体抗体（,特异性免疫球蛋白,），主要是IgG抗体，因此，可以用各种免疫学的方法来检测反应素或抗体，协助梅毒的诊断。,两组试验：,1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验,2.梅毒螺旋体抗原血清学试验,两组试验的目的都是检测抗体,非梅毒螺旋体抗原血清学试验（抗-脂质抗体-,非特异性,）,梅毒螺旋体抗原血清学试验（抗-梅毒螺旋体抗体-,特异性,）,非特异性梅毒的血清学初筛试验,方法：,1.性病研究实验室试验VDRL,2.不加热血清反应素试验USR,3.快速血浆反应素环状卡片试验RPR,4.不加热甲苯胺红血清试验TRUST,1.,性病,研究实验室试验（venersal disease research laboratory test，VDRL)：,VDRL试验所用抗原是从牛心中提取心磷脂加上卵磷脂和胆固醇，梅毒螺旋体在破坏组织的过程中，体内释放一种抗原性心磷脂，它刺激机体产生反应素，这种反应素与牛心中提取的心磷脂在体外有抗原抗体反应。,实验步骤： 将待检血清先灭活，吸取0.5ml血清滴入玻片的圆圈中，,使血清涂布扩散到整个圆圈,。用1ml注射器装上专用针头取一滴抗原试剂加入圆圈内。用转动器或手转动玻片4min，每分钟约180次左右，立即判断结果。,*试验时应用已知阳性血清对照。,结果判定：“”阴性:仅见微小颗粒，液体浑浊。,“+”弱阳性:肉眼见小的块状物或者用放大镜见到块状物，液体浑浊。,+阳性:肉眼见大的或中等大的块状物。,VDRL玻片定量试验：将待测血清用生理盐水在小试管中作6个稀释度，原倍血清、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32，每个稀释度样本取0.5ml加于玻片圆圈中，按定性的方法测定和判断结果。,2. 不加热血清反应素试验（unheated serum reagin test，USR）：该试验用改良的VDRL抗原，稀释后离心沉淀，于沉淀中加入EDTA（二胺四乙酸二钠）氯化胆碱可起化学灭活作用，所以血清不必灭活，抗原不必每天配制，在48冰箱中保存6个月。,(1) USR玻片定性试验,方法：,吸取50l血清放入反应板圈内，并均匀涂布整个圈。 将USR抗原轻轻摇匀，用标准针头吸取抗原，每个标本中加1滴抗原液。 将反应板置旋转器旋转4min，(1805)r/min。 立即用肉眼或显微镜观察结果。,本实验应用已知阳性血清作阳性对照。,结果判定：,根据凝集反应絮状物大小判断阳性程度,强阳性(34+)：大或中等大小的絮状物，溶液清亮。,阳性(2+)：絮状物比较小，悬液较清亮。,弱阳性(1+)：絮状物比较小，均匀分布，液体混浊。,可疑()：抗原颗粒较粗一般属于阴性反应。,阴性()：抗原颗粒均匀，针状细小。,（2）USR定量试验 正反应板圆圈内加入50l等渗盐水(一般做6个滴度，有必要者应继续稀释)。 吸取50l血清加到第一孔混匀后，再吸取50l至第二孔稀释，依此作倍比稀释(1:21:64)，最后所稀释的圆圈内应弃去50l 每个圆圈加1滴抗原混匀，将反应板置旋转器旋转4min，(1805)转/min。观察结果同定性试验。 记录出现1+阳性反应的最高血清稀释倍数，即抗体效价。,3. 快速血浆反应环状卡片试验（rapio plasma reagin card test，RPR)原理与USR试验基本相同，其优点是RPR抗原中加入了活性碳颗粒，试验在特制的白色纸卡上进行，因此，容易判断结果，肉眼即可观察，不需显微镜，血浆也可进行检测。,(1) RPR定性试验,吸取50l血清或血浆放在白色卡片圈内，并均匀涂布整个圈内(每张卡片有10个或12个反应圈)。 将RPR抗原轻轻摇匀，用标准针头吸取抗原，每个标本中加1滴抗原。 将卡片置旋转器旋转8min，(1005)转/min。 