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单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,动物传染病学教研室,动物传染病学,流 感,(,Influenza virus, IV),一、概述,流感(流行性感冒）：,是由流行性感冒病毒（流感病毒）引起的急性高度接触性传染病，传播迅速，呈流行性或大流行性。,在人和哺乳动物：发热、有急性呼吸道症状；,在禽类：急性败血症、呼吸道感染等多种临症表现。,3次人类流感大流行：,19181919：西班牙流感（2100万人死亡）,19571958：亚洲流感,19681969：香港流感,人类流感大流行前后均有猪流感的流行,Influenza in the print media,“Spanish Flu” A(H1N1):,1918 -19,Approximately 20 million people died worldwide, and 600,000 in US,2001 Trish,Perl,. All Rights Reserved.,JHH Healthcare,Epidemiology,and Infection Control.,The “ Spanish Flu,1918,“,Asian Flu” A(H2N2):,1957 - 58,More than a million people died worldwide and about 70,000 in US,2001 Trish,Perl,. All Rights Reserved.,JHH Healthcare,Epidemiology,and Infection Control.,流行性感冒的病原体为流感病毒,(influenza virus),，,分为,A,、,B,、,C,三个型，属于正粘病毒科。,A,型流感病毒可自然感染猪、马、禽类和人，貂、海豹、鲸等动物也可感染：,常突然发生，迅速传播，呈流行性或大流行性。,B,型流感病毒在自然情况下仅感染人，一般呈散发。,C,型流感病毒常感染儿童，多呈散发。,动物的种间传播是,流感,流行病学的一个重要问题。,病毒蛋白质,病毒粒子的主要蛋白成分：,血凝素（,HA）,神经氨酸（,NA）,核蛋白（,NP）,基质蛋白(,M1,M2),聚合酶 （,PB1、PB2、PA）,非结构蛋白（,NS1、NS2）,抗原结构：,表面抗原（纤突）：,血凝素（,HA)：,使病毒吸附与易感细胞的表面受体，诱导病毒囊膜核细胞膜融合,神经氨酸酶（,NA)：,水解细胞表面受体特异性神经氨酸,A,型亚型多,易变异,：,HA(H,1,-H,16,),NA（N,1,-N,9,),B,型不易变异，无亚型,C,型囊膜内只有一种糖蛋白（,HEF),内部抗原：,核蛋白（,NP)、,基质蛋白（,M1、M2),二、禽流感,（,Avian,Influenza,，,AI,）,香港1997年流感事件中，有18人感染禽流感，6人死亡，严重制约了香港的经济发展，影响了社会稳定，引起了世界恐慌。,为扑杀150万只家禽， 损失超过10亿港币。,越南、泰国出现了,H5N1,亚型禽流感病毒感染人的病例。,（一）、概述,1,、病的特征,（,1,）,AI,是由,A,型流感病毒,（,AIV,）,中,任何一血清型毒株引起的各种家禽及野生禽类感染或发生疫病综合症的传染性疾病。,（,2,）临诊特征：,呼吸道症状、,精神萎顿、,食欲减退。,种鸡的产蛋量和孵化率严重下降,（,3,）有多种流行形式：,有时呈致死率极低的呼吸道感染，,有的仅引起短期的产蛋量下降，,有的引起额窦炎、腹泻、肿头和冠发绀等症状。