PDPA测定乙酰胆碱和维库溴铵对NmR的亲和力测定

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,乙酰胆碱和维库溴铵对,Nm-R,亲和力测定,（,pA2,、,pD2,的测定）,1,【实验目的】,1,学习,蟾蜍腹直肌,标本的制备方法和受体激动剂,量,-,效曲线,的测定方法。,2,掌握药物的,pD,2,及,pA,2,的定义,。,3.,掌握,乙酰胆碱和竞争性肌松药（维库溴铵）对骨骼肌,Nm-R,的,pD,2,和,pA,2,值的,测定,和,计算方法,及其意义,2,【实验原理】,1.,pD,2,为激动剂激动受体产生,50%,最大效应所需的摩尔浓度的负对数值,2.,pA,2,为,竞争性拮抗剂摩尔浓度的负对数值，在此浓度下，激动剂要产生原有效应其浓度必须增大,1,倍。,3,乙酰胆碱,能,激动,腹直肌上的,N,m,受体,，使腹直肌收缩；,维库溴铵,是竞争性,Nm,受体拮抗剂，与乙酰胆碱竞争,N,m,受体，,阻遏,乙酰胆碱对腹直肌的收缩作用。,本实验预先加入一定量的,N,m,受体,竞争性拮抗剂,维库溴铵,，,乙酰胆碱,要达到原有效应必须增加剂量。,由此出现,维库溴铵,使,乙酰胆碱,的,量效曲线平行右移,，根据曲线右移情况，,可求得,乙酰胆碱,对,N,m,受体,的,pA,2,值。,4,【,动物,】,蛙或蟾蜍,【,方法,】,1.,制备长约,1.5 cm,宽约,3-4mm,的上腹直肌。,2.,标本安装、固定同前腹直肌实验，,水浴管营养液体积,10ml,，充入空气（,1-3,个,/,秒）。打开,BL-410,系统，选择药理实验模块，肌张力测定（或,pA,2,和,pD,2,测定），给予大约,2g,前负荷,，平衡,10min,。,5,3.,描记正常张力曲线后，依次给药，观察张力的变化,以累加量效曲线法获得,Ach,激动,Nm,受体的量效曲线。加入顺序和量如下：,Ach10,-5,mol/L,0.1ml,，,Ach10,-5,mol/L,0.2ml,，,Ach10,-4,mol/L,0.07ml,，,Ach10,-4,mol/L,0.2 ml,，,Ach,10,-3,mol/L,0.07ml,，,Ach,10,-3,mol/L,0.2ml,，,，,Ach,终浓度分别是,10,-7, 310,-7, 10,-6,，,310,-6,，,10,-5, 310,-5,，,10,-4, 310,-4,mol/L,。,6,累加次序,Ach,浓度（,mol/L）,Ach,的毫升数（,ml）,终浓度,（,mol/L）,1,10,-5,0.1,10,-7,2,10,-5,0.2,3,10,-7,3,10,-4,0.07,10,-6,4,10,-4,0.2,3,10,-6,5,10,-3,0.07,10,-5,6,10,-3,0.2,3,10,-5,7,10,-2,0.07,10,-4,8,10,-2,0.2,3,10,-4,7,用任氏液冲洗,3,次，待基线基本恢复正常后，加入,0.267%,维库溴铵溶液（,10,-7,mol/L,）,0.1ml,，,5-10min,后重复,(1),步骤，记录维库溴铵对,Ach,量效曲线的影响。,4.,以,Ach,效应为纵坐标，浓度对数为横坐标作图，初步估计,Ach,对,Nm-R,的,pD,2,值。,8,5.,直线回归法求,Ach,pD,2,值：,E/D = Emax/KD,E/KD,E,为对应,Ach,浓度,D,产生的效应。令,E/D,为,Y, E,为,X,，上式为直线方程。其中截距（,a,）为,Emax/KD,，斜率（,b,）为,-1/KD,。以,BL-420,分析系统或,3600P,计算器求出,pD2,，,a,、,b,和,r,值。,9,6.,计算维库溴铵的,pA,2,值：,按下述公式计算,维库溴铵对,Nm-R,的,pA,2,值。,维库溴铵的,pA,2,值,=,维库溴铵摩尔浓度负对数值,+,Log(,无维库溴铵时,Ach,pD,2,/,有维库溴铵时,Ach,pD,2,)-1,10,【,结果,】,多媒体描记张力变化的曲线，注明所用药物。,【,讨论,】,分析讨论用药后所引起的腹直肌的不同反应及产生的原因。,11,