益善-sjy-20121206-肿瘤个体化治疗与靶标检测

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,益泽社群 臻于至善,益泽社群 臻于至善,益泽社群 臻于至善,益泽社群 臻于至善,益泽社群 臻于至善,益泽社群 臻于至善,益泽社群 臻于至善,益泽社群 臻于至善,肿瘤个体化治疗与靶标检测,益善生物技术股份,益善医学检验所,孙建宇,有效,无害,无效,无害,无效,有害,疾病的传统治疗,什么是个体化治疗,有效,无害,无效,无害,无效,有害,给适合的病人、在适合的时候、使用适合治疗,什么是个体化治疗,疾病严重程度,时间,选药,确诊,换药,再换药,个体化治疗的优势,适合的药物,疗效监测,确诊,+,靶标检测,传统治疗,个体化治疗,个体化治疗存在的挑战,w,（,2011,）,靶标检测挑战与策略,靶标,技术,样本,化疗药物疗效相关靶标,靶向药物疗效相关靶标,药物毒副作用相关靶标,预后和复发风险评估相关靶标,化疗药物疗效相关靶标,化疗药物相关靶标,药物,检测项目,指标,内容,疗效,氟尿嘧啶类,TYMS,基因表达量检测,高,疗效,差,低,好,铂类,ERCC1,基因表达量检测,高,疗效,差,低,好,紫杉类,TUBB3,基因表达量检测,高,疗效,差,低,好,吉西他滨,RRM1,基因表达量检测,高,疗效,差,低,好,蒽环类,TOP2A,基因表达量检测,高,疗效,好,低,差,ERCC1 mRNA,表达与铂类疗效密切相关,ERCC1,参与,DNA,的修复与切除,ERCC1,见于所有的肿瘤细胞，表达水平差异很大,铂类,药理作用的本质是破坏,DNA,，影响,DNA,复制,根据,ERCC1 mRNA,表达水平确定顺铂用药,可改善,NSCLC,患者的临床治疗有效率,J Clin Oncol. 2007 Jul 1;25(19):2747-54.,主要研究终点：总体客观缓解率,Control,（,n=141,）,Genotypic,（,n=225,）,Low Genotypic,（,n=129,）,High Genotypic,（,n=96,）,Overall Response Rate,39.3% *#,51.2% *,53.2% #,47.2%,Survival,1 year,39 %,40.8 %,44 %,32 %,Median PFS(mo),5.19,6.1,6.74,4.74,*,Control vs Genotypic p=0.02,#,J Clin Oncol. 2007 Jul 1;25(19):2747-54.,根据,ERCC1 mRNA,表达水平确定顺铂用药,可改善,NSCLC,患者的临床治疗有效率,TYMS,胸苷酸合酶,5-FU,DNA,合成,TYMS,与抗代谢类药物,J Clin Oncol .2001;19:4298-4304.,TYMS,低表达结直肠癌患者接受含氟类辅助化疗获益显著,TUBB3,与抗微管类药物,微管蛋白,抗微管类,细胞分裂,TUBB3,Mol Cancer Ther. 2005 Dec;4(12):2001-7.,TUBB3,低表达的,NSCLC,接受含紫杉醇治疗获益显著,Progression-free survival curves,overall survival curves,拓扑异构酶（,toposiomerose,简称,Topo,）是一种能催化,DNA,拓扑异构体相互交换的基本核酶。,拓扑异构酶：,TOP2,编码蛋白,Top,，有,a,、,b,两种亚型。,TOP2A,编码的,Topa,具有介导,DNA,解结或解旋等主要功能，抗癌药物的主要靶点,。,TOP2A,：,TOP2A,与拓扑异构酶抑制剂,TOP2A,基因表达水平与以蒽环类为基础的化疗疗效相关。,Clin Cancer Res.2010; 16(8): 2391401.,TOP2A,与蒽环类药物,pCR,：病理完全缓解,NC,：耐药,PR,：部分缓解,TOP2A mRNA,高表达患者使用蒽环类药物效果明显比低表达好,靶向药物疗效相关靶标,靶向药物相关靶标,靶向药物,肿瘤类型,检测项目,指标,最佳疗效分型,疗效,西妥昔单抗,（爱必妥）,帕尼单抗,（维克替比）,结直肠癌,KRAS,体细胞突变检测,（,2,3,外显子突变）,突变,KRAS,野生,/BRAF,野生,/PIK3CA,野生的疗效最佳,无效,野生,有效,BRAF,体细胞突变检测,（,15,外显子突变, T1799A,）,突变,无效,野生,有效,PI3KCA,体细胞突变检测,(9,20,外显子突变,),突变,无效,野生,有效,伊马替尼,（格列卫）,胃肠间质瘤,C-Kit,体细胞突变检测,(9,外显子突变,),突变,C-kit,第,11,外显子突变,/PDGFRA,突变的疗效最佳,无效,野生,有效,C-Kit,体细胞突变检测,(11,外显子突变,),突变,有效,野生,无效,PDGFRA,体细胞突变检测,(D842V),突变,有效,野生,无效,索拉非尼,（多吉美）,肝癌,VEGFR1/23,基因表达量检测,高,VEGFR2,表达水平高,/PDGFR,表达水平高的疗效佳,有效,低,无效,PDGFR,基因表达量检测,高,有效,低,无效,曲妥珠单抗,（赫赛汀）,乳腺癌,HER2,、,PTEN,基因表达量检测,高,HER2,表达水平高,/PTEN,表达水平高的疗效佳,有效,低,无效,PI3K,基因体细胞突变检测,野生,PI3K,野生的疗效最佳,有效,突变,无效,From