ABO、Rh(D)血型鉴定

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,ABO血型、Rh（D）抗原鉴定,遵医附院输血科,8608288,1,ABO血型正、反定型,目的：用于ABO血型鉴定，确保鉴定结果正确,适用范围：受血者、献血者ABO血型鉴定,使用器材和材料：离心机、标准血清、标准红细胞、吸管、玻片等,2,方法：正定型和反定型,原理,：正定型是检测红细胞表面的抗原，用标准抗A和抗B分型血清测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原；反定型是检测血清（浆）中的抗体，用标准A型细胞和B型细胞测定血清中有无相应的抗A和（或）抗B抗体。,3,Rh(D)血型定型,目的：鉴定红细胞表面是否含有D抗原。,适用范围：受血者、献血者Rh(D)血型鉴定,使用器材和材料：Rh抗(-D)标准血清、吸管、玻片等,4,方法：玻片法,原理,：根据抗D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分Rh(D)阳性和Rh(D)阴性。,5,ABO正定型及Rh（D）定型操作程序（玻片法）,取玻片1张，用红笔将其划分为左、中、右三段，首先左端加入A型（抗-B）血清1滴，中端加入B型（抗-A)血清1滴，右端加入抗（-D）血清1滴，然后在左、中、右三段同时加入受检者35%红细胞悬液1滴，并分别混匀，放置一段时间后观察结果。,注:红细胞悬液的制备,:,悬液浓度(%),压积红细胞(d),盐水(d),2,1,2.0ml(40),5,1,0.8ml(16),10,1,0.4ml(8),20,1,0.2ml(4),6,A型标准血清（抗-B）,B型标准血清,（抗-A）,左、中端红细胞凝集说明此红细胞上含有A、B两种抗原，此血型为AB型,抗（-D）血清与红细胞发生凝集，Rh（D）阳性，反之阴性。,抗（-D）标准血清,受检者3,5%红细胞悬液,左端,中端,右端,7,抗(-A)、抗(-B)、抗(-D)标准血清与红细胞悬液分别混匀放置一段时间后，标准血清与红细胞表面是否含有相应的抗原而产生不同的凝集现象，将ABO血型分为四种（即A、B、O、AB型），Rh(D)血型分为阳性、阴性二种。,8,血型凝集示意图,抗-B,抗-A,抗（-D）,血型：AB型,Rh(D)：阳性,抗-B,抗-A,抗（-D）,血型：B型,Rh(D)：,阴性,抗-B,抗-B,抗-A,抗-A,抗（-D）,抗（-D）,血型：A型,Rh(D)：阳性,血型：O型,Rh(D)：阳性,9,反定法（试管法）,取小试管2支，分别标明A、B，并同时加入受检者血清各2滴，在A管加入3%5%A型红细胞悬液1滴；B管加入3%5%B红细胞悬液1滴，混匀，1000r/min离心1min或3000r/min，离心15秒，取出观察凝集情况。,10,Ac,Bc,首先在A、B管中加入受检者血清各2滴,加入Ac1滴,加入Bc1滴,混匀后离心观察结果,离心机,反定型 （试管法）,Ac,Bc,无凝集,凝集,血型：A型,11,ABO正反定型结果判断,受检者红细胞与标准血清（正定型）,受检者血清（浆）与标准红细胞（反定型）,受检者血型,抗-A,抗-B,Ac,Bc,+,-,-,+,A,-,+,+,-,B,-,-,+,+,O,+,+,-,-,AB,12,交叉配血试验,盐水配血法,目的,：检测献血者与受血者之间血液是否相配，确保输血安全。,适用范围：适用于,血清完全抗体（IgM),的检测。,使用仪器和材料：离心机、试管、试管架、生理盐水、显微镜等。