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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,弧菌和弯曲菌,1,第一部分 弧 菌,2,概 述,弧菌科（,Vibrionaseae,）包括一群氧化酶阳性、具有端极鞭毛、动力阳性的细菌，有4个菌属，其中，弧菌属是一群氧化酶阳性，发酵葡萄糖，对弧菌抑制剂O/129（二氨基二异丙基喋啶）敏感的细菌。,弧菌属(Vibrio)广泛分布于自然界，尤以水中为多，有100多种。主要致病菌为霍乱弧菌和副溶血弧菌（致病性嗜盐菌）。前者引起霍乱；后者引起食物中毒。,3,霍 乱 弧 菌,霍乱弧菌（V.cholera）是人类霍乱的病原体，霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一。曾在世界上引起多次大流行，主要表现为剧烈的呕吐、腹泻、失水，死亡率甚高。属于国际检疫的烈性传染病。,4,霍乱弧菌包括两个生物型：古典生物型（Classical biotype）和埃尔托生物型（EL-Tor bio-type）。,这两种型别除个别生物学性状稍有不同外，形态和免疫学性基本相同，在临床病理及流行病学特征上没有本质的差别。自1817年以来，全球共发生了七次世界性大流行，前六次病原是古典型霍乱弧菌，第七次病原是埃尔托型所致。,5,1992年10月在印度东南部又发现了一个引起,霍乱流行的,新血清型菌株（0139,）,，它引起的霍乱在临床表现及传播方式上与古典型霍乱完全相同，但不能被01群霍乱弧菌诊断血清所凝集。该菌株在水中的存活时间较01群霍乱弧菌长，因而有,可能成为引起世界性霍乱流行的新菌株。,6,一、生物学性状（一）形态染色,霍乱弧菌呈,弧形或逗点形态,，大小为1.42.60.50.8m。,革兰氏阴性菌，菌体一端有单根鞭毛和菌毛，无荚膜与芽胞。,取霍乱病人米泔水样粪便作活菌悬滴观察，可见细菌,运动极为活泼，呈流星穿梭运动,。,7,图注：霍乱弧菌的鞭毛（）和它可溶解的鞘膜（） 负染，3 100,图注：分裂中的霍乱弧菌 冰冻蚀刻，70 000,8,9,（二）培养特性,霍乱弧菌为,需氧或兼性厌氧菌;,营养要求不高，,耐碱不耐酸,，在,pH8.8,9.0,的碱性蛋白胨水或平板中生长良好。因其他细菌在这一,pH,不易生长，故,碱性蛋白胨水,可作为选择性增殖霍乱弧菌的培养基;,在碱性平板上菌落直径为,2mm,，,圆形，光滑，透明,。,10,11,常用的,选择培养基,为硫代硫酸盐,-,枸橼酸盐,-,胆盐,-,蔗糖琼脂平板（,TCBS,）,，霍乱弧菌在其中可形成较大的菌落，因发酵蔗糖产酸而使,菌落呈黄色,。,12,13,（三）生化反应,两个生物型的霍乱弧菌都能分解甘露醇、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖，产酸不产气。迟缓发酵乳糖，不分解阿拉伯糖。,氧化酶、明胶酶试验均阳性。,能产生靛基质，霍乱红反应阳性,14,El Tor,型霍乱弧菌与古典型霍乱弧菌生化反应有所不同,El Tor,型,VP试验,为阳性，能产生强烈的溶血素，溶解羊红细胞，在血平板上生长的菌落周围出现明显的透明溶血环，,古典型,试验VP试验,为阴性，不溶解羊红细胞。