,死亡率,1%,至,100%,1878,年，意大利的鸡群中暴发一种严重疾病。当时称,鸡瘟,。,1901,年，有人认为本病由“可过滤”病毒引起。,1955,年，证实鸡瘟病毒是,A,型流感病毒。,为与新城疫病毒相区别,由,A,型流感病毒引起的鸡瘟就称为,真性鸡瘟,或,欧洲鸡瘟,。,新城疫称为,亚洲鸡瘟、假性鸡瘟或伪鸡瘟。,2、别名：,1,、,AIV,属于正粘病毒科,(,Orthomyxoviridae,),流感病毒属的一个成员。,（二）、病原,2,、核酸类型为负股单链,RNA，,由8,个片断组成，共编码,8,种结构蛋白和,2,种非结构蛋白。,血凝素（,HA）,神经氨酸（,NA）,核蛋白（,NP）,基质蛋白（,M1、M2）,聚合酶（,PB1、PB2、A）,非结构蛋白（,NS1、NS2）,3,、病毒粒子直径,80-120,nm。,呈球形、杆状和长丝状。其表面有一层由双层脂质构成的囊膜，囊膜镶嵌着,HA 、NA。,4,、,基因变异,决定病毒的抗原性和致病性。,变异率最高的是,HA,，,其次是,NA,。,这两种抗原变异可独立发生，有时只涉及一个（,HA,或,NA,），,有时两个同时发生变异。,抗原变异可分为,抗原漂变,和,抗原漂移,病毒的变异,抗原的漂变,（,Antigenic shift）,2,个或2个以上不同亚型的病毒感染1个细胞，病毒基因可在细胞内重排，而导致,HA,或,NA,抗原的突变。,突变幅度大，产生新的亚型。导致大流性,抗原漂移（,Antigenic Drift）,H 、N,蛋白的基因组自发的点突变引起小幅度的抗原性变异。,常引起地方性流行。,流感病毒基因重排示意图,抗原性重组株,宿主细胞,亲代株病毒,H,3,N,2,H,1,N,1,混合感染,H,3,N,2,重组子代病毒,H,1,N,1,H,1,N,2,H,3,N,1,通过基因重排有可能产生高致病力的毒株。,来自不同宿主的病毒也易发生基因置换，病毒的这一特性，加之易感动物的复杂、多种，使本病的防制更加困难。,（三）、流行病学特点,1.,易感动物：,多种家禽和野禽。,2.,传染来源：,病禽及康复后带毒禽。,3.,传染途径,：病毒主要从呼吸道、眼结膜和粪便排出，污染饲料、饮水、器具等，同时也可以通过人和昆虫、共用设备和市场服务而传染。,4.,传播途径,：水平传播，尚无足够的证据表明本病可垂直传播。,动物的种间传播是由于病毒发生了重组所致。,（四）、病状及病理变化,潜伏期： 一般为,4-5,天，潜伏期的长短依赖于感染病毒的数量和毒力强弱、被感染的禽种以及感染途径不同而有较大的差异。,1,急性型 （也称高致病性禽流感）,病状特点：,在本病发生初期，突然爆发，传播迅速，在未出现前驱病症时而发病死亡。,病程稍长的病例出现：,精神萎顿、食欲消失、羽毛松乱、,体温升高、呼吸困难、深度昏睡。,病变特点：病程稍长的病例，如下特点：,（,1,）消化道病变明显，如口腔粘膜、腺胃、肌胃角质膜下及十二指肠粘膜,出血,，尤其是与肌胃连接部的腺胃粘膜表面有,出血点,。,（2,）腿部、胸部肌肉、胸骨内面及腹部脂肪有散在性出血点。少数病例呈现脱水,干脚,脚鳞片下出血,。,（3,）头、颈及胸部皮下组织水肿。,正常鸡,(左),和上海毒株,(右),对比。病理变化：脚掌,胫部鳞片出血,呈紫黑色,冠和肉髯发黑或高度水肿,头部和眼睑水肿、流泪,鸡冠,肉髯出血,呈紫黑色,（4,）心包膜增厚、心包积液，心外膜有点状出血或出现灰黄色坏死性病灶，心肌弛缓柔软。,（,5,）肝肿大出血，肺出血性坏死，胰脏有点状坏死及出血。,肝脏肿胀出血,冠,状,脂肪有点状出血,花斑肾,肺脏严重充血出血,呈黑褐色,脑部严重充血,出血,脑部出血,喉头,气管出血,十二指肠出血,盲肠出血,（6,）卵泡及输卵管充血或出血，卵黄变稀，易破裂。