,13,原理,：在电解质（生理盐水）溶液中，带正电荷的Na,能降低红细胞表面的负电荷，减少了红细胞的排斥力而发生抗原抗体结合使红细胞凝集，从而发现配血不合。,14,聚凝胺配血法,目的：与盐水法相同,适用范围：适用于,血清中不完全抗体(IgG),的检测,仪器与材料：离心机、试管、试管架、聚凝胺试剂、吸管等。,15,原理,：聚凝胺是一种高价阳离子聚合物，溶解后能产生很多正电荷，能中和红细胞表面带有的负电荷，降低红细胞Zeta电位，并缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性凝集，这种凝集是可逆的。最后加入悬浮液，它具有中和凝聚胺阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果阴性；如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集不会散开，试验结果为阳性。,16,盐水法操作程序,：,1、,取小试管2支，标明主、次侧。主侧：受血者血清2滴加供血者35%生理盐水红细胞悬液1滴；次侧：供血者血清2滴加受血者35%生理盐水红细胞悬液1滴。,2、混匀，以1000r/min，离心1min，取出，先目测上层液体是否溶血，再轻轻摇动试管，检查红细胞是否凝集。,3、结果判断,：,主、次两侧无凝集、无溶血，表示配血相合，可以输血；主、次侧有一侧凝集或溶血，表示配血不相合，不能输血。,17,缺点：,1、只能检测出完全抗体（抗-A、抗-B）引起的血型不合，对免疫性抗体引起的血型不合不能检出，有输血史或不明输血史及妊娠史不能用该法。,2、本实验中的生理盐水对血清（浆）中的抗体有稀释作用，易导致配血结果假阴性。,3、易受冷凝集素的干扰。,18,聚凝胺配血法,1、,在盐水配血法操作完后，主、次侧加入低离子强度溶液（LISS）0.6ml，混匀，置室温1min。,2、主、次两侧加聚凝胺2d，混匀，置室温15s，3400r/min，离心10s，弃上清液后留0.1ml液体,轻摇试管,目测红细胞是否凝集，如不凝集必须重做。如果凝集，再加重悬液2滴，轻摇试管，仔细观察有无凝集，如有怀疑应在显微镜下观察结果。,结果判断：与盐水法相同。,19,注意事项：,1、用EDTA抗凝血浆代替血清配血，但不能用肝素抗凝血配血，因为肝素对聚凝胺有中和作用。,2、病人使用肝素后要加双倍量聚凝胺。,3、聚凝胺试剂使用前应恢复至室温。,4、和试剂比例要恰当，增加血清（浆）和红细胞量时，LISS及聚凝胺、重悬液的量也要增加，否则，灵敏度会降低48倍。,20,5、病人使用止血敏药物后干扰聚凝胺配血，该干扰是不能排出的。克服办法：不用酚磺乙胺后，重抽血液再配。,6、血清蛋白、高球蛋白血症可降低聚凝胺的灵敏度引起凝集不稳定。,7、聚凝胺配血最适温度22,温度降低灵敏度下降。,21,盐水配血法：,主侧,次侧,主侧加患者血清2滴、次侧加供血者血清2滴,主侧,次侧,主侧加供者红细胞1滴、次侧加患者红细胞1滴，再各加生理盐水1滴。,混匀离心后观察结果,主侧,次侧,溶血,无凝集,患者血清,供者血清,患者红细胞,供者红细胞,配血不合,凝集,22,聚凝胺配血法操作示意图:,主侧,次侧,主侧加患者血清2滴、次侧加供血者血清2滴,主侧,次侧,主侧加供者红细胞1滴、次侧加受血者红细胞1滴,主侧,次侧,第一步,第二步,第三步,两侧同时加入低离子悬液0.6ml，再加入聚凝胺各2滴。,第四步,主侧,次侧,第五步,混匀，3400r/min，离心10S。,倒掉上清液，两侧各加重悬液2滴，轻摇试管，观察结果。,无凝集红细胞均匀散开,凝集红细胞凝集成团,23,