Data of IPASS, 2008,非小细胞肺癌患者,EGFR,基因突变,与,Gifitinib(,易瑞沙,),的疗效,HER2,阳性接受曲妥珠单抗治疗疗效显著,N Engl J Med. 2001 Mar 15;344(11):783-92.,PI3K,通路与赫赛汀耐药,对,57,为,HER2,阳性的转移性乳腺癌患者进行,PI3K,通路的研究，得出以下结论：,回顾性分析首次使用含有赫赛汀治疗的数据，结果显示,PI3K,通路激活（,PTEN,缺失或,PI3K,突变,),的患者具有较短的中位生存期,(4.5 vs. 9.0,个月，,P = 0.013),。,Wang L et al. BMC Cancer. 2011;11: 11:248.,N Engl J Med.2008;359:1757-1765.,KRAS,野生型,西妥昔单抗治疗获益显著,KRAS,testing,Mutation rate 412%,PIK. E20.,testing,Mutation rate in KRAS/BRAF/NRAS wild-type 31%,BRAF,testing,Mutation rate in,KRAS wild-type,72%,NRAS,testing,Mutation rate in,KRAS/BRAF wild-type,48%,RR:,24.4%,RR:,36.3%,RR:,38.4%,RR:,39.9%,Lancet Oncol 2010; 11: 75362,结直肠癌患者基因突变检测,与,Erbitex(,爱必妥,),的疗效,RR:,41.2%,药物毒副作用相关靶标,2005,年，美国,FDA,要求在伊,立,替康药品标签上加入警示，建议患者在使用伊,立,替康前先检测是否带有,UGT1A1*28,突变。,J Clin Oncol.2009;27:2604-2614.,Cancer.2008;112:19321940.,UGT1A1,突变,伊立替康主要毒性作用显著,预后和复发风险评估相关靶标,MSI-H,的,II,期结肠癌患者可能预后比较好，但是不会从,5-Fu,辅助化疗中获益。,微卫星不稳定性,MSI,BAT25,、,BAT26,、,D5S346,、,D2S123,、,D17S250,美国国家癌症研究所（,NCI,）推荐用于胃癌,MSI,检测的,5,个位点,根据,msi,表达的高低,大肠癌可分为：,1,、微卫星高度不稳定,(msi-h),：两个以上微卫星位点不稳定,2,、微卫星低度不稳定,(msi-l),：一个微卫星位点不稳定,3,、微卫星稳定,(mss),：无不稳定微卫星位点,MSI-H 通常称为DMMR,MSI、MSS 称为PMMR。,检测内容,21,基因的组成,N Engl Med 2004;351:2817-26.,N Engl Med 2004;351:2817-26.,J Clin Oncol. 2006 Aug 10;24(23):3726-34,美菲（乳腺癌） 靶标与药物,类别,药物,靶标,抗代谢类,5-FU,、卡培他滨,TYMS,吉西他滨,RRM1,抗微管类,紫杉醇、多西他赛、长春瑞滨,TUBB3,拓扑异构酶抑制剂,蒽环类、依托泊苷,TOP2A,靶向药物,曲妥珠单抗,HER2/PTEN,拉帕替尼,HER2,可菲（结直肠癌） 靶标与药物,类别,药物,靶标,抗代谢类,5-FU,、卡培他滨,TYMS,铂类,奥沙利铂,ERCC1,拓扑异构酶抑制剂,伊立替康,UGT1A1,靶向药物,贝伐单抗,VEGFR1,、,2,西妥昔单抗,帕尼单抗,KRAS,BRAF,PI3K,能克（非小细胞肺癌） 靶标与药物,类别,药物,靶标,抗代谢类,培美曲塞,TYMS,吉西他滨,RRM1,铂类,卡铂、顺铂,ERCC1,抗微管类,紫杉醇、多西紫杉醇、长春瑞滨、长春碱,TUBB3,靶向药物,吉非替尼、厄洛替尼,EGFR,、,KRAS,西妥昔单抗,帕尼单抗,KRAS,BRAF,PI3K,吉坦（胃肠道间质瘤） 靶标与药物,类别,靶标,伊马替尼,基因突变：,KIT E9/E11/E13/E17;PDGFR E12/E18,基因表达：,KIT,舒尼替尼,基因突变：,KIT E11;PDGFR E12,基因表达：,KIT; PDGFR ;,VEGFR1/2/3,索拉非尼,基因表达：,KIT; PDGFR ; VEGFR1/2/3,靶标检测挑战与策略,靶标,技术,样本,“个体化医疗面临的最大挑战是，还没有可信的方法来筛选适宜接受某种治疗的患者。”,-,前,ASCO,主席,Blayney,教授,靶标检测的技术保障,技术是否准确、灵敏？