立即在明亮光线下观察结果。,结果判定： 阳性：圆圈内出现小至大的黑色絮状物为阳性，不分其阳性的程度。必要时可以依絮状物的大小和多少，用“+”号表示。 阴性：圆圈内仅见碳颗粒集于中央一点或均匀分散为阴性。,(2) RPR定量试验在纸卡圆圈内加入50l等渗盐水(一般做6个滴度，超过者应继续稀释)。 吸50l血清或血浆系列稀释(1:21:64)，最后所稀释的圆圈内应弃去50l。 滴加1滴抗原混匀，旋转时间、速度、观察结果同定性试验。 记录出现1+阳性反应的最高血清稀释倍数，即抗体效价。,4.甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）,【原理】 TRUST试验原理与RPR试验原理相同，差别在于TRUST抗原中加入甲苯胺红染料颗粒代替碳颗粒作为指示物，使阳性结果出现红色絮状凝集现象，阴性结果甲苯胺红颗粒聚集于中央一点或均匀分散。,【方法】 TRUST试验方法同RPR试验。 【结果】 TRUST试验结果判断同RPR试验。,【注意事项】 1实验环境适宜温度为2329；抗原应保存在4冰箱；应防止冻结，以免破坏；实验前抗原恢复到室温。 2校准针头，RPR、TRUST等抗原(用9号针头)为601滴/ml，USR抗原(用12号针头)为451滴/m1。一般试剂盒内已有配套专用针头。 3用,旋转式摇床,，不用平衡式振荡仪。 4试验完毕，立即观察结果。,5为防假阴性，试验最好用纯血清。 6初筛试验阳性特别是初诊患者，应做确证试验以排除生物学假阳性。 7避免出现,“前带”现象,，对可疑者应将血清稀释后测定。 8定性试验阳性都必须做定量试验，阳性者需了解抗体效价的高低，以便监视疾病活动情况和观察疗效。定量试验还可排除前带现象。,四种初试验筛方法的比较,四种初筛方法,原理：相同,目的：相同,临床意义：相同,不同：方法学上改良,四种初筛方法,原理：,当人体感染梅毒螺旋体4周10周左右后，血清中可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特异性反应素抗体(主要是IgM和IgG),目的：,检测 抗-脂质抗体,四种初筛方法,方法：,定性法-意义局限,定量,抗体的效价,滴度,（倍比稀释）,通过看化验单可判别定量或定性,阳性,原倍、1：2/1：4/1：8/1:64,梅毒初筛试验定性定量,阴性 原倍 1：2 1：4,梅毒血清学初筛实验临床意义,1.辅助诊断梅毒,初筛实验有较高的敏感性和特异性,2.,观察滴度变化可用于疗效观察,3.鉴别早期或晚期梅毒,（前滴度快后慢,）,4.鉴别先天性梅毒,（被动出生3-4月转阴，不降反升）,5.发现复发或再感染病人复发或再感染时,血清阳转或滴度上升，定量试验2次结果，滴度上升2个稀释度以上（ 1:21:8以上 ）才可判断为上升，要排除技术性因素，,相同的实验方法才能进行滴度比较,6.,梅毒的筛查试验,注意事项,假阳性 ：,1生理性 孕妇0.4%,2胶原性或自身免疫性病,麻风、系统红斑狼疮,3某些急性发热病 后,风疹、疟疾、水痘、肺炎,4免疫接种,鉴别方法：,抗体效价,特异性试验证实,特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验,目的:,检测特异性抗梅毒螺旋体抗体-,特异性强,原理：,(FTA-ABS),完整的梅毒螺旋体作抗原,TPHA/TPPA,超声裂解梅毒螺旋体,提取抗原族致敏载体,致敏的载体,抗梅毒抗体/免疫血清,适宜条件,下肉眼可见凝集,特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验,方法：,1.梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）,2.梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）,快速、简便、准确而青睐,3.荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS),WHO推荐金标准,特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验,4. 梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验,TP-ELISA：,TP-Ab是一种通过基因工程经利用梅毒螺旋体多肽抗原（KD47、 KD42/KD15）包被于反应板的试验。它用双抗原夹心法，同时检测IgM/IgG抗体，故可用于早期诊断，并避免了单片段抗原混合干扰,5.PCR方法（略）,用于诊断梅毒试验方法选择,要求准确率（特异性）,TPHA在各期梅毒的特异性为98%99%，敏感性 治疗前一期：69% 90%；二期100%；潜伏期97%100%；晚期94%,1.梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）,2.梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）,敏感性强，特异度高，现为梅毒诊断的金标准,梅毒特异性试验的临床意义,1.诊断梅毒,敏感性高、特异性强，是梅毒较好的确证实验,2.早期诊断梅毒（19S,IgM,）,一期梅毒特异性试验比非特异性试验早一周出现，梅毒感染后第二周就可从血清中测出抗体IgM，而IgG要在感染后4周方可测出,梅毒特异性试验的注意事项,1.定性试验,一般定性试验阳性即可确诊，定性抗体效价1：80,2.,不能作疗效观察指标,由于记忆细胞抗体复制能力强，特异性敏感性高，即使经,抗梅治疗也终生阳性（阳性现症或既往）,3.1%生物学假阳性存在,麻风、传单（嗜异性抗体）,TPPA假阳性，红斑狼疮,FA-ABS呈假阳性,不主张叫确证试验,梅毒血清学试验选择,一、用于筛查：,首选-TP-ELISA,其次-初筛试验,二、由于诊断梅毒（首次）：必须,1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验/梅毒初筛试验,有效价,2.梅毒螺旋体抗原血清学试验/TPPA/TPHA,梅毒血清学试验选择,三、用于疗效观察、治疗后随访：,非梅毒螺旋体抗原血清学试验/梅毒初筛试验,有效价,一张完善的检验单报告部分：,结果：,梅毒血清学初筛试验TRUST 1:16阳性,（梅毒螺旋体抗原血清学试验）TPPA 阳性,签名 XXX 日期XXXXX,其他实验,免疫印迹法：,是一种诊断梅毒感染的特异性实验，,胶体金免疫结合技术（TPAb）：,是在酶免结合技术基础上发展起来的, 具有简单、快速、不需任何仪器的特点。,PCR试验：,多聚酶链反应检测梅毒螺旋体DNA,三、淋病(gonorrhea)的实验室诊断,淋病：是我国目前检测八种主要性病中发病人数最,多的一种,病因：淋病奈瑟菌,亲和性：人类是唯一宿主，嗜人类泌尿生殖道的柱,状上皮细胞,特点：局部化脓性感染,细菌和毒素,粘膜坏死、脱落、神,经末梢暴露、炎性浸润、组织液渗出,所致疾病,主要是泌尿生殖道局部化脓性感染-淋病,不及时治疗可入侵泌尿生殖道其他部位附睾、,前列腺炎、,输卵管炎及盆腔炎,甚至经血液传播全身其他部位淋菌性关节炎、心,内膜炎及脑膜炎等,淋菌性尿道炎,诊断淋病的实验室检查,男性患者：,急性期典型病例-尿频、尿急、尿痛，局部流脓,首选：,试验方法-分泌物涂片革兰染色,试验目的-找革兰阴性双球菌,女性可拒绝用此法,分泌物涂片革兰染色,原理：1急性患者尿道有大量脓性分泌物,2淋球菌呈革兰阴性反应，具特殊形态,3有些脓细胞内可有许多淋球菌,临床意义：,1.镜检结果阳性可初步诊断淋病,2.