梅毒的血清学试验

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,梅毒的血清学试验,检验科 李修敏,1,梅毒的病原学,苍白螺旋体：细长螺旋形，原核微生物，长,7-14,微米，不易着色，普通显微镜不易看到，可用暗示野显微镜观测到。,2,人体的免疫学反应,非特异性抗心脂质抗体可用牛心脂质检测出,抗梅毒螺旋体抗体可用梅毒螺旋体检出,3,梅毒的血清学试验,非螺旋体抗原血清试验（抗原：心磷脂 胆固醇 卵磷脂）,临床意义：初筛 疗效评价 复发及再感染的判断,螺旋体抗原血清试验（抗原：精选的梅毒螺旋体抗原片段）,临床意义：,诊断试验,是否感染过梅毒,无法评价疗效,4,非螺旋体抗原血清试验,镜下判读结果,性病研究实验室试验（,VDRL,）,Venereal Disease Research Laboratory,非加热血清反应素试验（,USR,）,Unheated Serum Reaging,肉眼判读结果,快速血浆反应素试验,(RPR)Rapid Plasma Reaging,甲苯胺红不加热血清试验,(TRUST)Toludine Red Unheated Serum Test,5,试验方法（,TRUST),试剂复温（,23-29,）,试剂与血清等量混匀，水平转动,8,分钟。,结果判断：中等或大的红色凝聚物为阳性反应；较小的红色凝聚物为弱阳性反应；无凝聚物为阴性反应。,6,存在的问题,假阳性,1,、生物学假阳性：见于瘤型麻风、疟疾、系统性红斑狼疮、硬皮病、雅司病、回归热、钩端螺旋体病、血吸虫病、包虫病、旋毛虫病、支原体肺炎、传染性单核细胞增多症、结核病等疾,2,、人为因素：试剂与血清反应后放置时间过长，因干燥在纸片上留下假性凝集；没有做阴性对照，肉眼判定错误；标本错误。,假阴性,反应时间不足、反应方式不正确、反应温度不够、前带现象。,7,8,9,螺旋体抗原血清试验,荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验,(FTA-ABS),梅毒螺旋体血球凝集试验（,TPHA),梅毒螺旋体被动微粒凝集试验,(TPPA),ELISA,法梅毒抗体检测,胶体金法梅毒抗体检测,10,ELISA,法梅毒抗体检测,全自动酶免仪、全自动洗板机,半自动酶免仪、半自动洗板机,手工法,操作步骤及原理同其它免疫项目,11,注意的问题,实验器材的计量（酶免仪、洗板机、恒温箱、冰箱、空调、生物安全柜、精确移液器、量筒、振荡器、温度计）,环境温度：室温（,18-23,）,人员培训,样本的要求,实验前试剂的复温,精确的加样：移液器的正确使用,12,续移液器的使用,吸液的操作,: 1,、连接恰当的吸嘴；,2,、按下控制钮至第一档；,3,、将移液器吸嘴垂直进入液面下,1-6mm,（视移液器容量大小而定）；,0.1-10ul,容量的移液器进入液面下,1-2mm 2-200ul,容量的移液器进入液面下,2-3mm 1-5ml,容量的移液器进入液面下,3 -6mm,注：为使测量准确可将吸嘴预洗,3,次，即反复吸排液体,3,次。,4,、使控制钮缓慢滑回原位；,-,！,5,、移液器移出液面前略等待,1-3,秒；,1000ul,以下停顿,1,秒,5-10ml,停顿,2-3,秒,. 6,、缓慢取出吸嘴，确保吸嘴外壁无液体。,13,续移液器的使用,排液的操作,: 1,、将吸嘴以一定角度抵住容量内壁；,2,、缓慢将控制钮按至第一档并等待约,1,3,秒；,3,、将控制钮按至第二档过程中，吸嘴将剩余液体排净；,4,、慢放控制钮；,5,、按压弹射键弹射出吸嘴。,14,续移液器的使用,养护：,1,、如液体不小心进入活塞室应及时清除污染物；,2,、移液器使用完毕后，把移液器量程调至最大值，且将移液器垂直放置在移液器架上；,3,、根据使用频率所有的移液器应定期用肥皂水清洗或用,60,的异丙醇消毒，再用双 蒸水清洗并晾干；,4,、避免放在温度较高处以防变形致漏液或不准；,5,、发现问题及时找专业人员处理。,15,注意的问题,加样：,加酶标液：,加底物：,加终止液：,震荡：,盖膜：,洗板：,洗涤液的要求,握板的要求,16,注意的问题,比色：,孵育时间：,操作时差的问题：,质控问题：内部质控、外部质控,影响,ELISA,测定结果的干扰因素,外源性干扰因素：溶血、细菌污染、标本保存不当、标本凝集不全、添加剂,内源性干扰因素：,RF,、补体、嗜异性抗体等,17,结果解释,图标演示,18,19,20,21,三种梅毒血清 学试验的结果解释,试验结果,意义,RPR+FTA-ABS+TPPA+,梅毒,RPR+FTA-ABS-TPPA-,生物学假阳性,RPR-FTA-ABS+TPPA-,极早期梅毒,RPR-FTA-ABS+TPPA+,治愈梅毒,RPR-FTA-ABS-TPPA-,排除梅毒、,AIDS,合倂感染,22,先天性梅毒的确证指标,暗示野查到梅毒螺旋体,患儿,RPR,滴度持续上升（出生后,6,个月内每隔,1,个月查,1,次滴度）,RPR,滴度高于其母亲,患儿检出抗梅毒,19s-IgM,具备以上指标之一即可诊断,23,神经梅毒的实验室诊断,脑脊液,VDRL+(,不是,RPR),血清特异性螺旋体抗体,+,24,谢谢大家,25,