初始污染菌检查

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,生物学检查,初始污染菌检查,空气中细菌总数检测方法,物体表明和生产人员手细菌总数检测方法,1,初始污染菌检测,指标含义（！）,通过测定检品细菌总数可用来判明检品,细菌,污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对检品进行卫生学评价的,综合依据。,2,初始污染菌检测,目的：,保证灭菌的效果，确定灭菌剂量，监控灭菌过程的有效性。,引用标准：,GB15980-1995,一次性使用医疗用品卫生标准,中华人民共和国药典,2010版 附录 微生物限度检查法,3,GB15980-1995,规定了一次性使用医疗用品灭菌、消毒前、后的卫生标准。对一次性使用医疗用品（包括灭菌和消毒的一次性使用医疗用品）生产企业中生产、装配、包装车间（空气中细菌总数检查方法）等生产过程和生产工人手提出卫生要求的质量控制。,4,检测环境,和检验量,在环境洁净度,10000,级下的局部洁净度,100,级的单向空气区域内进行。洁净区设置可在微生物室操作,各类产品每批随机抽样,10,件样品（,10,个包装）,5,方法主要步骤,采样,供试液制备,培养,菌落计数,6,初始污染菌检测,采样方法,供试液制备,供试品是,敷料、可以破坏性类,可用无菌手续称取,10g,放入,100ml,灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为,1,：,10,的供试液。,2.,供试品是,液体,取,10ml,加至,100ml,灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为,1,：,10,的供试液。,3.,对供试品,不能采用破坏性,取样可用浸有,无菌,生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积为,100cm,2,.,加入灭菌生理盐水,100ml,。作为供试液。,4.,可用破坏性,方法取样供试品：,（参照,中华人民共和国,药典,2010,年规定进行,),5.,对有,内腔,的医疗用器,:,用定量洗脱液，无菌操作冲洗内腔，反复冲洗，充分振落后 取样。,6.,对一次性输液（血）器的零配件及其他医疗器械,:,直接用,定量洗脱液（,1ml/10cm2,）,冲洗，将洗脱液置于无菌容器中，充分振荡后取样。,7,初始污染菌检测,梯度稀释,1ml,1ml,1ml,1ml,1ml,供试液,9mlNacl,9mlNacl,1:10,1:100,1:1000,8,检验方法,将每样取5份平行样（取一份样品，根据限值制备好供试液后，取5份1:10，取5份1:100，取5份1:1000，）,9,初始污染菌检测,结果计算公式：,平均菌落数稀释倍数菌数,菌数/每件次（或g） =,件次或重量（g）,注意事项：,供试品的取样必须在万级环境中100级净化条件下，无菌操作，防止污染。,应严格遵守无菌操作，同时消除抑菌成份的干扰。,10,产品初始污染菌数限值：,灭菌产品管道类内腔10cfu/件次，外部100cfu/件次，非管道类100cfu/件次，敷料类100cfu/g；消毒产品1000cfu/件次或重量（g）,11,初始污染菌检测,供试液制备,推荐的制备方法,样 品 制 备,供试液制备,梯度稀释,加 样,用灭菌剪刀将纱布剪成小块，称取10g，移入100ml灭菌生理盐水中，不时振摇。作为1：10供试液。,供试液10倍递减稀释。,尽量避免丝线等杂物的混入。,（1）每个稀释级各吸取1ml至每个灭,菌平皿，每个稀释级注5个平皿。,（2）经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至45-50 时，倾注上述各个平皿15ml，另倾注一个注入1ml稀释液（灭菌生理盐水）灭菌空平皿作阴性对照。按一个方向快速转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。,纱布模拟,培养,琼脂凝固后，倒置，37,培养48h,12,细 菌 计 数,基本概念,细菌数测定是微生物的定量检查，对非规定灭菌产品中污染的活菌数量进行测定，通常以每克或每毫升供试品作为计量单位。,限制条件,平板菌落计数法的特点是先使细胞分散、定位，增生可见菌落后计数。它是一种有条件的计数法，其限制条件大致如下：,以菌落数为基础。,CFU(colony forming units):,一个菌落就是一个细菌形成单位，它,可以由一个也可以由多个菌细胞形成。,受特定培养基和培养条件限制。,有繁殖能力的菌细胞才能认定“活菌”。,13,细菌计数,先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5-10倍的放大镜检查，以投射光衬以暗色背景，以防遗漏（可辅助菌落计数器）记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数（每个稀释度的5个平板值，相加后除以5）。