资源描述
,Click to edit Master title style,46,46,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,谢谢,!,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,维生素,B,12,注射液含量测定,1,一、 任务依据,【,中国药典,】,2015,版 二部,P1236,维生素B,12,注射液,本品为维生素B,12,的灭菌水溶液。含维生素B,12,（C,63,H,88,CoN,14,O,14,P）应为标示量的90.0%,110.0%,【含量测定】避光操作。精密量取本品适量，用水定量稀释成每1mL中约含维生素B,12,25g的溶液，照紫外-可见分光光度法（,通则,0401），在361nm的波长处测定吸光度，按C,63,H,88,CoN,14,O,14,P的吸收系数（ ）为207计算，即得。,二、 任务分解,1. 实验原理,紫外-可见分光光度计,紫外-可见分光光度法是通过被测物质在紫外光区或可见光区的特定波长处或一定波长范围内的的吸光度，对该物质进行定性和定量分析的光学分析方法。,定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测出吸光度，然后用对照品或吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。,二、 任务分解,2,.计算,计算稀释倍数,根据维生素B,12,注射液【含量测定】中内容要求描述，“用水定量稀释成,每1mL中约含维生素B,12,25g,的溶液”。,【规格】（1）1ml：0.05mg （2）1ml：0.1mg,（3）1ml：0.25mg （4）1ml：0.5mg,（5）1ml：1mg （6）2ml：0.5mg,以下均以规格,2ml,：,0.5mg,为例,样品溶液：实际使用的维生素,B,12,注射液,供试品溶液：按要求配制的每,1mL,中约含维生素,B,12,25,g,的溶液。,二、 任务分解,3,.,制定计划,(1)填写所需溶液、药品及仪器,药品名称,规格,数量,用途及可用量,维生素,B,12,注射液,2ml,：,0.5mg/,2,盒,2,盒,药品，,1,人,水,纯化水,500ml,，,1,人,仪器清洗、溶剂,表1 维生素B,12,注射液含量测定所需药品,二、 任务分解,3,.,制定计划,(1)填写所需溶液、药品及仪器,表2 维生素B,12,注射液含量测定所需仪器,仪器名称,规格型号,数量,用途,紫外,-,可见分光光度计,北京通用,T6,1,台,含量测定,石英比色皿,石英,1,套,含量测定,移液管,10ml,1,支,溶液配制,容量瓶,100ml,2,支,溶液配制,洗瓶,500ml,1,支,洗涤、稀释,小烧杯,100ml,1,个,稀释,胶头滴管,2ml,1,支,定容,大烧杯,500ml,1,个,废液杯,洗耳球,塑料,1,个,移液,二、 任务分解,二、 任务分解,3,.,制定计划,(3),操作步骤,测定步骤,操作内容,数据记录,1.,仪器检定,1.,杂散光的检查,2.,波长准确度、吸光度准确度检定。,3.,杂散光的检查,定期检查,2.,配制供试品溶液,精密量取一定体积定量稀释成规定浓度的溶液。,供试品的名称、批号、生产厂家。,3.,比色皿配对,使用的石英吸收池必须洁净。当吸收池中装入同一溶剂，在规定波长测定各吸收池的透光率，如透光率相差在,0.3%,以下者可配对使用，否则必须加以校正。,二、 任务分解,3,.,制定计划,(3),操作步骤,测定步骤,操作内容,数据记录,4.,溶剂空白吸收,将溶剂置,1cm,石英吸收池中，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸收光度,溶剂空白吸收,=,5.,确定测定波长,除另有规定外，在规定的吸收峰,2nm,处，再测几点的吸光度，吸光度最大的波长应在规定的波长,2nm,以内，并以吸光度最大的波长作为测定波长。,测定波长,= nm,6.,吸光度测定,1.,将参比液、测定液装于吸收池中。,2.,以参比液为空白，测定吸光度，记录。,A1=,A2=,7.,记录与计算,1.,计算供试品的百分含量,%,2.,计算平均百分含量,%,标示量,%=,平均百分含量,%,8.,结果与判定,1.,将测得的含量与药典规定值比较，得出结论。,2.,相对偏差均应在,0.5%,以内。,相对偏差,=,结论：,三、实验实施,（一）.,使用前仪器的校正和检定,1.,波长准确度,1.1,波长准确度的允差范围,紫外,-,可见分光光度计波长准确度允许误差，紫外区为,1nm,，,500nm,处,2nm,。