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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,传统定义,针对细胞核成分的自身抗体的总称。,针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对,ANA,靶抗原存在于包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂结构等部位,抗核抗体的定义,ANA,可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织病的诊断、病情判断和疗效观察的指标,在非结缔组织病中也可出现阳性。,正常人中（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低，并且常表现为,IgM,型,高滴度,ANA,则高度提示自身免疫性疾病,目前，,ANA,检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。,ANA,检测的临床意义,系统性红斑狼疮,活动期,非活动期,药物诱导的红斑狼疮,混合性结缔组织病（,MCTD,、,Sharp,综合征）,类风湿性关节炎,进行性系统性硬化症,多发性肌炎及皮肌炎,干燥综合征,慢性活动性肝炎,溃疡性结肠炎,其它风湿病,正常人,95,100,80,100,100,100,20,40,20,50,85,95,30,50,70,80,30,40,26,5-10,ANA,检测的临床意义,ANA,实验室检测策略推荐,ANA,间接免疫荧光法筛查实验,间接免疫荧光法检测,ANA,基本原理,间接免疫荧光法,包被,HEp-2,细胞的基质玻片,样本中,ANA-IgG,FITC,标记的抗人,IgG,抗体,抗原谱完整 (细胞核、细胞浆中近百种自身抗原),人源细胞，无种属非特异荧光干扰,肿瘤细胞，易于培养及商品化生产,核质比大，可观察到多种不同荧光核型,ANA,筛查的经典和标准基质:,HEp-2,均质型,核点型,着丝点型,核仁型,Scl-70,粗颗粒型,细颗粒型,核膜型,.,核糖体,P,蛋白,线粒体型,高尔基体,溶酶体,肌动蛋白,波形蛋白,基于,Hep-2,细胞为基质的,ANA,初筛实验,ANA,间接免疫荧光法筛查试验的实际价值,初步甄别自身免疫性疾病患者（阴阳性结果）,尽可能判断荧光核型（缩小靶抗原确认实验范围）,获取抗体滴度信息（判断病情进展、预后等）,考虑到荧光法筛查试验存在主观性强的特点，因此应以一种客观和现实的态度去面对筛查试验结果,几个相对常见且重要的荧光核型,均质型,核点型,着丝点型,核仁型,粗颗粒型,核膜型,.,核糖体,P,蛋白,线粒体型,肌动蛋白,常见且重要核型的标准,核型表现相对典型,阳性率相对较高,靶抗原相对明确,应重视,ANA,滴度的检测,抗体滴度的临床意义,1,、明确界定自身免疫性疾病患者；,2,、作为疾病进程、临床疗效和病情预后及转归等的判断指标,当前国际主流,ANA,间接免疫荧光法检测系统广泛采用的起始稀释度为,1:40,。即该检测系统的正常参考范围为,1:40,。梯度稀释时的稀释因子为,1:2,。,HOB,公司产品推荐按照,1:80,开展稀释。,荧光强弱及血清稀释度,荧光强弱判读,观察标本的特异性荧光强度一般用“,+,”号表示。,“,”,为无或仅见极微弱荧光；,“,+,”为荧光较弱但清楚可见；,“,+,”为荧光明亮；,“,+,”为耀眼的强荧光。,临床上根据特异性荧光强度达“,+,”以上判定为阳性,抗体梯度稀释,起始稀释：,1:80,梯度稀释（稀释因子,2,）,1:160,1:320,1:640,1:1280,1:2560,直至抗体转阴,各稀释度的反应性,抗体滴度,临床意义,1:80,1:640,阳性,+,1:80,阳性，需结合临床表现综合判断,阳性,+,1:160,阳性，提示可能存在相关疾病,阳性,+,弱,+,1:320,明确阳性，提示可能存在相关疾病,阳性,+,阳性,+,1:640,中等阳性，提示可能存在相关疾病,阳性,+,阳性,+,1:1280,强阳性，高度提示存在相关疾病,阳性,+,阳性,+,1:2560,极强的阳性，高度提示存在相关疾病。