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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2019/3/1,#,ceRNA,机制及研究方案介绍,1,ceRNA,的基本特征,ceRNA,的研究现状,ceRNA,的方案设计,ceRNA,的验证实验设计,实例解读分享,目录,2,miRNA,作用方式,3,RNA,和,miRNA,作用方式,4,RNAmiRNA,：,1,对多；多对,1,；多对多,ceRNA,的逻辑关系,5,ceRNA,假说（,competitive endogenous RNA,，竞争性内源,RNA,）,:,共享,miRNA,结合位点的转录本,会竞争性结合相同的,miRNA,ceRNA,机制的生物学功能,RNA,转录本通过与编码,RNA,竞争性的结合,microRNA,，从而稀释掉细胞内游离,microRNA,的浓度，降低,microRNA,对编码,RNA,的抑制，进而提高目的基因的表达量,6,ceRNA,的种类,7,ceRNA,部分研究结果,8,ceRNA,的国自然面上项目申请状况,9,10,ceRNA,的课题申请状况,ceRNA,的方案设计,ceRNA,关系对的获取及基本,qPCR,分析；,ceRNA,关系对中各成分与疾病相关性验证；,ceRNA,关系对中的竞争性关系的验证；,11,12,ceRNA,关系对的获取,13,ceRNA,的验证试验（,LncRNA,为例）,实例分享一：,L,ncRNA pagbc,对,miRNA,的,海绵,调控作用,促进胆囊肿瘤,发生,Wu X, Wang F, Li H, et al. LncRNAPAGBC acts as a microRNA sponge and promotes gallbladder tumorigenesisJ.,Embo Reports, 2017.,（IF 8.568）,高通量测序,+qPCR,验证,+LncRNA,功能验证,14,文献一技术路线,15,目的,LncRNA,的确定,高通量测序,LncRNA+miRNA,测序：,9,对,胆囊癌与癌旁组织,选取,5,条,LncRNA,在,26,对癌与癌旁组织进行,qPCR,验证,构建,lncRNA-PAGBC,-mRNA的基因共表达模型,16,目的,LncRNA,的确定,验证LncRNA,-PAGBC,在大样本中的表达,在,60,个癌与癌旁组织中进行lncRNA-PAGBC表达量的统计分析，证明lncRNA-PAGBC与癌症的相关性,17,目的,LncRNA,的确定,对,77,个病例进行关于lncRNA-PAGBC的生存分析,对lncRNA-PAGBC进行两个细胞系中进行亚细胞定位,18,目的,LncRNA,的确定,在胆囊癌细胞系（,GBC,、,NOZ,）中进行,lncRNA PAGBC,沉默,，分析细胞增殖及裸鼠成瘤,19,目的,LncRNA,的确定,在胆囊癌细胞系中进行,lncRNA PAGBC,过表达,，分析癌细胞的迁移、侵袭和成瘤能力,20,LncRNAPAGBC,的与,miRNA,关系对确定,整合LncRNA与miRNA数据，预测出,PAGBC,的,6条靶miRNA,选用双荧光素酶报告系统进行关系对验证（,293T,细胞、,NOZ,细胞）,21,LncRNAPAGBC,的靶基因确定,结合miR-133b、miR-511靶基因预测以及篇首的高通量数据，推测出靶基因SOX4 和PIK3R3,癌细胞中分别转入,LncRNAPAGBC,的突变体,（分别针对miR-133b、miR-511结合位点）后，进行靶基因表达检测,22,LncRNAPAGBC,的目的基因确定,癌细胞中分别转入,LncRNAPAGBC,的突变体、过表达,+miRNA inhibitor,、,miRNA mimic,，进行靶基因表达检测,23,结论,通过高通量测序发现与胆囊癌相关的特定LncRNA，经过在病例中的检测初步筛选出目的LncRNA；,沉默、过表达LncRNA在体内及体外的功能试验，验证出,LncRNAPAGBC与胆囊癌细胞的增殖有关系；,通过生信分析从,LncRNAPAGBC预测出6个靶miRNA中，通过体内、体外试验确定出其靶标miR-133b、miR-511；,LncRNAPAGBC通过竞争性的与miR-133b、miR-511结合，促进SOX4 和PIK3R3表达升高，进而活化了AKT/mTOR通路；,24,lncRNA HOTAIR在肾癌细胞中通过miR-217调节HIF-1/ Axl信号途径,高通量测序,+qPCR,验证,+,LncRNA,功能验证,Quan H, Ou L, Wei Z, et al. LncRNA HOTAIR regulates HIF-1/AXL signaling through inhibition of miR-217 in renal cell carcinomaJ. Cell Death & Disease, 2017, 8(5):e2772.,（IF 5.965）,25,实例分享二：,研究路线,26,皮肤黑色素瘤中的竞争性内源RNA调控分子机制,高通量测序,+qPCR,验证,+circ,RNA,功能验证,Xu S, Jing S, Sheng Y, et al. Integrative analysis of competing endogenous RNA network focusing on long noncoding RNA associated with progression of cutaneous melanomaJ. Cancer Medicine, 2018(8 Suppl).,（IF 3.362）,27,实例分享三：,方案设计,测序,+qPCR,：,15W,；,IF,：,4,分左右；,功能试验：,15-25W,；,IF,：,3-5,分左右；,测序,+qPCR+,功能试验：,35-40W,；,IF,：,6-8,分,28,Salmena L, Poliseno L, Tay Y, et al. ceRNA hypothesis: The Rosetta Stone of a hidden RNA language?J. Cell, 2011, 146(3):353-8.,Thomson D W, Dinger M E. Endogenous microRNA sponges: evidence and controversyJ. Nature Reviews Genetics, 2016, 17(5):272.,29,参考文献,感谢聆听！欢迎交流学习！,30,谢谢大家！,感谢您的观看！,2019,ppt资料,32,欢迎批评指导！,2019,ppt资料,33,欢迎批评指导！,
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