,P55-56,（通则,0401,）,三、实验实施,（一）.,使用前仪器的校正和检定,1.2,波长准确度检定方法,1.,用低压汞灯检定,2.,用仪器固有的氘灯检定,3.,用氧化钬玻璃检定,4.,用高氯酸钬溶液检定,P55-56,（通则,0401,）,三、实验实施,（一）.,使用前仪器的校正和检定,2.,吸光度准确度,精密称取在,120,干燥至恒重的基准重铬酸钾约,60mg,，置,1000ml,量瓶中，用,0.005mol/L,硫酸液溶解并稀释至,1000ml,，用配对的,1cm,石英池，以,0.005mol/L,硫酸液为空白，在,235,、,257,、,313,、,350nm,分别测定吸光度，然后换算成,，测得值应符合表,1,中规定的允差范围。,P56,（通则,0401,）,三、实验实施,（一）.,使用前仪器的校正和检定,表,1,分光光度法允差范围,波长,吸收强度,吸收系数,允差范围,235,最小,124.5,123.0,126.0,257,最大,144.0,142.8,146.2,313,最小,48.6,47.0,50.3,350,最大,106.6,105.5,108.5,P56,（通则,0401,）,三、实验实施,（一）.,使用前仪器的校正和检定,3 .,杂散光的检查,可按表,2,所列的试剂和浓度，配制成水溶液，置,1cm,石英池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表,2,中规定。,表,2,杂散光的检查及限度,试剂,浓度（,%,，,g/ml,）,测定用波长（,nm,）,透光率（,%,）,碘化钠,1.00,220,0.8,亚硝酸钠,5.00,340,0.8,P56,（通则,0401,）,三、实验实施,（二）. 供试品溶液的配制,维生素 B,12,注射液,10.00ml 100ml,平行配制2份,水,1.,移液管使用,三、实验实施,三、实验实施,1.,移液管使用,移液管、刻度吸管 移液管的的拿持 润洗,三、实验实施,1.,移液管使用,吸液 调节液面 放出液体,配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时取容积一般不少于,5ml,。含量测定时供试品应称取,2,份，如为对照品比较法，对照品一般也应称取,2,份。吸收系数检查也应称取供试品,2,份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在,0.5%,以内。作鉴别或检查可取样品,1,份。,三、实验实施,（二）. 供试品溶液的配制,P57-58,2.,容量瓶的使用,三、实验实施,用移液管移取一定体积的溶液于容量瓶中，加水至距标线约,1cm,处，等,1,2,分钟，使附在瓶颈内壁的溶液流下后，再用滴管滴加水至弯液面下缘与标线相切，然后盖上瓶塞，左手用食指按住塞子，其余手指拿住瓶颈标线以上部分，右手指尖托住瓶底，将容量瓶倒转，使气泡上升到顶，使瓶振荡，正立后再次倒转进行振荡，如此反复,15,20,次以上，使瓶内溶液混合均匀。,2.,容量瓶的使用,三、实验实施,容量瓶 容量瓶的检漏 转移 初混 定容,三、实验实施,（二）. 供试品溶液的配制,加水至距标线约,1cm,处，等,1,2,分钟，使附在瓶颈内壁的溶液流下后，再用滴管滴加水至弯液面下缘与标线相切,三、实验实施,（三）. 紫外-可见分光光度计的使用,1,.,实验仪器的准备,开机自检,三、实验实施,（三）. 紫外-可见分光光度计的使用,1,开机自检结束，按Enter 键进入仪器界面,按Start键进入测量界面,1,.,实验仪器的准备,进入测量界面,按GOTO 键输入测量波长，输入数字“,361,”按Enter 键确认输入,2,3,三、实验实施,（三）. 紫外-可见分光光度计的使用,2.,吸收池（比色皿）的配对检查,清洗,比色皿的操作,装液,擦拭,放置,三、实验实施,（三）. 紫外-可见分光光度计的使用,2.吸收池（比色皿）的配对检查,取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。装样品溶液的体积以池体积的,4/5,为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留溶剂,。,吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同。,三、实验实施,（三）. 紫外-可见分光光度计的使用,2. 吸收池（比色皿）的配对检查,比色皿的配对（测透光率）,进入透光率测量界面,透光率相差应在,0.3%,以下，否则必须加以校正值,三、实验实施,（三）. 紫外-可见分光光度计的使用,2. 吸收池（比色皿）的配对检查,使用后用溶剂及水冲洗干净，晾干，防尘保存，吸收池如污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸（,3,：,1V/V,）混合液稍加浸泡后，洗净备用。如用铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。