,个别,EL Tor,型霍乱弧菌株亦不溶血,。,15,霍乱弧菌的抗原结构,特性,O抗原,H抗原,属共同抗原,群特异性,型特异性,耐热性,（,100, 2h）,（四）抗原性,1,抗原结构：,16,2分群和分型：,根据O抗原的特异性，可将霍乱弧菌分成,139个血清群,。,根据是否与O1抗血清凝集分两大群，,凡能与O1群抗血清发生凝集的称为,O1群霍乱弧菌,；,凡不被O1群抗血清凝集的其它血清群统称为,非O1群霍乱弧菌,。,17,O1群霍乱弧菌的血清分型,型别,别名,O抗原成份,原型,稻叶型（Inaba）,A、C,异型,小川型（Ogawa）,A、B,中间型,彦岛型,（Hikojima）,A、B、C,血清型,：,O1,群霍乱弧菌的菌体抗原由,A,、,B,、,C,三个抗原成份,组成,18,生物型,：O1群霍乱弧菌有,古典生物型和E1 Tor 生物型,之分，两个生物型具有相同的血清型。我国流行以El Tor、小川型霍乱弧菌为主。,噬菌体分型,： 对噬菌体的敏感性进行分型，其中较为实用的是第,组和第,组噬菌体。,19,霍乱弧菌两个生物型的鉴别,性 状,古 典 型,E1 Tor 型,溶血（1%绵羊红细胞）,d,血凝（2.5%鸡红细胞）,V-P试验,多粘菌素B敏感试验（50U/片）,噬菌体,组裂解（10,6,/ml）,噬菌体,组裂解（10,6,/ml）,以上为阳性；以上为阴性；阳性,20,霍乱弧菌的变异性,形态变异,弧型直杆状,多形,菌落变异,S RL,溶血性变异（,El Tor型,）,溶血性 非溶血性,传代,毒力变异,强毒株,弱毒株,无毒株,血清型别变异,小川型,稻叶型,（五）变异性：,21,（六）抵抗力,霍乱弧菌,古典生物型对外环境抵抗力较弱,，,EL-Tor生物型抵抗力较强。,霍乱弧菌对热、干燥、日光、化学消毒剂和酸均很敏感，耐低温，耐碱而不耐酸,。,霍乱弧菌对链霉素、氯霉素和四环素敏感，但El Tor生物型对一定浓度的多粘菌素B及庆大霉素有耐药性。,22,二、致病性和免疫性,1致病物质,（1）,鞭毛、菌毛、粘液素酶,（2）,霍乱肠毒素,（cholera enterotoxin）,霍乱肠毒素本质是蛋白质，不耐热。对蛋白酶敏感而对胰蛋白酶抵抗。,该毒素属外毒素，具有很强的抗原性。,23,霍乱肠毒素,1个A亚单位,毒性单位,A1肽链,具有激活腺苷酸环化酶的酶活性,A2肽链,结合B亚单位；,参与转位,5个B亚单位（46）,结合单位,特异地识别肠上皮细胞膜上的神经节苷脂受体,24,25,致病机理,霍乱弧菌,胃,对酸敏感，很快被杀死,肠,胃酸降低或缺乏，菌体增多,鞭毛、菌毛、粘液素酶,绒毛上大量繁殖,CT的B亚单位结合神经节苷脂受体,形成膜通道,A1肽链进入细胞,26,ATP,cAMP,肠粘膜上皮细胞分泌亢进,肠液大量分泌,大量体液和电解质进入肠腔而发生剧烈吐泻,大量脱水和失盐,发生代谢性酸中毒，血循环衰竭，甚至休克或死亡,激活腺苷酸环化酶系统,27,2所致疾病,引起烈性肠道传染病的霍乱，为我国的法定传染病（甲类），,表现为,剧烈的上吐下泻，导致严重的脱水、酸中毒、痉挛、尿闭、休克和死亡。,人类在自然情况下是霍乱弧菌的唯一易感者，主要通过污染的水源或饮食物经口传染（,粪口途径,）。