,是否标准的临检实验室？,是否有完善的质控体系？,在行业中所处的水平如何？,液相芯片技术是一种先进、成熟、可靠的临床检测平台,1.,首个得到,FDA,许可用于临床的多指标并行检测技术,2. Frost&Sullivan,授予,: 2005,年国际临床诊断技术革新大奖,3.,国际知名诊断试剂企业均已采用液相芯片开展大规模产品开发,4. 2005,年,6,月,9,日，基于液相芯片的学术论文刊登自然,5.,在中国，越来越多的临床专家选择液相芯片发表临床文章,关键技术：分支,DNA,（适用组织样本的多基因并行检测）,样本裂解,捕获,信号放大,阅读,分析,定量,PCR,液相芯片,样本,新鲜样本,所有样本,石蜡组织,不适应,适用,mRNA,提取,需要,不需要,逆转录,需要,不需要,PCR,需要,不需要,管家基因数,一个,可任意增加,并行检测基因数,少于,4,个,超过,30,个,重复性（,CV,值）,大于,30,小于,15,基因,mRNA,表达水平检测方法比较,关键技术：,xTAG,（适用组织样本的多基因突变并行检测）,消化,杂交,延伸,扩增,捕获,读数,液相芯片,技术与测序法的对比数据,液相芯片（）,液相芯片（）,测序法（）,68,0,测序法（）,8,124,阳性符合率：,68/,（,68+0,）,=100%,阴性符合率：,124/,（,124+8,）,=93.9%,总一致率：（,68,124,）,/200=96%,（一）,EGFR,检测（,n=200,）,（二）,KRAS,检测（,n=200,）,液相芯片（）,液相芯片（）,测序法（）,31,1,测序法（）,8,124,阳性符合率：,31/,（,31+1,）,=96.9%,阴性符合率：,160/168=95.2%,总一致率：（,31+160,）,/200=95.5%,数据来源：中国医学科学院肿瘤医院,数据来源：福建省肿瘤医院,关键技术：,MEL,（适用外周血样本的基因突变检测）,抽提,DNA,DNA,扩增,DNA,扩增,富集突变序列,交联探针,杂交,阅读,卫生部临床检验中心,2012,年全国,EGFR,突变检测室间质量评价调查活动总结,广州医学院第一附属医院分子诊断实验室,武汉协和医院,北京大学医学部基础医学院病理系分子病理实验室,浙江大学医学院附属第二医院肿瘤研究所,卫生部北京医院,北京海思特临床检验所,中山大学附属第一医院病理分子诊断室,北京大学第一医院药剂科临床药理基地,南京大学医院附属鼓楼医院病理科分子病理室,河南省人民医院分子生物学实验室,江苏省中医院病理科,北京地坛医院病理科,解放军,307,医院,解放军总医院第一附属医院病理科,中国人民解放军总医院肿瘤中心实验室,解放军总医院第一附属医院病理科,北京朝阳医院药事部,南昌大学第一附属医院检验科,中日友好医院,苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所血液室,中山大学达安基因股份有限公司,四川大学华西医院病理科,天津医科大学总医院肺癌研究所、肺外科,浙一医院病理科,首都医科大学附属北京世纪坛医院,武汉大学中南医院临床基因诊断中心,第三军医大学第二附属医院肿瘤研究所,北京爱普益医学检验中心分子生物室,昆明市第一人民医院生物医学实验中心,中南大学湘雅医学检验所,北京协和医院病理科,西南医院分子诊断室,中国人民解放军总医院肿瘤中心实验室,第四军医大学唐都医院,中山大学肿瘤防治中心分子诊断科,益善医学检验所,参与评估的部分实验室,National Center for Clinical Laboratories,质评样本,编号,EGFR,突变类型,突变比例,i,E19 del:E746_750,1%,ii,E18 G719S,5%,iii,E20 T790M & E21 L858R,1%,iv,E18 G719S,20%,v,E18 G719S,1%,vi,野生型（阴性对照）,0%,vii,E19 del:E746_750,20%,viii,E20 T790M & E21 L858R,5%,ix,E19 del:E746_750,5%,x,E20 T790M & E21 L858R,20%,xi,E19 del:E746_750,50%,xii,E20 T790M & E21 L858R,50%,xiii,E18 