用于新生儿、婴儿脓漏眼诊断,镜检,白细胞中吞噬有阴性双球菌者为阳性,新生儿淋菌性结膜炎,常常在出生23天后双眼出现脓性分泌物，剧烈肿胀发红，不能睁眼，如不及时治疗还可侵犯到角膜，如角膜发生穿孔会导致失明,诊断淋病的实验室检查,女性患者及症状不典型的男性患者：,经典方法： 淋球菌分离培养,原理：,1标本中有淋球菌,2合适的培养基（T-M选择性培养基）,3生长呈特征性菌落（24H36H）,4菌苔氧化酶呈阳性，糖发酵试验符合,5菌苔涂片革兰染色呈阴性，菌体形态,具特殊性,淋球菌培养,临床意义,1.诊断淋病（金标准）,2.适用于男性女性标本，WHO推荐的筛查淋病的唯一方法,3.判断病人治愈,依据只可选择,此方法,4.,-内酰胺酶,阳性：表明该菌,对PG ，氨苄西,林和阿莫西林,耐药,淋病病人实验室诊断步骤,淋菌感染,男性患者 女性患者,尿频、尿急、尿道分泌物 脓性宫颈分泌物/无症状, ,脓性分泌物涂片G,-,染色 拒绝做, ,G,-,双球菌细胞内 取宫颈分泌物, ,初步诊断 MTM培养基培养, ,治疗 典型菌落形态,G,-,双球菌、OX(+)、糖发酵试验,确诊,关于取材,正确采集标本是试验结果成功的关键环节,涂片取材：,清洁尿道口,手指由后向前挤出脓液,轻轻涂布玻片上,排尿前或排尿后23小时采集,培养标本采集,关键是深度一定要够,男性取材：拭子深入尿道2cm-4cm处并转动,蘸取少量粘膜,女性取材：,子插入宫颈12厘米处稍转动并停留10秒30秒，以获得上皮细胞，取出棉拭子时,不要碰到阴道壁避免受阴道分泌物污染,其他相关试验,1.直接免疫银光染色,2.SPA协同实验,3.酶反应,4.白细胞脂酶快速法,5.固相酶免疫试验,小结,诊断淋病,1泌尿生殖道,分泌物涂片革兰染色,找阴性双球菌,2泌尿生殖道分泌物,淋球菌分离培养,3其他方法不能作为常规诊断应用,注意标本采集,四、非淋菌性尿道炎-NGU,临床：尿道炎表现，分泌物查不到淋球菌,临床合并症：,附睾炎、输卵管炎、宫外孕、不孕症等,威胁人们健康,流行病学：,西方国家自60年代发病超过淋病跃,居STD首位，国内发病不断增加已占STD的,第三位,非淋菌性尿道炎-NGU,病因：,沙眼衣原体CT,（D,K）,40%,50%,支原体,（UU、MH）,20%,30%,阴道滴虫、白念和单疱病毒10%,20%,NGU-CT检测,生活史特性：严格细胞内寄生,亲和性： 泌尿生殖道柱状上皮细胞,血清学试验对诊断衣原体感染价值有限,1.迄今止尚无哪一种试验完全适合所有种类的CT的检测,2.CT感染轻微，潜伏期长，影响急性期采血时间配对血清难,以得到,3.血清抗体持续时间长，单一血清标本只能显示曾经感以前染过CT,4.双份血清效价比有4倍增高才有临床意义,临床标本直接检查-目前最合适的方法,NGU-CT检测方法,1.细胞涂片的吉姆萨染色-发现一定数量的包涵体（,原体呈紫色，包涵体呈金黄色,）,不适用于NGU,NGU-CT检测方法,2.涂片碘染色法：,包涵体中有糖原遇碘呈棕色敏感性,差，不适用于NGU,3.直接免疫荧光法染色：,敏感性93%，特异性96与,培养并列为金标准对试剂，显微镜质量要求很高，,操作人员技术要求高，价格昂贵,4.衣原体酶免疫测定EIA,：抗CT单抗包被固相载体+,标本再+多克隆抗体+IgG酶标抗体酶标仪检测,适用于批量筛查NGU衣原体感染,5.衣原体分离培养：,McCoy、Hela、 BHK-21细胞培养,NGU-CT检测方法,6.PCR,7.“立明“（Clearview)衣原体快速免疫测定法：,原理：沙眼衣原体检测试剂盒采用高特异性的抗体,抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测临,床标本中是否含有沙眼衣原体抗原,。