患者,出现上吐下泻，泻出物呈“米泔水样”，并含大量弧菌，此为本病典型的特征,。,28,3免疫性,患过霍乱的人可,获得,牢固的免疫力,，再感染者少见。,病后小肠内可,出现,分泌型,lgA,。,29,三、微生物学诊断,由于霍乱流行迅速，且在流行期间发病率及死亡率均高，危害极大，因此早期迅速和正确的诊断，对治疗和预防本病的蔓延有重大意义。,（一）标本采集：,标本以粪便为主,，,一般,米泔水样便,采取,1,3ml,，成形便采取蚕豆大小。,在某些情况下，亦可采取,呕吐物和尸体肠内容物,作检材。,30,检验程序,31,（三）检验方法及鉴定,1直接镜检：,1）,动力观察：,采取病人“米泔水样”大便或呕吐物制成悬滴片，,观察细菌动力,，,可见,流星或穿梭状动力的细菌,。,2）,制动试验：,标本， 霍乱多价诊断血清,（效价1：64），用暗视野镜观察，,3分钟内,运动被抑制,的即为阳性,，,此法优点是,快速而特异操作简便,，但必须有数量较多的弧菌才检出。,32,3）,涂片染色,：,革兰氏染色阴性,并成鱼群状排列的弧菌,。,33,2快速诊断：,1）,免疫荧光菌球法：,将标本接种于含有霍乱弧菌,荧光抗体,的碱性蛋白胨水中，经37,46h，如有霍乱弧菌，在荧光显微镜下,可见发荧光的菌球,。本法适用于做,大量标本的初筛,。,2,）,SPA,协同凝集试验：,以霍乱弧菌,IgG,型抗体,与,SPA,阳性葡萄球菌结合作为试剂，与米泔水样便或增菌液作玻片凝集，,立即出现明显凝集者（）为阳性。,34,3细菌分离培养,1,）,直接分离培养：,分离用的培养基有强、弱,2,种选择培养基。,弱选择培养基,：碱性琼脂和碱性胆盐琼脂。,强选择培养基：,常用的有庆大霉素琼脂、,4,号琼脂和,TCBS,琼脂等。,现多采用碱性蛋白胨水增菌，再用强选择培养基进行分离。,35,4 鉴定：,根据霍乱弧菌在各种选择培养基上的特点，挑选可疑菌落进行鉴定。,鉴定以血清学（玻片凝集）为主，结合形态学、生化反应作出判断,。,1）,玻片凝集试验：,从分离培养基上挑取可疑菌落于霍乱弧菌,多价诊断血清,作玻片凝集试验。诊断血清应稀释成1:32-1:64的效价使用，,立即出现凝集者为阳性,，同时设生理盐水和阳性细菌株对照。,36,2）,形态学检查：,取纯培养物涂片革兰氏染色，,观察菌体形态及染色性,。用悬滴法或半固体穿刺法,检测动力,。,3）,生化反应：,霍乱弧菌氧化酶试验、靛基质试验、粘丝试验和霍乱红试验均阳性,。,粘丝试验：,用于测定霍乱弧菌形成粘丝的特性。将,0.5,去氧胆酸钠,水溶液,于霍乱弧菌混匀制成浓厚菌液，,1min,内悬液由混变清，并变得粘稠，,以接种环挑取时可以拉出丝,来,。霍乱弧菌古典生物型和,El Tor,生物型均呈阳性。,37,38, 霍乱红试验：,出现蔷薇色,，为霍乱红试验阳性。由于霍乱弧菌和其他弧菌均有此种反应，故无特异性。,（,霍乱弧菌含有色氨酸酶，能分解色氨酸产生吲哚，霍乱弧菌液能还原硝酸盐为亚硝酸盐，因此当霍乱弧菌培养在含有硝酸盐成分的蛋白胨水中，所产生的亚硝酸盐可与吲哚结合成亚硝酸吲哚，滴加浓硫酸即可出现蔷薇色，称为霍乱红试验阳性,）,O/129,敏感试验：,将,O/129,（,2,，,4,二氨基,6,，,7,二异丙基喋啶）药敏纸片（,10,150,g,）贴在接种有待测菌的琼脂平板上作纸片扩散试验，,凡药物纸片周围出现抑菌环者为敏感,。