酶活性的影响因素

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,酶活性的影响因素,Vane,1,知识背景,pH、温度、紫外线、重金属盐、抑制剂、激活剂等通过影响酶的活性来影响酶促反应的速率；酶的浓度、底物的浓度等不会影响酶活性，但可以影响酶促反应的速率。,纳氏试剂（Nessler）是指一种利用红外可见分光光度法原理用于测定空气中、水体中氨氮含量的试剂。,碘离子和汞离子在强碱性条件下，会与氨反应生成红棕色胶态化合物，此颜色在波长420nm左右会有强烈的吸收。而生成的这类红棕色胶态化合物的量会与其溶液的吸收值成正比，可用测试反应液的吸收值而测定氨氮的含量。,2,实验原理：,尿素在酸、碱、酶作用下（酸、碱需加热）能水解成氨和二氧化碳,新鲜大豆中含有较高活性的尿素酶，可以水解尿素生成NH3,CO(NH2)2 + H2O -,2NH3 + CO2,尿素养在尿素酶作用下，在中性或酸性环境下生成碳酸胺，在NaOH环境下生成Na2CO3和NH3、NH3与纳氏试剂作用，生成棕黄色碘化双汞胺,尿素酶 NaOH,CO(NH2)2 + H2O -,( NH4 )2CO3 -,NH3,NH3 + 纳氏试剂(HgI2.2KI) -,NH2.Hg2I3 (棕黄色),3,实验材料：,器材：,控温水浴锅（每个实验室3个），制冰机，电磁灶，不锈钢锅，白瓷板，试管、滴管、移液管（1-2ml）,试剂：蒸馏水，1%淀粉液，1%蔗糖液，0.1%尿素液，大豆尿素酶溶液，0.1%CuSO4，0.1%HgCl2，0.1%NaCl，1M NaOH，0.5M H2SO4，纳氏试剂，班氏试剂，各种pH缓冲液：5.0；6.8；8.0,4,酶活性的影响因素假设,1、酶的活性受pH的影响,2、酶的活性受底物特异性的影响,3、酶的活性受温度的影响,4、酶的活性受重金属离子的影响,5,下面就让我们进入,这次的酶的探索之旅吧,6,1、酶的活性受pH的影响,步骤,1、向四支10ml试管，分别标号1，2，3，4,2、将1%尿素液3ml分别倒入四支试管中,3、向前三支支试管中分别倒入1ml的pH为5.0，6.8，8.0的缓冲液，四号试管加入1ml的蒸馏水,4、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置3分钟,5、向四支试管中加入等量的纳氏试剂 2ml，摇匀。,6、观察并记录实验现象,7,实验记录,8,2、酶的活性受底物的特异性的影响,步骤,1、向四支10ml试管，分别标号1，2，3，4,2、向四支试管中分别加入3ml的蒸馏水，1%淀粉液，1%蔗糖液， 0.1%尿素液,3、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置3分钟,4、向四支试管中加入等量的纳氏试剂2ml，摇匀。,5、观察并记录实验现象,9,实验记录,10,3、酶的活性受温度的影响,步骤,1、向四支10ml试管，分别标号1，2，3，4,2、向四支试管中分别加入3ml0.1%尿素液,3、将四支试管分别置于0C，30C，100C，室温的水浴中预温10分钟,3、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置3分钟,4、向四支试管中加入等量的纳氏试剂2ml，摇匀。,5、观察并记录实验现象,11,实验记录,12,4、酶的活性受重金属离子的影响,步骤,1、向六支10ml试管，分别标号1，2，3，4，5，6,2、向六支试管中分别加入3ml0.1%尿素液,3、将六支试管分别加入0.1%CuSO4 0.1%HgCl2 0.1%NaCl 1M NaOH 0.5M H2SO4，蒸馏水各2ml,3、向六支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置3分钟,4、向六支试管中加入等量的纳氏试剂2ml，摇匀。,5、观察并记录实验现象,13,实验记录,14,谢谢,15,