9、DNA的定量测定-二

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验十一 DNA的定量测定-二苯胺法,一、原理,DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成-羟基-a-酮基戊糖，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物，在一定波长范围内，化合物蓝色的深浅与DNA的含量成比例关系，可用比色法测定。,1,二、实验仪器,试管,移液管,7220分光光度计,2,三、实验试剂,1、DNA标准液（200ug/ml）：称取10mgDNA钠盐溶于5mol/l氢氧化钠溶液并稀释至100ml。,2、二苯胺试剂：,A液：称取纯二苯胺1.50g，溶于100ml冰乙酸，再加浓硫酸1.5ml。贮于棕色瓶中。,B液：称取1.6ml乙醛溶于100ml蒸馏水中，临用时配制,临用时，将20mlA液和0.1mlB液混合即可,3,四、试验步骤,1.标准曲线的绘制,取干燥的试管6支，编号，按下表加入试剂：,加毕，混匀，在,60,度水浴中保温,45,分钟，冷却后，在,595nm,波长下测吸光度，以吸光度对,DNA,浓度作标准曲线。,4,2.样品测定,吸取DNA样液1ml，加入二苯胺溶液2.0ml, 加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，根据所测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量。,五、结果计算,按下式计算样品中DNA百分含量：,DNA%=样液中测的DNA量/样液中所含样品量*100%,5,