食品的测定实验八食品中维生素C的含量测定

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验九： 食品中维生素,C,的含量测定,1,一、目的要求,理解,2,4,二硝基苯肼比色法测定抗坏血酸总量的基本原理。学习其操作方法和了解影响测定准确性的因素。,二、实验原理,总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与,2,4,二硝基苯肼作用生成红色脎，其呈色强度与总抗坏血酸含量呈正比，可进行比色定量。,2,三、,仪器与试剂,（一）试剂,1,、,4.5mol/L,硫酸：量取,250mL,浓硫酸小心加入,700mL,水中，冷却后用水稀释至,1000mL,。,2,、,85%,硫酸：小心加,900mL,浓硫酸于,100mL,水中。,3,、,2% 2,4,二硝基苯肼：溶解,2,4,二硝基苯肼,2g,于,100mL 4.5mol/L,硫酸中，过滤。不用时存于冰箱内，每次使用前必须过滤。,4,、,2%,草酸溶液。,5,、,1%,草酸溶液。,6,、,1%,硫脲溶液：溶解,1g,硫脲于,100mL1%,草酸溶液中。,7,、,2%,硫脲溶液：溶解,2g,硫脲于,100mL1%,草酸溶液中。,8,、,1mol/L,盐酸：取,100mL,盐酸，加入水中，并稀释至,1200mL,。,9,、抗坏血酸标准溶液：称取,100mg,纯抗坏血酸溶解于,100mL 2%,草酸溶液中，此溶液每毫升相当于,1mg,抗坏血酸。,10,、活性炭：将,100g,活性炭加到,750mL 1mol/L,盐酸中，回流,1h2h,，过滤，用水洗数次，至滤液中无铁离子（,Fe3+,）为止，然后置于,110,烘箱中烘干。,3,（二）仪器,1,、恒温箱或电热恒温水浴锅。,2,、可见光分光光度计。,3,、捣碎机。,4,四、实验步骤,1,、样品处理（全部实验过程应避光）。,（,1,）鲜样的制备：称取,100g,鲜样即加入,100mL 2%,草酸溶液，倒入捣碎机中打成匀浆，称取,10.0g40.0g,匀浆（含,1mg2mg,抗坏血酸）倒入,100mL,容量瓶，用,1%,草酸溶液稀释至刻度，混匀。过滤，滤液备用。,（,2,）干样制备：称取,1g 4g,干样（含,1mg2mg,抗坏血酸）放入乳钵内，加入等量的,1%,草酸溶液磨成匀浆，连固形物一起倒入,100mL,容量瓶内，用,1%,草酸溶液稀释至刻度，混匀。过滤备用。,2,、样品还原型抗坏血酸的氧化处理,量取,25.0mL,上述滤液，加入,2g,活性炭，振摇,1min,，过滤，弃去最初数毫升滤液。吸取,10.0mL,此氧化提取液，加入,10.0mL 2%,硫脲溶液，混匀，此试样为稀释液。,5,3,、呈色反应,（,1,）取,3,支试管，各加入,4mL,经氧化处理的样品稀释液。基中一支试管作为空白，向其余两试管加入,1.0mL 2%2,4,二硝基苯肼溶液，将所有试管放入,370.5,恒温箱或恒温水浴中，保温,3h,。,（,2,）,3h,后取出，除空白管外，将所有试管放入冰水中。空白管取出后使其冷到室温，然后加入,2%2,4,二硝基苯肼溶液,1.0mL,，在室温中放置,10min15min,，后放入冰水内。其余步骤同试样。,4,、,85%,硫酸处理,当试管放入冰水冷却后，向每一试管（连同空白管）中加入,85%,硫酸,5mL,，滴加时间至少需要,1min,，需边加边摇动试管。将试管自冰水中取出，在室温放置,30min,后比色。,6,5,、样品比色测定,用,1cm,比色皿，以空白液调零点，于,500nm,波长测定吸光值。,6,、标准曲线绘制,（,1,）加,2g,活性炭于,50mL,标准溶液中，振动,1min,后过滤。吸取,10.00mL,滤液放入,500mL,容量瓶中加,5.0g,硫脲，用,1%,草酸溶液稀释至刻度。抗坏血酸浓度,20g/mL,。,吸取,5,，,10,，,20,，,25,，,40,，,50,，,60mL,稀释液，分别放放,7,个,100mL,容量瓶中，用,1%,硫脲溶液稀释至刻度，使最后稀释液中抗坏血酸的深度分别为,1,，,2,，,4,，,5,，,8,，,10,，,12g/mL,，为抗坏血酸标准使用液。,（,2,）分别吸取,4mL,各不同深度的抗坏血酸标准使用液，于,7,个试管中，吸取,4mL,水于试剂空白管，各加入,1.0mL 2%2,4,二硝基苯肼溶液，混匀，将全部试管放入,375,恒温箱或恒温水浴中，保温,3h,。,3h,后将,8,个试管取出，全部放入冰水冷却后，向每一试管中加入,5mL 85%,硫酸，滴加时间至少需要,1min,，边加边摇，。将试管自冰水取出，在室温放置,30min,后，以试剂空白管调零，并比色测定。,以吸光值为纵坐标，抗坏血酸含量（,mg,）为横坐标绘制标准曲线或计算回归方程。,7,五、结果计算,式中,X,样品中总抗坏血酸含量,mg/100g,；,c,由标准曲线查得或由回归方程算得试样测定液总抗坏血酸含量（,mg,）；,m,测定时所取滤液相当于样品的用量（,g,）。,计算结果表示到小数点后两位。,8,六、考思考题,1,、试样制备过程为何要避光处理？,2,、为何加入,85%,硫酸溶液时，速度要慢而且需在冰水浴条件下完成？解释若加酸速度过快使样品管中液体变黑的原因。,3,、样品比色测定时，用样品空白管调零的目的何在？,9,