Coombs操作说明

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,2008-08-08,新生儿溶血症,Coobms,试验,Coobms,试验,标本要求：婴儿父母，婴儿各,1-2 ml,抗凝血。,检测项目：,ABO,血型，,Rh(D,),，直抗，,放散，游离试验。,记费标准：,200,元。,一实验前准备：,1,1%,标准,A,，,B,，,O,型红细胞悬液,（三人以上混合，洗涤一次）。,2. 1%,不完全抗体筛选细胞（,O,型红细胞）,、,、,，,0.2M,巯基乙醇应用液。,3,打开,37Diana,孵育器，,56,水浴箱，,各离心机电源。,二新生儿及其父母血型卡、直抗试验,1,：,1,离心抗凝血标本，取压积红细胞,1,ul,加,1 ml,生盐配成,1%,红细胞悬液（可不洗涤）。,2,血型卡上写好姓名，,8,孔中加入,患者,1%,的红细胞悬液,50,ul,。,3,不孵育，将卡放到,Dianafuge,离心机中离心。,4,观察血型、直抗试验结果。,注：,IgG,：兔多克隆抗,-,IgG,AHG,：多克隆抗人球蛋白,二新生儿及其父母血型卡、 直抗试验,2,：,姓名,离心,观察血型、,直抗试验结果,患者,1%,的红悬,50,ul,三放散试验,1,：,1,取新生儿压积红细胞,200,ul,洗涤三次。,2,加,200,ul,生盐混匀在,56,水浴箱,10,分钟（中间轻轻振荡几次），,2500,转,/,分离心,3,分钟。,3,Coombs,卡上做好标记，取上述,上清液,50,ul,加到,Coombs,卡孔上。,三放散试验,2,：,4,加入相应,1%,标准,A,，,B,，,O,型红细胞悬液,50,ul,。,原则：,新生儿血型为,A,型，加标准,A,，,O,型红悬,2,孔；,新生儿血型为,B,型，加标准,B,，,O,型红悬,2,孔；,新生儿血型为,AB,型，加标准,A,，,B,，,O,型红悬,3,孔；,新生儿血型为,O,型，加标准,O,型红悬,1,孔；,5. 37,下孵育,15,分钟，离心。,6.,观察放散试验结果。,三放散试验,：,新生儿压积,红悬,200ul,洗涤三次,压积红,:,生盐,=1:1,56,10min,2500rpm,3min,+,1%,标准,A,，,B,，,O,型红细胞悬液,50,ul,A O,放散,姓名,离心,观察放散,试验结果,37,15min,上清,50ul,四游离试验：,1,Coombs,卡上做好标记，加入,50,ul,新生儿血浆,。,2,加入相应,1%,标准,A,，,B,，,O,型红细胞悬液,50,ul,。,原则：,新生儿血型为,A,型，加标准,A,，,O,型红悬,2,孔；,新生儿血型为,B,型，加标准,B,，,O,型红悬,2,孔；,新生儿血型为,AB,型，加标准,A,B,O,型红悬,3,孔；,新生儿血型为,O,型，加标准,O,型红悬,1,孔；,4. 37,下孵育,15,分钟，离心。,5.,观察放散试验结果。,五直接抗人球蛋白试验,(,Cooms,),：,在,Coombs,卡,AHG,下做好标记。,加入,1%,被检红悬,50,ul,。,3.,不孵育，将卡放到,Dianafuge,离心机中离心。,4.,观察血型、直抗试验结果。,注：,AHG,：多克隆抗人球蛋白,六,IgG,抗体效价检测：,1.Coombs,卡上做好标记。,2.,取,200ul,孕妇血浆与,200ul,巯基乙醇应用液等量混匀，,37,水浴,1,小时，破坏,IgM,抗,A/B,抗体。,3.2500,转,/,分离心,3,分钟，取上清,100ul,，用生理盐水等比稀释至,1,：,512,。,4.,在,Coombs,卡,4,孔上加入稀释好的第,5-8,孔,50,ul,，再加入相应,1%,标准,A,，,B,，,O,型红细胞悬液,50,ul,。,5.37,下孵育,15,分钟，离心。,6.,观察放散试验结果。,七,IgG,抗体效价检测：,1.Coombs,卡上做好标记。,2.,主侧：患者血浆,50ul, 供者红悬,50ul,。,3.,次侧：供者红悬,50ul, 患者血浆,50ul,。,4.37,下孵育,15,分钟，离心。,5.,观察放散试验结果。,八抗体筛查,：,1.Coombs,卡上做好标记。,2.,患者血浆,50ul,1%,不完全抗体筛选细胞各,50ul,。,3.37,下孵育,15,分钟，离心。,4.,观察放散试验结果。,九注意事项：,1,红细胞悬液浓度为,1%,，过高过低可能影 响结果。,2,实验后做好结果的记录和报告，保存血标本在,4,冰箱一周。,Thank you !,