,P57,三、实验实施,（三）. 紫外-可见分光光度计的使用,3,. 溶剂空白吸收,对溶剂的要求,含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。例如甲醇、乙醇。另外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。因此，在检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即将溶剂置,1cm,石英吸收池中，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸收光度，溶剂和吸收池的吸光度应符合表,3,规定,。,P57,（通则,0401,）,三、实验实施,（三）. 紫外-可见分光光度计的使用,3,. 溶剂空白吸收,表,3,以空气为空白测定溶剂在不同波长处的吸光度的规定,波长范围（,nm,）,220,240 241,250 251,300 300,以上,吸光度 ,0.40,0.20,0.10,0.05,每次测定时应采用同一厂牌批号，混合均匀的同批溶剂。,P57,（通则,0401,）,三、实验实施,（三）. 紫外-可见分光光度计的使用,3,. 溶剂空白吸收,三、实验实施,（三）. 紫外-可见分光光度计的使用,3,. 溶剂空白吸收,三、实验实施,（三）. 紫外-可见分光光度计的使用,4,.确定测定波长,1,2,3,在给定波长,2nm,处测样品吸光度，选择实际最大吸收波长,测定波长是多少？,三、实验实施,（三）. 紫外-可见分光光度计的使用,4,.确定测定波长,测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰,2nm,处，再测几点的吸光度，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸光度最大的波长作为测定波长，除另有规定外吸光度最大波长应在该品种项下规定的波长加减,2nm,以内，否则应考虑试样的同一性、纯度以及仪器波长的准确度。,P58,（通则,0401,）,三、实验实施,（三）. 紫外-可见分光光度计的使用,5,. 供试品溶液的吸光度值的测定,三、实验实施,（三）. 紫外-可见分光光度计的使用,5,. 供试品溶液的吸光度值的测定,关于皿差问题：,由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数后再计算含量。,（通则,0401,）,三、实验实施,（三）. 紫外-可见分光光度计的使用,5,.供试品溶液的吸光度值的测定,供试品溶液的浓度，除各品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸光度以在,0.3,0.7,之间为宜，吸光度读书在此范围误差较小，并应结合所用仪器吸光度线性范围，配制合适的读数浓度,。,P58,（通则,0401,）,三、实验实施,（四）. 实验数据的记录与计算,1,. 公式,三、实验实施,（四）. 实验数据的记录与计算,2,.原始数据记录表,紫外可见分光光度法：,记录仪器型号，检查溶剂是否符合要求的数据，吸收池的配对情况，供试品与对照品的称量（平行试验各,2,份）及其溶解和稀释情况，核对供试品溶液的最大吸收峰波长是否正确，测定波长及其吸光度值（或附仪器自动打印记录），计算式及结果。必要时应记录仪器的波长校正情况。,检 品 名 称,检验日期,批 号,规 格,完成日期,生产单位或产地,包 装,检 验 者,供 样 单 位,有 效 期,核 对 者,检 验 项 目,检品数量,检品余量,检 验 依 据,紫外分光光度仪： 电子天平：,溶剂： 溶剂空白吸收：,供试品溶液的制备方法：,照紫外可见分光光度法，在,nm,的波长处测定吸光度,（标准规定检测波长：,nm,）。,W,样,（,V,样,）：,计算公式：,标准规定：,结论：,三、实验实施,（五）. 实验结果与检验报告,1,. 有效数字：与药典标准中规定限度的有效位数相一致,百分含量可以多保留一位，平均含量均保留位数应与标准规定一致。,2,.,数据有效性 精密度 相对偏差,SD0.5%,3,.结论：,平均含量,90.0%110.0%,符合规定,90.0% 或 110.0%,不符合规定,P58,P1236,P522,三、实验实施,（五）. 实验结果与检验报告,检品名称,检验日期,批号,规格,完成日期,生产单位或产地,包装,检验者,供样单位,有效期,核对者,检验依据,检品数量,检品余量,检验项目,标准规定,检验结果,【,含量测定,】,结论：,复核人： 检验人：,三、实验实施,（六）. 清场,清洗整理,关机,填写仪器使用记录,
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