《动物传染病学（实验）》课件8 血凝和血凝抑制试验

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验八,血凝和血凝抑制试验,（,Hemagglutination,and,Hemagglutination,Inhibition, HA and HI,）,2013.12.11,能凝集红细胞的病原,禽流感病毒,新城疫病毒,传传染性支气管炎病毒（胰酶，磷脂酶,C,）,EDS76,副鸡嗜血杆菌,鸡毒支原体,血凝和血凝抑制试验的原理。,实验操作步骤和结果判定。,一、实验目的,二、实验原理,（一）血凝试验（,HA,）,一些病毒能够促使动物如鸡、鹅、豚鼠和人的红细胞发生凝集，叫做,血凝试验,。,HA,试验的原理图,+ + + + -,血凝试验结果判定,1:2,1,1:2,2,1:2,3,1:2,4,1:2,5,1:2,6,1: 2,7,1:2,8,1:2,9,1:2,10,1:2,11,1:2,12,血凝价：,能使红细胞产生,50%,凝集的病毒最高稀释度。,V,a,V,b,V,c,V,d,（二）血凝抑制试验（,HI,）,当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种红细胞凝集的现象就被抑制，称红细胞凝集抑制试验，即,血凝抑制试验,。,HI,试验的原理图,三、实验材料,鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（,Lasota,）,接种鸡胚、收获尿囊液制备。,鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，以生理盐水洗涤,35,次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配置成,1%,红细胞悬液使用。,0.85%,生理盐水。,被检血清，采自被检鸡的健康血清,。,四、实验步骤,（一）血凝试验（,HA,）,112,孔加入,50l,生理盐水,;,第,1,孔加,50,l,病毒悬液，,倍比稀释,到第,10,孔；,112,孔中加入,1%,的红细胞,50l,；,震荡后置,372530min,观察结果。,病毒液的血凝价是,1:2,？,。,（二）血凝抑制试验（,HI,）,111,孔加入,25l,生理盐水,;,第,1,孔加待检血清,25l,，倍比稀释至第,10,孔,;,111,孔加,25l,4,个血凝单位,的病毒悬液,;,112,孔中每孔加入,1%,的红细胞,50l;,震荡后置,372530min,观察结果,;,红细胞凝集,100%,的抑制作为结果判定的终点。,如果血凝价为,1:2,8,，那么,4,个血凝单位就是将病毒液进行,1:2,6,倍稀释,10/640= 1/2,6,所以病毒原液取,10l,，生理盐水取,630l,；,4,个血凝单位病毒悬液体积：,25l /,孔,12,孔,=400l,。,血清,血凝抑制试验结果判定,测定孔,RBC,沉于孔底中心，呈纽扣状。(+),凝集 （-）,血清对照孔：,RBC,沉于孔底，无自凝,病毒对照孔：凝集,RBC,对照孔：无自凝,血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制时的最高血清稀释度。,五、结果判定,血凝价是,1:2,？,；,血凝抑制价是,1:2,？,；,被检血清为阴还是阳性,?,1:2,4,为阳性,1:2,2,为阴性,1:2,3,为可疑,血凝抑制价,六、思考题,血凝和血凝抑制试验在兽医学中的应用。,HA,HI,细胞对照,