,临床意义：,NGU衣原体感染 诊断参考,该试验是目前诊断NGU衣原体感染普遍采用的方法,注意事项,1,试验敏感性87%,特异性98.8%，但标本中需要有,一定的抗原量，量低于敏感性可出现假阴性；,2.检测试剂盒仅证明标本中存在沙眼衣原体抗原，,不能区别是衣原体感染还是携带者，也不能区别,衣原体死活，不能作为判愈试验,；,3.标本采集是关键,NGU-支原体感染,非淋支原体感染：UU为主，MH次之,我国报道7个地区健康人携带率,解脲支原体（UU）占10.59%,人型支原体（MH）占5.34%,正常菌群的组成部分,支原体检测方法,1.分离培养,2.聚合酶链反应-PCR/DNA探针技术诊断,3.血清学检测,：代谢抑制试验、ELISA、间接免疫荧光,都仅用于科研和流行病学调查上，不适于诊断用,支原体培养,固体培养基：生长耗时5天左右,液体培养基-原理：,UU尿素氨 PH 含酚红培养基由黄红,MH精氨酸氨 PH 含酚红培养基由黄红,支原体培养,培养结果：阳性不一定有临床意义,量化,uu、mh 10,4,ccu/ml 具有临床治疗意义,临床意义：,1.培养是检测支原体最好的方法,2.临床有尿道炎症状、量其他检查阴性时，培养阳,性有治疗意义,量,应重视支原体感染治疗,小结,目前应用较多诊断的非淋的试验,1.支原体培养加药敏，注意量,2.免疫层析金标/硒标衣原体检测,非淋检测标本采集是关键,五、生殖器疱疹实验室检查,病因：单纯疱疹病毒HSV,SHV-1主要感染上半身部位,（15岁以下多）,SHV-2主要感染腰以下部位,（多见于青春期后）,生殖器疱疹检查方法,病原体检查：,1.病毒体外细胞培养和鉴定：,技术条件要求较高，不宜用于临床,2.单纯疱疹病毒抗原检查,(,1）ELISA,(,3）DNA杂交,(,2,),IFA,(,4）PCR,PCR和DNA不能单独作为确诊指标,病原学检查ELISA有敏感性高，特异性强，准确率高应用面广，操作简便等优点,生殖器疱疹检查方法,血清学检查-抗体检测：,所有用于检测抗原的方法经适当改良后，均可用于抗体检查,SHV感染个体中的不均一性和不稳定性成年人群中有很高的HSV 抗体检出率，大多获自隐性感染，且抗体的存在尚不能完全保护机体免受疱疹病毒的重复感染; HSV 抗体检测阳性对临床诊断帮助不大;,一般HSV 抗体检测,对新生儿、婴幼儿感染诊断有一定意义,六、尖锐湿疣实验室检查,病因：人类乳头瘤病毒-HPV,发病率：持续增长，我国急剧上升，已占,各种性病第二位,六、尖锐湿疣实验室检查,尖锐湿疣检测：,典型的尖锐湿疣通常不需作实验室检测便可作出诊断,临床医生观察为主,醋酸白试验有助于检查不明显的疣,尖锐湿疣,尖锐湿疣实验室检查方法,1.细胞学检查 ：,病理皮损活检:发现有HPV感染的特征性凹空细胞的组织病理变化特点.(较可靠的办法),2. 组织病理：基本上为角化不完整，棘层深层肥厚，奶头瘤样增生。粒层和棘层上部细胞有显著的空泡形成。棘细胞基底细胞有特别数量之核皴裂，很像癌变，但细胞排裂规则，且增生上皮和真皮之间规模清楚。,尖锐湿疣实验室检查方法,3.核酸杂交试验-PCR,皮损活检中用抗原或核酸检测显示有HPV感染.常见的是HPPV6.11型. 阳性率可达80%左右.当真性和假性尖锐湿疣鉴别困难时.可用HPV-DNA原位分子杂交进行鉴别.此法是目前一种敏感性和特异性很高的鉴别手段.阳性率可高达90%以上.,尖锐湿疣实验室检查方法,在操作中因引物不纯易导致假阳性,但PCR检测HPV感染具有快速、方便、高度,敏感和特异的优点在诊断HPV感染和癌症研,究中有着光明的前景,七、软下疳实验室检查,病因：杜克雷嗜血杆菌,诊断标准,1.有不洁性交史,2.会阴部发生于1-2个溃疡,周围可发生多个卫星状小溃疡,疼痛明显,基底软,上有脓性分泌物,腹股沟淋巴肿大、触痛、化脓,3.