,ANA,荧光滴度判读举例,HOB,公司间接免疫荧光法产品系列,产品系列,基质,检测项目,ANA,筛查,HEp-2,细胞,ANA,各种不同核型,dsDNA,绿蝇短膜虫,抗,dsDNA,抗体,AKA,大鼠食管,抗角蛋白抗体,ANCA,中性粒细胞,乙醇和甲醛固定,抗中性粒细胞胞浆抗体,组织器官,大鼠肝,/,肾,/,胃,ASMAPCAAMALKM-1LC-1,HEp-2,细胞产品系列 （举例）,166,孔,1010,孔,812,孔,ANA,靶抗原确认实验,条带酶免分析法检测,ANA,基本原理,LIA,检测方法原理,底物,颜色反应,硝酸纤维膜,IgG,抗体,碱性磷酸酶标记的抗人,IgG,抗体,ANA,谱系列,U1-nRNP,和,Sm,抗原,SLE: 5-30%,SLE: 15-40%,MCTD: 95-100%,功能:参与,mRNA,前体的剪切,SS-A (Ro-60), Ro-52,和,SS-B,Anti-SS-A (60 kDa),干燥综合征,.:40-95%,SLE: 20-60%,新生儿狼疮,: 96%,Anti-SS-B,干燥综合征,.:40-95%,SLE: 10-20%,新生儿狼疮,: 78%,Anti-Ro-52 (52 kDa),非特异,功能: 调控,RNA,翻译,功能:,RNA,聚合酶,III,辅助蛋白,X,Scl-70 (DNA-,拓扑异构酶,I),功能: 在,DNA,复制和转录过程中完成双链解螺旋,疾病:硬化症: 50% - 75%,Anti-Scl-70,特点,局限型和弥散型硬化症病中的阳性率分别为,10%,和48%。,抗,Scl-70,抗体阳性的患者通常病情发展快、预后差、多器官累及。,PM-Scl,抗原: 几种多肽复合物(分子量间于20-100,kDa)，,主要的靶抗原为,100 kDa,相关疾病:,硬化症:2% - 5% 肌炎:8%重叠综合征:24%,Jo-1,抗原:组氨酰,tRNA,合成酶(50,kDa),细胞浆中的磷蛋白,相关疾病:,多肌炎/皮肌炎的血清学标志，阳性率为25- 35%，当伴有肺间质纤维化的多肌炎,，,阳性率可高达70%。,着丝点,抗原：动粒中的4种蛋白：,A (17 kDa), B (80 kDa), C(140 kDa), D,蛋白 (50,kDa)。,着丝点蛋白,B,为主要的靶抗原,(,与,IIF：100%),功能: 分裂期纺垂体的附着点,相关疾病:硬化症:18%局限型: 80% - 95%(,CREST,综合征),PCNA:,细胞增殖相关核抗原,I,型,抗原:,DNA,聚合酶,的辅助蛋白,发挥控制细胞周期的作用,相关疾病:,系统性红斑狼疮的特异性抗体，但其发生率仅为,3%,。,染色体结构示意图,DNA,核小体,染色体,染色质,组蛋白,dsDNA,抗原：双链,DNA，,天然,DNA(,脱氧核糖核酸骨架,),相关疾病：,dsDNA:,为,SLE,的诊断标准之一，阳性率为60-90%，不同的检测方法诊断特异性差别较大。抗体滴度与疾病的活动性、狼疮肾炎的发病风险具有相关性。,组蛋白,抗原:,H1, H2A, H2B, H3, H4，H2A-H2B，H3-H4(,主要的靶抗原为,H1,和,H2B),相关疾病:,药物诱导性,LE: 100%(,抗组蛋白抗体是该病唯一的标志性抗体,),各种结缔组织病：,SLE: 30-80%,SSc,: 30%,SS,: 10%,核小体,抗原:组蛋白和,DNA,形成的复合物,相关疾病:,SLE,：高特异性指标，阳性率为50-95%，特异性,几乎100%,，,抗,核小体抗体可,独立,于,抗,dsDNA,抗体单独出现，因而抗核小体抗体,与抗,dsDNA,抗体联合检测，可提高,SLE,的,血清学检出率,。,40 S,亚基,60 S,亚基,P0,P1,P1,P2,P2,抗原:核糖体,60S,亚基中的3种蛋白质:,P0, P1, P2.,具备相同的碳端抗原位点,核糖体,P,蛋白,相关疾病:,SLE:,为,SLE,的高特异性指标，阳性率为5-15%，,常见于神经狼疮。,AMA,与,AMA-,M2,靶抗原:线粒体亚结构上几种生化性质明确的物质，可分为九,种类型,。其中最常见临床意义比较明确的为,AMA M2，,由,AMA,不同亚型的临床相关疾病，因而对,AMA,阳性,结果做进一步,的分型实验非常重要。,主要相关疾病:,PBC:（,高滴度,AMA M2）85% - 95%。,在其他慢性肝脏疾病（30%）和进行性系统性硬化症（7-25%）中也可检出,AMA M2，,但滴度较低。,
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