免疫学实验之对流免疫电泳

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,免疫学实验,第二次实验,33 学号：1020550107,1,对流免疫电泳,实验内容,2,【原理】,对流免疫电泳（CIEP）： 基于抗体抗原的等电点彼此不通，在通电的琼脂凝胶中抗体向负极泳动，抗原向正极泳动。一般抗体（IgG）的等电点位pH59,血清蛋白抗原的等电点位pH45,所以在pH8.28.6的缓冲溶液中，抗体所带的负电荷较少，正电荷较多,同时还受电渗作用，向负极泳动；抗原带正电荷少负电荷多，分子也较小，电泳迁移快。在抗体和抗原的对向泳动时，两者相遇于最适比例处形成白色沉淀线，可肉眼观察得到结果，此结果为阳性结果。,电渗作用（电渗是电场中溶液对于固体的相对移动，琼脂是酸性物质，在碱性缓冲液中带负电，而与它接触的溶液带正电，因此液体向阴极移动，产生电渗）,3,【材料】,正常人血清,兔抗人血清，等电点：,8.0,0.05UpH8.6,巴比妥钠,盐酸缓冲液、生理盐水,1%,离子琼脂板用,0.05U,巴比妥钠,盐酸缓冲液配成,打孔器、图样板、毛细吸管,电泳仪，电泳槽,4,【步骤】,制离子琼脂板,先用生理盐水50ml加1.2g琼脂隔水煮沸融化，再加50mlpH8.60.05mol/L巴比妥缓冲液继续隔水煮沸至澄清，取融化的琼脂3.54ml，浇于载玻片上，待其冷却,加样,对应孔号加试剂,放入电泳槽,开启电泳仪,调整电压为30V,电流强度为68mA,通电1h,电泳完毕,取出琼脂板,观察实验结果,打孔,（孔径3mm,孔距3mm）,5,1,3,1,1,1,1,2,2,2,1号内加入抗人血清；2号加入人血清；3号加入生理盐水作对照,抗原,抗体,6,【注意事项】,1、 浇板时，琼脂面要铺平。,2、加样时不要起气泡，勿溢出琼脂孔。,3、抗原、抗体的量应相接近，如抗原量过多，可造成 假阴性结果，须通过稀释抗原加以解决。,4、电泳时电压不宜过高或过低，过高可能会将琼脂拉 断；过低时沉淀线出现时间会延长,7,