G719S,50%,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49,50,51,52,53,54,55,56,57,58,i,ii,iii,iv,v,vi,vii,viii,ix,x,xi,xii,xiii,结果符合,结果不符合,实验室编号（共,58,家）,样本编号,共,13,例,质评结果,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49,50,51,52,53,54,55,56,57,58,i,ii,iii,iv,v,vi,vii,viii,ix,x,xi,xii,xiii,实验室编号（共,58,家）,样本编号,共,13,例,质评结果,ARMS,测序,其他,液,相,芯,片,液相芯片技术是,唯一全部检测结果符合,盲检样本,EGFR,突变的技术,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49,50,51,52,53,54,55,56,57,58,i,ii,iii,iv,v,vi,vii,viii,ix,x,xi,xii,xiii,实验室编号（共,58,家）,样本编号,共,13,例,质评结果,液,相,芯,片,测序法不能检测,20%,以下,EGFR,突变,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49,50,51,52,53,54,55,56,57,58,i,ii,iii,iv,v,vi,vii,viii,ix,x,xi,xii,xiii,实验室编号（共,58,家）,样本编号,共,13,例,质评结果,液,相,芯,片,ARMS,法不能可靠检测,EGFR E18,！,- 50%,突变时，,28.6%,未检出；,- 20%,突变时，,19.0%,未检出；,- 5%,突变时，,52.4%,未检出；,- 1%,突变时，,100%,未检出；,国内唯一以“临床细胞分子遗传学专业”为诊疗科目的靶标检测医疗机构,在全国个体化医疗机构中，,首家通过卫生部临床检验中心临床基因扩增检验实验室（PCR实验室）,技术验收,产品通过欧盟,CE,认证，质量体系通过,ISO 13485,认证,靶标检测挑战与策略,靶标,技术,样本,N Eng J Med 2008;359:1367-80,N Eng J Med 2008;359:1367-80,样本,类型,处理方法,样本量需求,运输方式,手术,/,活检样本,新鲜手术组织,按益善,新鲜组织样本制备标准操作流程,1,粒（约米粒至黄豆大小）,常温航空快递,新鲜活检组织,按益善,新鲜组织样本制备标准操作流程,1,条或以上穿刺组织,4,块或以上咬合组织,手术组织石蜡切块,无须处理,包埋的组织（约米粒至黄豆大小）,活检组织石蜡埋块,无须处理,包埋的穿刺组织,1,条或以上；包埋的咬合组织,4,块以上,手术组织石蜡包埋切片,按益善,石蜡包埋手术组织切片样本制备标准操作流程,厚度,8,微米，,15,张白片,手术组织石蜡包埋防脱硅胶切片,按益善,石蜡包埋手术组织切片样本制备标准操作流程,厚度,4,微米，,5,张防脱硅胶切片,HE,染色病理片,按医院病理科制备病理片流程,1,张,全血,按益善,全血样本采集制备标准操作流程,2,板,常温,航空快递,血浆,按益善,血浆本采集制备标准操作流程,2,管（,1ml/,每管）,低温快递,胸水,按益善,胸水本采集制备标准操作流程,1,管（,10-15ml/,每管）,低温快递,组织样本要求,靶标检测的临床应用,参考检测报告制定个体化治疗方案,将检测数据转化成学术成果,学术交流促进个体化医疗产业发展,参考检测报告制定个体化治疗方案,将检测数据转化成学术成果,1,Shiyang Wu, Zeyao Zhu, Jiasen Xu and Lifen Ren-Heidenreich et al. A novel mutant-enriched liquidchip technology for the qualitative detection of somatic mutations in KRAS gene from both serum and tissue samples, Clin Chem Lab Med 2010;48(8). ( Short Communication),2,Lifen Ren-Heidenreich, Huiyi Yang, Xiaodi Luo, Jiasen Xu, et al. A novel mutant-enriched liquidchip technology (MEL) for detecting circulating EGFR somatic mutations in non small cell lung cancer. AACR.( poster session),3,Q. Zhou, J. He, J. Xu, L. Ren-Heidenreich, et al. RNA expression profiling of ERCC1, BRCA1, TUBB3, and STMN1 in non-small cell lung cancer by a multiplex branched DNA liquidchip technology (MBL) for predicting the efficacy of chemotherapy. J Clin Oncol 28, 2010 (suppl; abstr e21020),4,Zhu YJ, Xia Y, Ren GJ, Wang MZ, Zeng X, Zhang L.,Efficacy and clinical/molecular predictors of erlotinib monotherapy for Chinese advanced non-small cell lung cancer. Chin Med J (Engl). 