HBV基因分型和耐药突变基因检测的临床应用

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,HBV,基因分型和耐药突变基因检测的临床应,用,产品介绍,1,2,背景介绍,主 要 内 容,乙型病毒性肝炎,是由乙型肝炎病毒（,HBV,）引起的肝脏炎性损害。是我国当前流行最广泛、危害最严重的一种传染病。,HBV,感染呈世界性流行，但不同地区,HBV,感染的流行强度差异很大。据世界卫生组织报道，全球约,20,亿,人曾感染过,HBV,，其中,3.5,亿,人为慢性,HBV,感染者，每年约有,100,万,人死于,HBV,感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌,(HCC),1,。,1 World Health Organization. Hepatitis B. World Health Organization Fact Sheet 204,dex,. (Revised,October 2000). WHO Web site .http:/,www.who.int/mediacentre,/ factsheets/fs204/en/ in html.,流行病学,流行病学,Clinical and Epidemiologic Correlations in HBV Infection.,Lok,AS, McMahon BJ. Chronic hepatitis B.,Hepatology,2007;45:507-39. Erratum,Hepatology,2007;45:1347.,流行病学,2006,年全国乙型肝炎流行病学调查结果表明,：,我国,1,59,岁人群乙肝表面抗原携带率为,7.18%,，,据此推算，,我国现有的慢性,HBV,感染者约,9300,万,人，,其中慢性乙型肝炎患者约,2000,万例,2,2 ,慢性乙型肝炎防治指南（,2010,年版）,中华医学会肝病学会，中华医学会感染病学分会，,2010,年,12,月,10,日,病原学,HBV,（,hepatitis B virus,）乙型肝炎病毒，属嗜肝病毒科，基因组长约,3.2Kb,，为部分双链环状,DNA,。,HBV,已发现有,AI,9,个基因型，在我国以,C,型和,B,型为主。,包膜：,HBsAg,糖蛋白细胞脂肪,核心：,HBV-DNADNA-Polymerase,HBcAg,病原学,HBV,侵入肝细胞后，部分双链环状,HBV DNA,在细胞核内以负链,DNA,为模板延长正链以修补正链中的裂隙区，形成共价闭合环状,DNA (,cccDNA,),；然后以,cccDNA,为模板，转录成几种不同长度的,mRNA,，分别作为前基因组,RNA,和编码,HBV,的各种抗原。,cccDNA,半寿,(,衰,),期较长，很难从体内彻底清除。,HBV,感染和发展的结局图,HBV,感染可有不同的发展和结局，这是由,病毒和宿主双方因素,决定的。,病毒方面：,感染的数量和毒株的异质性、以及传播的方式；,宿主方面：,免疫状态、以及决定免疫状态的年龄、遗传素质、基础健康状况和并存的疾病。,自然史,诊断, 临床诊断,既往有乙型肝炎病史或,HBsAg,阳性超过,6,个月，现,HBsAg,和（或）,HBV DNA,仍为阳性者，可诊断为,慢性,HBV,感染,。可分为：,慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、携带者、隐匿性慢性乙型肝炎, 实验室诊断,生物化学检查,：,ALT,、,AST,、血清白蛋白、,PT,、胆碱酯酶、,AFP,血清学检查,HBV DNA,、基因型和变异检测,：定量检测、分型和耐药突变检测, 影像学诊断, 病理学诊断,治疗,慢性乙型肝炎治疗的总体目标,最大限度地长期抑制,HBV,，减轻肝细胞炎症坏死及肝纤维化，延缓和减少肝脏失代偿、肝硬化、,HCC,及其并发症的发生，从而改善生活质量和延长存活时间。,慢性乙型肝炎治疗,抗病毒、免疫调节、抗炎和抗氧化、抗纤维化和对症治疗。,抗病毒治疗是关键，只要有适应证，且条件允许，就应进行规范的抗病毒治疗。,干扰素：直接抗病毒作用和免疫调节作用,清除病毒。,我国已批准,普通,IFN,（,2,、,2b,和,1b,）,和,聚乙二醇干扰素,（,2,和,2b,）,用于治疗慢性乙型肝炎。,HBV,基因型与疾病进展和干扰素,治疗效果有关。,与,C,基因型感染者相比，,B,基因型感染者较早出现,HBeAg,血清学转换，较少进展为慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌。,HBeAg,阳性患者对干扰素,治疗的应答率，,B,基因型高于,C,基因型；,A,基因型患者高于,D,基因型,。,治疗,治疗,核苷（酸）类药物：,竞争性抑制,HBV DNA,聚合酶；参与新的,HBV DNA,链合成过程中，终止新链合成。,目前已应用于临床的抗,HBV,核苷（酸）类药物有,3,类，我国已上市,4,种。,核苷（酸）类似物,L-,核苷类似物,无环磷酸酯,环戊烯,拉米夫定,LMV,阿德福韦酯,ADV,恩替卡韦,ETV,恩曲他滨,ETB,替诺福韦,TDF,阿巴卡韦,ABV,替比夫定,LdT,克立夫定,CLV,治疗,耐药是核苷酸类药物的共性,耐药检测的意义,治疗前检测，有助于临床判断用药是否有效；,治疗中每,36,个月检测，有助于观察疗效，及时调整用药。