七章二部分课件

单击此处编辑母版,*,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第七章 糖类,糖的理化性质,2,糖的结构测定,4,糖的分类,3,1,糖的提取分离,3,3,糖的提取分离,三、糖的提取分离,1,溶于冷水和温乙醇,用醇温浸，铅盐沉淀，除去其他物质后结晶,溶于温水，难溶于冷水，不溶于乙醇,温水浸，铅盐沉淀蛋白质后脱铅，乙醇沉淀,溶于冷水不溶于乙醇,水提，铅盐沉淀，脱铅后乙醇沉淀,难溶于水，可溶于稀碱,用稀,NaOH,提取，加醇沉淀析出,1.,糖的提取,2,3,4,三、糖的提取分离,Sevag,法,酶解法,三氟三氯乙烷法,三氯,醋酸法,脱除蛋白质的方法,三、糖的提取分离,化学沉淀法,离子交换法,铅盐和,活性炭法,杂质的去除,主要有,3,种,2.,糖的分离,三、糖的提取分离,糖的,分离,方法,钙、锶及钡,复盐形式法,铅盐沉淀法,分级沉淀或,分级溶解法,活性炭柱色谱,纤维素柱色谱,淀粉柱色谱,离子交换法,季铵盐沉淀法,凝胶柱色谱,制备型区域电泳,第七章 糖类,糖的理化性质,2,糖的结构测定,4,糖的分类,3,1,糖的提取分离,3,3,糖的结构测定,四、糖的结构测定,多糖的结构测定与常见天然产物有许多不同之处，本节不做详细介绍。天然产物中的苷类成分多为固体化合物。其结构鉴定应通过以下各项程序进行：,四、糖的结构测定,1,2,3,4,5,纯度的测定,分子量的测定,单糖种类的鉴定,连接位置的鉴定,苷键构型的鉴定,基,本,步,骤,四、糖的结构测定,(,一,),纯度的测定,超离心法，高压电泳法，凝胶柱色谱法，旋光测定法,四、糖的结构测定,(,二,),分子量的测定,近年来广泛应用质谱分析的方法测定分子量和分子式。苷类化合物一般极性较大，无挥发性，遇热气化时易于分解，采用电子轰击质谱,(,EI,-,MS,),常常不能获得分子离子峰。,四、糖的结构测定,现多采用化学电离质谱,(,CI,-,MS,),、场解吸质谱,(,FD,-,MS,),、快原子轰击质谱,(,FAB,-,MS,),和电喷雾质谱,(,ESI,-,MS,),等方法来获得分子离子蜂，尤其是,ESI,-,MS,及,FAB,-,MS,两种质谱法更是目前测定苷类分子量常用的方法。,四、糖的结构测定,(,三,),单糖的鉴定,1.,多糖的完全水解,常用稀酸水解，注意掌握适合的条件使多聚糖完全水解，又不使水解下来的单糖变化或重新聚合。,四、糖的结构测定,2.,糖的纸色谱（,PC,）,糖类的,PC,常用的展开剂大多为含水的溶剂系统，其中以正丁醇,-,醋酸,-,水和用水饱和的苯酚两种系统应用得最普遍，如正丁醇,-,醋酸,-,水,(,4:1:5,),，,乙酸乙酯,-,吡啶,-,水,(,2:1:2,),等。,四、糖的结构测定,糖类的,Rf,值与溶剂的含水量有关，因此配制展开剂时必须注意，尤其对于三元组成的展开剂，其混合比例更应力求准确，并需用标准品同时点样作为对照。,四、糖的结构测定,展开剂,薄层色谱,显色剂,吸附剂,3.,糖的薄层色谱,四、糖的结构测定,糖类的,TLC,常选用硅胶薄层，由于糖的极性强，一般点样量不能大于,5,ug,，但这一缺点在用硼酸溶液或一些无机盐的水溶液代替水调制吸附剂进行铺板时得到克服，显著提高了上样量，并改善分离效果。,吸附剂,四、糖的结构测定,制备这种硅胶薄层板时，所用的盐一般是强碱弱酸,(,或中强酸,),盐，如,0.3mol/L,的磷酸氢二钠或磷酸二氢钠的水溶液。,四、糖的结构测定,糖类硅胶薄层色谱常用的展开剂为正丁醇,-,丙酮,-,水、正丁醇,-,醋酸,-,水或正丁醇,-,吡啶,-,水。,展开剂,四、糖的结构测定,糖的,PC,或,TLC,所用的显色剂有些是相同的，其显色原理主要是利用糖的还原性或由于形成糖醛后引起的呈色反应。有些显色剂不仅可以决定糖的斑点的位置，尚可区分其类型。,显色剂,四、糖的结构测定,常用的显色剂有苯胺,-,邻苯二甲酸试剂、三苯四氮盐试剂,(,TTC,试剂,),、间苯二酚,-,盐酸试剂、双甲酮,-,磷酸试剂等。,四、糖的结构测定,苯胺,-,邻苯,二甲酸,显色剂对不同的糖往往显不同的颜色,已醛糖,糖醛酸,戊醛糖,棕色,棕色,红色,间苯二,酚,-,盐酸,紫色,蓝色,蓝色,四、糖的结构测定,有些显色剂中含有硫酸，因此只能用于,TLC,。例如茴香醛,-,硫酸试剂、间苯二酚,-,硫酸试剂、,-,萘酚,-,硫酸试剂、百里酚,-,硫酸试剂、酚,-,硫酸试剂等，喷后一般要在,100,左右加热数分钟至斑点显现。,以,CMC-Na,为粘合剂的硅胶薄层板，在使用含浓硫酸的显色剂时亦应注意加热的温度与时间。,显色剂,四、糖的结构测定,气质联用技术可以简化糖结构分析工作。,应 用,制备成三甲基硅醚等增加挥发性, 难于挥发,用,NaBH,4,等还原成多元醇，制成乙酰化物或三氟乙酰化物, 形成端基异构体,4.,糖的气相色谱及气质联用色谱,两个不利因素,四、糖的结构测定,5.,糖的离子交换色谱,应用糖的硼酸络合物进行离子交换,四、糖的结构测定,(,四,),多糖的部分酸水解,把大分子裂解成较小的片段，部分酸水解产物的基本结构具有代表性。,四、糖的结构测定,1,3,连接,1,4,连接,生成脱,氧糖酸,生成,3,-,脱,氧,-,2,-,羟甲,基糖酸,(,五,),多糖的碱水解,速度为,后者,的,10,倍,四、糖的结构测定,多糖全甲基化,90%,甲酸全水解,H,2,SO,4,或三氟乙酸水解,乙酰化新羟基,气相色谱分析,步骤,(,六,),多糖的甲基化,四、糖的结构测定,(,七,),多糖的,Smith,降解,每开裂一个,C,-,C,消耗一分子过碘酸,。测定过碘酸消耗量，甲酸生成量和剩余糖的比例可推测多糖的结构。,四、糖的结构测定,Smith,降解,H,(,八,),糖的红外波谱,多糖在,960cm,-1,1500cm,-1,范围内有许多吸收峰，确定苷键构型上主要观察,730cm,-1,960cm,-1,。,四、糖的结果测定,Thank You !,