以至病死的母鸡腹腔有大量新鲜蛋黄。引起卵黄性腹膜炎。,2,呼吸道型,病状特点：,呼吸道症状：咳嗽、打喷嚏、呼吸有咯咯音。鼻窦肿胀，流鼻液，喉头出血，气管出血，有多量黏液。,有些病例，水样粪便，呈灰绿色。,患禽一侧或两侧眼睛发炎，流泪。,发病率高，死亡率低，如果有其他并发症时，死亡率增高。,蛋鸡患病后产蛋量、孵化率突然下降。,病变特点,：,结膜炎、鼻窦炎、气管炎。,滤泡变形、输卵管退化。,严重的病例可见气囊及鼻窦内有干酷样渗出物。,（五）、诊 断,1,病毒分离：,取病料制成匀浆，用灭菌生理盐水作,5-10,倍稀释，,加青链霉素各,2000,单位，,30 1h,或,4 6h,，,3000rpm30,分钟，取上清接种,10-12,日龄,SPF,鸡胚,收获培养,24,、,48,、,72h,鸡胚尿囊液在,SPF,胚上继代,2-3,代。,2,病毒鉴定：,用,HA,试验测定鸡胚成分中的血凝活性。,排除,NDV,的存在：用新城疫抗血清与分离毒株进行,HI,试验。,用,AGP,抗原与阳性血清进行琼扩试验，在,48h,内两者之间产生白色沉淀线。,电镜观察。,动物回归试验,3,、血清学诊断：,国际通用的两种主要的标准方法：,（1）,AGP:,利用,AIV,的,NP Ag,检查,Ab,，,简便快捷、特异性强，不受病毒亚型的限制，但灵敏性较低。,（2）,HI:,主要用来鉴定,AIV,的,HA,亚型，采集急性期和康复期（发病后,2-4,周）的禽血清作比较很重要。,禽流感系列快速检测方法的建立与试剂盒研制,抗原检测试剂盒,:,NP-ELISA,（,通用型）,NP-LAT,（,通用型）,HA-LAT,（,H5,亚型）,H5,试纸条 （,H5,亚型）,HA-ELISA,（,H5,亚型）,阴性对照,阳性对照,阴性样品,阳性样品,阳性结果,阴性结果,禽流感病毒,H5,亚型快速检测试纸条成品,1:16 稀释度的检测结果,1:32 稀释度的检测结果,与韩国试纸条敏感性的比较,检测带（阳性）,1：128,1：256,1：512,阴性对照,与韩国试纸条敏感性的比较,抗体检测试剂盒,H5 -LAT,（,H5,亚型）,NS1-ELISA,（,鉴别）,NP-ELISA,（,通用型）,H5 - HA-ELISA,H9- HA-ELISA,试剂盒成品,特异性为,93.1%.,敏感性为94.6%.,批内重复的吸收变异系数在3.28%-8.54%之间.,批间重复的吸收变异系数在3.63%-9.49%之间.,（六）、鉴别诊断,1,HI,试验排除,NDV,2,急性暴发时，死亡急剧、潜伏期短、患鸡深度昏睡，约,80%,病鸡头部或颈部出现渗出性肿胀。,3,禽流感能凝集马、驴、骡、绵羊、山羊的红细胞,，而,NDV,与这些动物的红细胞不发生反应。,（七）、防 制,1,、当由禽流感高致病（,HPAI,）,毒株引起暴发时，禁止进行免疫接种，采取扑灭的程序（检疫、屠杀、处理和净化）。,在,HPAI,疫区的防疫措施：,（,1,）控制禽类及其产品贸易，屠宰受感染的禽 ，,（,2,）屠宰后的禽舍进行彻底清扫、消毒处理。 （,3,）空栏，经过,3-4,周间隔期再重新饲养。 （,4,）控制人员流动，实施严格的卫生安全措施。,2,、中等毒力以下,的,AI,鸡场，在划定地区，在一定范围内，可用当地流行株制成灭活油乳剂单价苗或多价苗如：,H5+H7+H9,，,减少鸡群的发病率和死亡率，保护母鸡的产蛋量。,3、免疫程序,：,10-12,日龄，首免，可接种,AI,油乳剂灭活苗 。,产蛋前三周后备母鸡，可用加倍量的,AI,油乳剂苗进行二免。整个产蛋期均可获得保护。,发展基因工程疫苗,H,5,亚型基因重组杆状病毒昆虫细胞表达亚单位疫苗。,H,5,、,H,7,亚型,AIV HA,基因的重组禽痘病毒，可诱导鸡产生有效的免疫保护反应。