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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,变酸？,巴斯德,法国，微生物学家,失败的原因：发酵物中混入了杂菌,到目前为止， 几十项诺贝尔生理或医学奖，化学奖 都与微生物学有关,微生物的类群,原生生物：,原核生物:,真菌:,病毒,如酵母菌,单细胞的动植物,如草履虫、单细胞藻类等,无细胞结构：,真核细胞,细菌、蓝藻,原核细胞,有细胞结构,课题1 微生物的实验室培养,专题2 微生物的培养与应用,1.提供营养和条件 2.防止污染,一.培养基：,微生物生存的环境和营养物质,1.基本成分：,思考：微生物“吃”什么？,碳源、氮源、水、无机盐,碳源,无机碳源：,有机碳源：,CO,2,、CO,3,2,-,、HCO,3,-,牛肉膏、蛋白胨等,自养微生物,异养微生物,氮源,无机氮源：,有机氮源：,NH,4,、NO,3,-,牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等,注：含,C、H、O、N,的,有机物,是,异,养型微生物的：,碳源,、,氮源,、,能源。,一.培养基：,微生物生存的环境和营养物质,2.特殊营养：,维生素（如乳酸杆菌）、碱基等,（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）,3.pH、氧气的需求：,霉菌（,pH调至酸性）,细菌（,pH调至中性或微碱性）,厌氧生物需提供无氧条件。,一.培养基：,微生物生存的环境和营养物质,4.培养基种类,固体培养基,液体培养基,有,无,凝固剂琼脂,分离 鉴定,工业 生产,化学成分：,物理性质：,天然培养基 合成培养基,划分标准,培养基种类,特点,用途,物理性质,化学成分,天然培养基,合成培养基,用途,鉴别培养基,培养基的种类,不加凝固剂,加凝固剂，如琼脂,工业生产,观察微生物的运动、分类鉴定,微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种,含化学成分不明确的天然物质,工业生产,培养基成分明确,分类、鉴定,在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长,培养、分离出特定微生物,在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物,鉴别不同种类微生物,液体培养基,半固体体培养基,固体体培养基,选择培养基,液体培养基：,表面生长,均匀混浊生长,沉淀生长,back,半固体培养基：,(是否运动),无动力,有动力(弥散),固体培养基：菌落,分离导入了目的基因的受体细胞,几种选择培养基,加入青霉素的培养基,分离酵母菌、霉菌等真菌,不加氮源的无氮培养基,分离固氮菌,不加含碳有机物的无碳培养基,分离自养型微生物,加入青霉素等抗生素的培养基,back,牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,。,1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方,H,2,O 定容至1000ml,NaCl 5g,蛋白胨 10g,牛肉膏 5g,琼脂20.0g,5. 配制原则,目的明确：,营养全面、浓度适宜、比例恰当,适宜的pH值：,有机碳源,异养型：,根据微生物的,种类、培养目的,选择原料,自养型：,不加碳源,加入缓冲剂,细菌偏碱，真菌偏酸,（CO,2,碳源）,生产,科研,耐高温需保持干燥的 物品，160170 12小时,接种环、接种针等 金属用具,7075、30min,80、15min,100、56min,消毒,灭菌,定义,方法,较为,温和,理化方法，,杀死,部分有害菌体,（,不,包括芽孢、孢子）,强烈,的理化方法，,杀死,所有微生物,（包括,芽孢、孢子,）,煮沸消毒法,巴氏消毒法,化学药剂,紫外线,灼烧灭菌,干热灭菌,酒精、氯气、石炭酸等,高压蒸汽灭菌,培养基，,100KPa、,121、1530min,二.无菌技术：,防止外来杂菌的污染,1.消毒与灭菌：,请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。,（1） 培养细菌用的培养基与培养皿,（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管,（3） 实验操作者的双手,思考,2.无菌范围：,实验操作空间消毒,操作者的手、衣着消毒,实验用具灭菌,实验操作过程,二.无菌技术：,防止外来杂菌的污染,1.消毒与灭菌：,酒精灯旁操作,超净工作台,单个,或少数菌体,2.特征：,大小、形状、光泽度、,颜色、透明度等。,3.功能：,1.定义：,三.菌落,鉴定菌种,的重要依据,固体,培养基上,大量繁殖,子细胞群体,1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方,H,2,O 定容至1000ml,NaCl 5g,蛋白胨 10g,牛肉膏 5g,琼脂20.0g,四.大肠杆菌的纯化培养：,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,1.计算：,培养基用量,依配方计算各成分的用量,2.称量：,3.溶化：,牛肉膏黏稠，用称量纸称取,牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖,牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解,取纸,蛋白胨、NaCl,琼脂,补水定容,4.调pH、分装、封口：,5.灭菌：,6.倒平板：,培养基、培养皿,分散成单个细胞,形成单个菌落,倒平板,约50,防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染,灼烧灭菌，,防止瓶口的微生物污染培养基,二.大肠杆菌的纯化培养：,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,纯化大肠杆菌：,平板划线法：,菌种,划3个平板,1个不划线,1.接种：,接种环,防止划破培养基,（重复实验）,（空白对照）,问题讨论,为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物,杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。,及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,6支试管，分别加入9ml无菌水,1ml,10,1,1ml,10,2,1ml,10,3,1ml,10,4,1ml,10,5,1ml,10,6,稀释涂布平板法：,a.梯度稀释菌液：,菌液,微量 移液器,稀释涂布平板法：,a.梯度稀释菌液：,b.涂布平板：,不超过0.1ml,各梯度分别涂布3个平板,1个不涂布作空白对照,滴,灼,试,涂,稀释10,3,倍,稀释10,4,倍,稀释10,5,倍,平板划线法：,二.大肠杆菌的纯化培养：,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,纯化大肠杆菌：,1.接种：,稀释涂布平板法：,2.培养：,将,接种后,的培养基和一个,未接种,的培养基,放入37恒温箱中培养12h24h后，,观察并记录,三.菌种的保藏：,1.临时保藏：,试管固体斜面培养基上,4,2.长期保存：,菌种易被污染、变异,甘油管藏,1ml甘油1ml菌液,20,稀释涂布平板法：,a.梯度稀释菌液：,b.涂布平板：,滴稀释菌液,不超过0.1ml,各梯度分别涂布3个平板,1个不涂布作空白对照,稀释10,3,倍,稀释10,4,倍,稀释10,5,倍,
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