2010 Nov;123(22):3200-5.,5,Guoqiang Li, Xiaodi Luo, Jiasen Xu and Lifen Ren-Heidenreich et al. A novel liquidchip platform for simultaneous detection of 70 alleles of DNA somatic mutations on EGFR, KRAS, BRAF and PIK3CA from formalin-fixed and paraffin-embedded slides containing tumor tissue, Clin Chem Lab Med 2011;49(2),:191-195.,6,REN Guan-jun, ZHAO Yuan-yuan, ZHU Yu-jia, XU Jia-sen, et al. Tumor gene mutations and messenger RNA expression: correlation with clinical response to icotinib hydrochloride in non-small cell lung cancer. C,hinese Med,J, 2011;124(1):19-25.,7,Li Zhang, Huiyi Yang, Jiasen Xu, Gene expression significance in personalized medicine of non-small-cell lung cancer and gene expression analyzing platforms. Curr Drug Metab. 2011 Jun;12(5):455-9.,8,Lu HY, Sun WY, Chen B, Zhang YP, Cai JF, Su D, Wang Z, Zheng YQ, Ma SL.,Epidermal growth factor receptor mutations in small cell lung cancer patients who received surgical resection in china.,Neoplasma. 2012;59(1):100-4.,9,Jianping Xu, Jiaying He, Huiyi Yang, Xiaodi Luo, Zhangmin Liang, Jiaxin Chen, Zhiping Cai,Jiasen Xu and Lifen Ren-Heidenreich,Somatic mutation analysis of EGFR, KRAS,BRAF and PIK3CA in 861 patients with,non-small cell lung cancer,.,Cancer Biomark. 2011;10(2):63-9.,.,10,Zhang L, Yang H, Zhao Y, Liu W, Wu S, He J, Luo X, Zhu Z, Xu J, Zhou Q,R,en-Heidenreich L. Detection of EGFR Somatic Mutations in Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC) Using a Novel Mutant-Enriched Liquidchip (MEL) Technology. Curr Drug Metab. 2012 May 16.,11,Shucai Zhang, Hui Zhang, Xinjie Yang, Xi Li, Na Qin, Jiasen Xu, Huiyi Yang, Yong-Qing Zheng, Gang Yu,.,Detection of EGFR and KRAS somatic mutations in tumor tissue and peripheral blood by a liquidchip technology for patients with advanced non-small cell lung cancer,.,J Clin Oncol 30, 2012 (suppl; abstr e18142),.,首例中国,NSCLC,大样本的体细胞突变研究,(,检测技术：液相芯片,),Cancer Biomarkers .2012.10: 6369,Cancer Biomarkers .2012.10: 6369,学术交流促进个体化医疗产业发展,谢 谢,