,AI,灭活苗在控制疫情的同时， 增加了疫病监测中,区分疫苗免疫与自然感染的难度。,三、猪流感（,Swine Influenza,）,猪流感感冒（,Swine Influenza ,SI,）,主要引起猪发生急性、高度接触性、群发性呼吸道疾病，临床的突发、高热、咳嗽、呼吸困难、反复发作、衰竭为特征,可引起妊娠母猪流产或产弱仔。,该病一旦发生，传播迅速可直接引起患病猪死亡，各年龄性别和品种猪均能感染。,发病率、肉料比降低，对猪群健康状态和质量影响很大。,（一）概述,正粘病毒科-流感病毒属，,A,型流感病毒。,核酸类型为负股单链,RNA,8,个独立片断组成，编码8种结构蛋白和2种非结构蛋白,其表面有一层由双层脂质构成的囊膜,(二)、猪流感病原,病毒粒子直径80-120,nm。,多形性呈球形、杆状和长丝状。,病毒的形态及结构,遗传变异是流感病毒的重要特点,抗原性变异是,A,型流感病毒常见的一种自然变异，决定病毒的抗原性和致病性。,变异率最高的是,HA,，,其次是,NA,。,这两种抗原变异可独立发生，有时只涉及一个（,HA,或,NA,），,有时两个同时发生变异。,抗原漂移,（,Antigenic shift),抗原漂变（,Antigenic drift,）。,（,三）、临床症状及病理变化,病猪突然发病，体温升高到,42,0,C,；,精神不振，食欲减退，饮欲增加。,常卧地不起，打堆，不愿走动；,流清水或浓稠鼻涕，眼分泌物增多，眼结膜潮红；,阵发性咳嗽，痉挛性呼吸，有的呼吸极度困难；,可表现肌肉和关节有痛感，触摸时敏感。,母猪流感,怀孕期间感染，可引起流产，产死胎和早产；,产下后2,5天发病严重，有些在哺乳及断奶前后死亡。,流产 (5-10% 2-3 周 ),产弱仔,主要在呼吸器官：,咽喉、气管、支气管、细支气管充血、水肿，并含有大量白色泡沫状的粘液，有时混有血液；,颈淋巴结和纵隔淋巴结肿大，充血和水肿。,病变部主要集中在心叶，尖叶和中间叶，而膈叶没有明显的病变,肺病变部呈红色如鲜牛肉状，界限分明，周围组织有气肿，呈苍白色。常为不规则对称。,攻毒猪只的肺部有明显的病变，其颜色为鲜红色，与周围组织界限分明,气管内有白色泡沫,从腹面可以看到肺部明显的病变,慢性病例，表现为胃肠炎。胃外壁有出血点，胃内大面积的出血；肠道出血，十二指肠出血。,四、诊断技术,1,、病毒分离和鉴定,鸡胚和,MDCK,细胞进行培养,血凝抑制试验和神经氨酸酶,抑制试验鉴定病毒,采取发热初期的鼻咽分泌物，,接种于,911,日龄鸡胚或犬肾细胞上,37,0,C,培养,35,天，取羊水或细胞培养物作,HA,HI,以确定其亚型,1:10,1:20,1:40,1:80,1:160,1:320,1:640,RBC,alone,RBC,&,virus,Serum dilution,2,、血凝抑制试验：一般采取患猪急性期和恢复期（相隔,1021,天）的双份血清样品,3,、酶联免疫吸附试验：方便敏感性好，特异性高，检测抗原和抗体。猪免疫后,7,天可检测抗体。,建立的,ELISA,的诊断方法,4、免疫组织化学试验：检测新鲜病料，而且可以检测固定良好没有丧失组织完整性的病料。,TUNEL,染色,肺部,Immunofluorescence,4,、荧光抗体试验：鉴别被病毒感染的细胞,M：DNA MARKER,1：,上海毒株,2,：福建毒株,3,：湖北毒株,4，5,：阴性对照,RT-PCR,的模板为鼻拭子,5,、快速诊断,RT-PCR：,6,、动物试验：,病料常规处理后，,每只小白鼠或家兔颅内接种,0.10.5,毫升， 或取,0.52,毫升腹腔或静脉注射。,颅内接种的动物在,2472,小时后出现强直性或阵发性惊厥、痉挛或者死亡。