微生物的显微直接计数

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,*,实验四,微生物的显微直接计数,1,微生物的显微直接计数,目的要求,实验原理,实验材料,实验程序,思考题,2,目的要求,了解血球计数板的构造和使用方法。,学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。,3,实验原理,4,5,6,血球计数板,通常是一块特制的厚载玻片，载玻片上有四条槽而构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽而隔成两半，每个半边上面各刻有一个方格网，每个方格网共分九大格，其中间的一大格又称为计数室，微生物的计数就在此大格中进行。,7,常用的血球计数板的计数室有两种规格的刻度网格。一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，即为1625。另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格，即2516。但是不管计数室是那种规格，其计数室的小格数总是相同的，即162525l6400（小格）。,8,计算,每一个大方格边长为1毫米，则每一大方格面积为1平方毫米。盖上盖玻片后，载玻片计数室与盖玻片之间的高度为0.1毫米，所以每个计数室（大方格）的体积为0.1立方毫米。,在计数时，通常数五个中方格的总菌数，求得平均值。再乘上16或25就得一大方格中的总菌数。然后再换算成1毫升菌液中的总菌数。（1毫升1立方厘米1,000立方毫米）,9,彼得罗夫-霍瑟（Petroff Hausser）细菌计数板,两种计数板的原理和部件相同。只是细菌计数板较薄，可以用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。,10,实验材料,酵母菌悬液,显微镜，血球计数板。,盖玻片，无菌滴管，吸水纸，擦镜纸，香柏油、镜头洗液。,11,实验程序,计数步骤：,1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。,2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。,3. 静置5分钟后，将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数板的大方格网位置。寻找时光圈要缩小，光线要偏暗些，并将计数室移至视野中央。,12,4. 在高倍镜下计数：随机地计数五个中格内的菌数，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每毫升菌液中的含菌数量。由于菌体细胞在血球计数板上处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，故观察时必须不断调节微调节器，方能数到全部菌体，以免遗漏。,5. 计算方法：酵母菌细胞数毫升=（X1+X2+X3+X4+X5）/5*25（或16）101000稀释倍数,13,6. 注意事项。计数时，为避免重复或遗漏计数，凡是遇到压在方格线上的菌体，一般以压在底线和右侧线上的菌体计入本格内，遇到有芽体的酵母时，如果芽体和母体同等大时，就按两个酵母菌体计数。,7. 计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净并放回盒。,14,思考题,为什么计数室内不能有气泡？试分析产生气泡的可能原因是什么？,根据你实验的体会，说明血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？,15,Thank You,16,