梅毒血清学检查阴性,涂片或培养可检测出杜克雷嗜血杆菌,软下疳实验室检查,疾病特征：,1.,潜伏期1-30天，发病快进展快感染道溃疡46天,2.,初起一个或数个言行丘疹或结节周围红斑24H糜烂或溃疡圆形或椭圆形，相邻的可融合成大溃疡边缘不整齐，病,变周围可发生卫星状病变，,3.溃疡有脓性分泌物或蜡样脓苔，常有潜蚀性坏死和穿凿性,窦道，晚期基地肉芽增生，形成不规则瘢痕可自愈可再发,4.溃疡不形成硬韧基底，并变软，明显区别于硬下疳,疾病初起都在生殖器也可见肛门、大腿上部、口腔和手,软下疳,软下疳实验室检查,流行病学：亚热带地区,东南亚、北非和拉丁美洲发病,率高，美国发病呈起伏史，男高于女9：1,我国个别城市少数报道均为临床疑似病例，,未经实验室证实,我国发病率真低？,注重加强实验室检测很有必要,软下疳实验室检查方法,1.涂片检查:,取软下疳溃疡边缘下贮留脓汁或穿刺横痃抽吸的脓汁涂片行革兰染色, 镜下可见革兰阴性短小杆菌，两端钝圆，有两极浓染现象单个、 成堆或链状排列,易产生假阳性假阴性不推荐用,软下疳实验室检查方法,2.培养检查:,采用GCHGS或MHHb培养基培养.菌落常于接种后48小时形成,色灰黄而透明,直径约1-2mm,菌落涂片革兰氏染色呈阴性球杆菌,呈短链、团块或指纹状排列,过氧化酶试验阴性,非卟嘛试验阴性,硝酸盐还原试验阳性.碱性磷酸酶试验阳性.,典型的菌落和镜检典型的菌体形态鉴定结果符合标准结合临床可作出确定诊断报告,软下疳实验室检查方法,3.组织病理,中央为溃疡,溃疡边缘表皮增生,溃疡下方可见三个炎症带,垂直排列,分别为:溃疡基底层:多形核白细胞为主、混有红细胞,有嗜中性白细胞、淋巴祖细胞及组织细胞浸泡,可见较多的纤维母细胞.深层:淋巴细胞、浆细胞弥漫性浸润,血管周围明显.用Giemas及-Gram染色,有时可在浅表层或深层查见杜克雷嗜血杆菌,组织病理对软下疳有一定的意义，但也要结合临床表现,软下疳实验室检查方法,4.二血清学诊断软下疳,感染杆克雷嗜血杆菌能产生抗体通过血清学检查不论是补体结合凝集反应以及荧光抗体间接法等均可证实但尚未推广(,目前认为Igm抗体敏感性为74IgG抗体敏感性为94其特异性分别为84和64,),5.PCR 国外正在研究之中,八、性病淋巴肉芽肿LGV,病因：,沙眼衣原体的L,1,、L,2,和L,3,主要侵犯淋巴组织,流行病学：,散发北美、欧洲、澳洲及南美、亚洲,部分地区印度及部分东南亚国家；,我国80年代以来偶有报道，真实性有待考证,病理：,无症状溃疡或尿道宫颈炎,二期发热、急性淋巴结,炎横痃形成，可伴急性出血性肠炎，部分病人慢性,炎症、瘘管、职场狭窄或生殖器象皮肿,性病淋巴肉芽肿,LGV检查方法,1.衣原体培养：,抽取有波动的淋巴结内的脓液接种于小鼠的脑组织或鸡胚卵黄囊或McCoy细胞（细胞已取代前二者）可分离出病原，但敏感性不高；,2.,血清学试验 ：,(1)对流免疫电泳试验：简便、快速、特异性强，但所需抗原要求高；,(2)补体结合试验(CF)检测到抗沙眼衣原体抗体，抗体血清滴度在1：64以上有诊断价值但本试验对性病性淋巴肉芽肿并无特异性，仍要结合临床进行分析。 ；,LGV检查方法,（3）微量免疫荧光试验及酶联免疫吸附试验，亦已被应用，它们有一定的敏感性和特异性，可用于鉴别及筛选用,（4）参考NGU-CT检查,3.基因诊断,小结,1尖锐湿疣的诊断主要依据临床体征和病史，,现有的试验方法无论哪种都只能是辅助参,考,2软下疳首选分离培养法,3性病淋巴肉芽肿主要根据接触史（,有不洁性交史,）、临床表现和实验室检查,每一种性病都有适合其特有的检测，此外,还有些辅助检查是可选择的,1血沉加快、CRP,2血象炎性反应或轻度贫血、白细胞增高,3高丙球蛋白血症、白球蛋白倒置、IgA、IgG增高等,总结,1性病的概念,2我国重点防治的八种性病,3除HIV外，每一种性病的初起都是从泌尿生,殖器损害开始，部分病人也可无症状不及时,治疗都可能会向机体播散,4各自都有适合于自己的特殊检查方法,谢 谢 !,