,（五）、,防 制,1,、药物治疗,饮水中加入金刚烷，加入止咳化痰的药物，可以减轻患猪的症状；,肌肉注射镇痛药物，如复方氨基比林或安乃近；,防止并发或继发感染患猪还需注射抗菌药，如丁胺卡那霉素或头孢拉啶肌肉注射。,清热解毒，调解肠胃，保持畜舍清洁干燥，避免应激刺激。,平时饲料和饮水中加入药物，也可以起到预防的作用。,2,、疫苗预防,：,灭活苗,进行两次免疫，间隔一个月。一般为断奶时首免。,自家疫苗：,亚型很多，交叉保护力很弱，当地猪流感分离株或当地血清型的毒株制苗，效果好。,重组株和人工活载体疫苗：,转基因技术研制猪流感病毒重组株和人工活载体疫苗。,PCR,筛选,重组中间转移质粒,构建,IBRS-2,细胞,检测,FITC,Western-blot,TK,-,/,gE,-,/ /,gI,-,/,LacZ,+,转染,转移载体,pIECMV,AIV,基因克隆,重组病毒,获得,禽流感病毒免疫原性基因重组伪狂犬病毒毒株的构建,3,、综合防制,规范的饲养管理和严格的消毒措施。,保护猪拦清洁及干燥、防寒和保暖。,定期消毒和驱虫,定期进行血清学监测，,加强监测猪流感。,全进全出,唯一的能在短时间内引起世界范围大爆发的传染病,流感的每次大流行都给人类带来了巨大的灾难，,20,世纪人类爆发四次流感大流行。,（六）、猪流感的,公共卫生意义,1,、猪流感的历史与人流感的历史紧密相连,1918,年,:,猪流感在美国中西部第一次被清楚认识。,1930,年：肖普（,Shope,),第一次分离到猪流感病毒， 古典猪,H1N1,。,现在的研究表明：,H1N1,和,H3N2,猪流感病毒与同年引起人流感大流行的,H1N1,和,H3N2,人流感病毒遗传关系十分密切。后经血清学追朔研究认为，西班牙流感流行病原为猪型（,H1N1,）,流感病毒。,1976,年，美国一名新兵感染猪源的,H1N1,病毒而死于肺炎，至少有,500,人受到感染,1980,年美国从一个在猪展览会上工作的年轻人分离到,1,株,H1N1,1984,年美国从猪分离到,1,株,H1N1,病毒，这猪是在一儿童的致死性感染以后发病的。,1988,年，从一名死于原发性肺炎妇女的体内分离道一株猪流感病毒；,1994,年，荷兰的一名男婴和女婴身上分离的两株猪流感病毒；,有一,32,岁的孕妇，在参观家畜展览会后患原发性病毒性肺炎死亡，在她身上分离到,1,株猪,H1N1,病毒 。,有一,27,岁饲养员死于急性呼吸窘迫综合征，在他身上分离到,H1N1,病毒。,新近（,1997,）有报道说，进行猪实验感染的两个工作人员，都因感染猪,H1N1,而发病。,猪流感病毒可感染人、禽；禽流感病毒可感染人、猪；人流感病毒可感染猪，,猪能作为禽流感在哺乳动物中增殖的适应贮主和作为“,混和器,”,在猪体中人与禽的流感病毒可经基因重组以产生导致新的大流行病的人流感病毒。,H3N2,H1N1,+,Typically, an avian flu virus first infects pigs, then humans, but the Hong Kong strain may have jumped directly from birds to people.,2,猪流感、禽流感和人流感病毒均能感染猪，猪成为病毒重排的中间宿主，共存于其体内的不同来源毒株势必会通过毒株间的基因片段的重新组合产生感染人的新亚型流感病毒，而且可以跨越种间障碍直接感染人。,3,猪是流感病毒的最佳实验动物,它能将,H1N1,等流感病毒传播给人或鸟类,很多人源甲型流感病毒株均可使猪人工感染，并且猪与人类有很多相近的生理生化指标，,因而猪堪作研究人流感的动物模型。,谢谢！,
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