实验九动物细胞培养

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验九 动物细胞培养,1,一、实验目的,掌握无菌操作；,掌握原代和传代细胞培养；,了解培养成纤维细胞的形态。,2,原代培养,：培养直接来自动物机体的细胞群，将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶称为传代或,传代培养,。,细胞株,：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。,细胞系,：从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过程中发生突变或转化的细胞，可无限繁殖。,二、实验原理,3,三、实验器材与试剂,1.,器具,显微镜、电热恒温水浴锅、天平、,CO2,培养箱、蒸汽灭菌器、超净工作台、解剖刀、 眼科剪、眼科镊、培养皿 、锥形瓶、容量瓶、纱布、培养瓶、移液枪。,2.,材料,9 - 12,日龄发育良好的鸭胚。,4,3.,主要试剂,双蒸水、,Hanks,液、,0.25%,胰蛋白酶、,EDTA,、,NaHCO3,、台盼蓝、洋红。,营养液：,DMEM,培养基（含,8%,小牛血清、,1,万单位,/ml,青、链霉素）。,维持液：,DMEM,培养基（含,5%,小牛血清、,1,万单位,/ml,青、链霉素）。,5,四、原代培养,1.,酒精棉球消毒鸭蛋，剥出鸭胚，去头、翅、爪和内脏， 加,Hanks,液，剪碎为,0. 5 -1mm,3,的小块，,Hanks,液洗涤,2 - 3,次。,2.,组织块移入培养瓶，间距,0.5cm,摆放后倒置培养瓶，加少量营养液，保持湿润，,37 ,培养，,2hr,后翻转培养瓶，添营养液继续培养。,3.,定期观察细胞贴壁生长状况，如颜色变黄，说明细胞生长，,3-5,天后更换培养液。,4 .,倒置显微镜下观察拍照。,5.,单层细胞用,Hanks,液洗涤后，加入维持液，用于原代细胞维持。,6,五、传代培养,当培养细胞接近汇合成片时，倾去培养液。,加入,0. 25 %,（含,0. 02 %EDTA,）消化,2-3,分钟，倾去大部分消化液，留少量消化液浸润细胞。发现细胞层出现裂痕或空洞后，加入,Hanks,液洗去残留消化液，终止消化。,加适量营养液吹打分散，补加营养液后，,1,：,2,分装培养。,汇合后挑取少许细胞，染色，观察拍照。,7,原代培养的绍鸭成纤维细胞，相差显微镜照片,8,正常细胞,凋亡细胞,分裂中期细胞,传代培养的绍鸭成纤维细胞形态（,DAPI,染色）,9,六、作业,1.,细胞培养过程中应该注意哪些事项？,2.,描绘培养成纤维细胞的形态（或提供照片）。,10,