,若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数，若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。,14,菌落特征, 形态特征：常为白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、 淡黄色（如果培养基中加入0.1%TTC,(氯化三苯基四氮唑试剂)，,菌落为红色）, 边缘整齐或不整齐，表面有光滑、粗糙，皱褶、突起或扁平。, 大小差异很大。,15,平,皿,号,细,菌,数,平行,行间,1：10,1:100,阴性,对照,3748h,菌落计数,37,48,h菌落计数,菌落均值,16,1、选取平均菌落数在30300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。,如只有1个稀释级平均菌落数在30300之间，则将稀释级的菌落数乘以稀,释倍数报告。,2、如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30300之间，则先计算两稀释级菌落数的比值。,高稀释级的平均平板菌落数稀释倍数,比值=,低稀释级的平均平板菌落数稀释倍数,当比值2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。,当比值2时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。,补充：如有3个稀释级，平均菌落数均在30300之间，则以后2级计算级间比值报告。（增加解释2）,菌落计数基本规则,17,3、如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。,4、如各稀释级平均菌落数均不在30300之间，则以最接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。,5、如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均菌落数小于1时，应报告菌数为10个/g或ml。,6、菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。大于100时，采用二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度,菌落计数基本规则,18,细菌计数结果及报告方法,例次,不同稀释度的平均菌落数,两稀释度菌数之比,菌落总数,个/g或个/ml,报告方式,个/g或个/ml,10,-1,10,-2,10,-3,1,1365,164,20,16400,16000或1,.,6,10,4,2,2760,295,46,1,.,6,38000,38000或3,.,8,10,4,3,2890,271,60,2,.,2,27100,27000或2,.,7,10,4,4,不可计,4650,513,513000,510000或5,.,1,10,5,5,27,11,5,270,270或2,.,7,10,2,6,不可计,305,12,30500,31000或3,.,1,10,4,19,空气中细菌总数检测方法,测定空气中动态下细菌总数。,采用,平板暴露法,：车间在30m2以上者，于东、西、南、北（距墙1m处）、中五点；小于30m2者，于一条对角线里、中、外三点，高度均在1.5m处采样，将普通营养琼脂平板（9cm直径）按上述采样点和高度布放，暴露15min后立即关盖，于37温箱培养24h后观察后果，求出5个或3个采样点的平均菌数,20,计算公式,菌数/m3=,式中： A平板面积，cm2；,T平板暴露时间，min；,N平均菌落数。,标准限值：,灭菌和消毒产品分别500和2000cfu/m3,21,物体表面和生产人员手细菌总数检测方法,采样方法,:,将内径为5cm5cm的灭菌规格板，放在被检物体表面，根据物体表面积大小，采平行样14个，用浸有灭菌生理盐水的棉拭子，在规格板内涂抹10次（往返计为1次），将棉拭子放入10ml灭菌生理盐水的采样管中。,对生产人员手采样：被检人五指并拢，将浸有灭菌生理盐水的棉拭子在右手指曲面，从指尖、甲沟至指根处往返涂抹10次后，将棉拭子放入10ml灭菌生理盐水的试管中。,22,检验方法和结果计算,将每个采样管震打80次，混匀，10倍递减稀释，对每个稀释度(取3个稀释度)，分别取1ml放于灭菌平皿内，每个稀释度倾注2块平板），用普通琼脂培养基作倾注培养，置37温箱倒置培养24h，观察结果，取菌落数为30300的平板计算，求出平均菌落数。,23,菌数/cm2=,菌数/每只手=平均菌数稀释倍数,24,