,EASL Clinical Practice Guidelines,：,Management of chronic hepatitis B. European Association for the Study of the Liver. J,Hepatol, 2009, 50: 227-242.,HBV,基因分型和耐药突变基因检测产品介绍,乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测试剂盒,（,PCR-,反向点杂交法）,国食药监械（准）字,2011,第,3401179,号,样本处理,芯片制备,产品用途,在,抗病毒治疗前和治疗中,对血清,/,血浆中的,HBV,进行基因分型和耐药突变基因检测,1,2,区分中国和其他亚洲国家常见的,HBV-B,、,C,、,D,基因型,检测,HBV 3,类抗病毒药物,5,个热点突变位点的,6,种突变类型,HBV,耐药突变基因检测的临床意义,1.,抗病毒药物治疗前的药物选择,在慢性乙肝患者抗病毒药物治疗前，进行耐药突变基因检测，可以指导临床医生合理选择抗病毒药物，真正实现个体化诊治。,2.,抗病毒药物治疗中的药效监测,在慢性乙肝患者抗病毒药物治疗过程中，进行耐药突变基因检测，可以监测抗病毒药物治疗效果并及时调整治疗方案。,HBV,基因分型的临床意义,1.,预测疾病进展,与,C,基因型感染者相比，,B,基因型感染者较早出现,HBeAg,血清学转换，较少进展为慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌。,2,.,治疗方案的选择,HBeAg,阳性患者对干扰素,治疗的应答率，,B,基因型高于,C,基因型；,A,基因型患者高于,D,基因型,3.,流行病学调查研究,1.,准确性：,检测,105,例临床慢性,HBV,感染阳性样本，结果与测序比较显示为相同的基因型和耐药突变类型，准确率为,100%,。,2.,特异性：,检测,50,例临床,HBV,阴性样本结果全部为阴性；检测非,HBV,感染性病原体,DNA,，包括,C,型肝炎病毒（,HCV,）、乙型脑炎病毒、梅毒螺旋体和,HIV,，结果均为阴性。,3.,灵敏度：,能稳定检测血清,HBV,的最低检出限为,1.010,3,IU/mL,。,4.,精密度：,检测,2.010,3,IU/mL,的血清,HBV,，批内和批间的一致性好。,5.,稳定性：,产品有效期为,6,个月，在有效期内产品性能稳定。,产品性能指标,产品使用,产品操作流程,产品使用,HBV,膜条探针阵列图,rt,=reverse transcriptase,，逆转录酶。以逆转录酶编码氨基酸的顺序命名各检测位点。如：,rt180L,表示逆转录酶编码氨基酸第,180,位为亮氨酸。,CC,为显色控制点。,试验成立的条件,显色控制点,CC,正常显色。,阳性质控品正常显色同时阴性质控品除,CC,外其他所有阵列位点不显色。,结果判读,根据显色（蓝色斑点）出现的阵列位点直接判读,HBV,的基因型和耐药突变类型。,示例：,产品使用,产品使用,结果判读示例,交叉耐药突变与核苷类似物药物的关系表,注释：, 耐药水平分高、中、低三级，以体外实验,IC,50,的变化倍数计算,（变化倍数是相比较于野生株而言）；,IC,50,指：最大药物抑制浓度的一半。, 低：,IC,50,5,；中：,IC,50,为,520,；高：,IC,50,20,。,LMV,LdT,ADV,TDF,ETV,rtL180M,中,中,/,/,低,rtM204V/I,高,高,/,/,中,rtV/M207I,中,低,/,/,/,rtA181V,中,中,中,低,中,rtN236T,低,/,中,/,/,Marc,Chany, T. Jake Liang. Drug targets and molecular mechanisms of drug resistance in chronic hepatitis B. Gastroenterology,2007(132):1574-1585.,产品使用,适用人群及科室,适用人群,：慢性乙肝患者的用药指导及疗效监测,科室,：检验科、感染科、消化内科、肝病科等,使用原则,：,慢性乙肝患者抗病毒药物治疗前进行检测，确定,HBV,基因型和是否发生耐药突变，指导选择敏感的治疗药物；,在抗病毒治疗过程中建议,3-6,个月进行一次检测，实时监控耐药突变的发生。,检测后的处理,-,慢性乙型肝炎防治指南（,2010,年版）,对于接受拉米夫定治疗的患者，一旦检出基因型耐药或,HBV DNA,开始升高时就加用阿德福韦酯联合治疗，抑制病毒更快、耐药发生较少、临床结局较好。,对于替比夫定、恩替卡韦发生耐药者，亦可加用阿德福韦酯联合治疗。,对于阿德福韦酯耐药者，可加拉米夫定、替比夫定、恩替卡韦联合治疗；,对于未应用过其他核苷（酸）类药物者，亦可换用恩替卡韦。,对于核苷（酸）类药物发生耐药者，亦可考虑改用或加用,IFN,类联合治疗，但应避免替比夫定和,PegIFN,联合应用，因为可导致外周神经肌肉疾病。,谢谢,