,39,4） 霍乱弧菌的分型鉴别试验：,血清分型：,用小川型和稻叶型,单价诊断血清,作玻片凝集。与小川型血清凝集而与稻叶型血清不凝集者为小川型，反之为稻叶型。在两个单价血清中均有明显凝集者为彦岛型。,生物型别的鉴定：,目前，两型主要依靠第组霍乱噬菌体裂解试验进行鉴别，并辅以多粘菌素敏感试验、鸡红细胞凝集试验、,V,P,试验和溶血试验。,40,第,组霍乱噬菌体裂解试验：,第,组霍乱噬菌体常规稀释液（10,6,/ml）一般仅裂 解古典型，而不裂解El Tor型。, 多粘菌素B敏感试验：,取被检菌2-3h肉汤培养物点种到含药营养琼脂平板上（多粘菌素B50Uml）,37培养24h，,El Tor生物型生长，而古典型敏感。,41,42, 鸡红细胞凝集试验：,在玻片上滴加生理盐水一滴，取被检菌18-24h培养物少许在盐水中制成浓厚菌悬液，然后加一滴2.5鸡红细胞悬液，充分混匀，,1min内出现凝集者为阳性,，红细胞呈均匀分散者为阴性。,El Tor生物型为阳性，古典型为阴性,。,43,鉴定要点：,确诊O1群霍乱弧菌必须具备的条件：,1、涂片为革兰氏阴性弧菌或杆菌；,2、TCBS等选择培养基上典型的菌落特征；,3、动力阳性；,4、O1群霍乱弧菌诊断血清凝集试验阳性。,44,四、防治原则,必须贯彻,预防为主,。,人群的,菌苗预防接种,，可获良好效果，,治疗主要为,及时补充液体和电解质及应用抗菌药物,如四环素、链霉素、氯霉素、强力霉素及氟哌酸类抗生素药物。,45,第二部分 弯曲菌属,46,弯曲菌属,(Campylobacter)细菌是一类微需氧、不分解糖类、氧化酶阳性、菌体弯曲呈逗点状、S型或螺旋状、有动力的革兰氏阴性菌。,对人类致病的主要是,空肠弯曲菌和胎儿弯曲菌胎儿亚种,，前者是人类,腹泻,最常见的病原菌之一，后者在免疫功能低下时可引起,败血症、脑膜炎等,。,本节主要以,空肠弯曲菌,介绍本属的生物学特性和检验方法,47,一、生物学性状,（一）形态与染色,空肠弯曲菌 （C.jejuni）菌体轻度弯曲似逗点状，长1.55 m，宽0.20.8 m。菌体一端或两端有鞭毛，运动活泼，在暗视野镜下观察似飞蝇。有荚膜，不形成芽胞。革兰氏阴性。,图注：空肠弯曲菌的两端单鞭毛（） 负染，21 000,48,（二）培养特性,为,微需氧菌,，在含2.55%氧和10%CO,2,的环境中生长最好。最适温度为,3742。,在正常大气或无氧环境中均不能生长。,本菌,营养要求高,，,需加入血液、血清才能生长,。,在凝固血清和血琼脂培养基上培养36小时可见,无色半透明毛玻璃样小菌落,，,单个菌落呈中心凸起，周边不规则，无溶血现象,。,49,（三）生化反应,空肠弯曲生化反应不活泼，不发酵糖类，不分解尿素，不液化明胶，靛基质阴性。,可还原硝酸盐，氧化酶和过氧化氢酶为阳性。,甲基红和,VP,试验阴性；,枸椽酸盐培养基中不生长。,50,（四）抵抗力,抵抗力不强,，易被干燥、直射日光及弱消毒剂所杀灭，565分钟可被杀死。,对红霉素、新霉素、庆大霉素、四环素、氯霉素、卡那霉素等,抗生素敏感,。但近年发现了不少耐药菌株。,51,（五）抗原构造,本菌抗原构造与肠道杆菌一样,具有,O,、,H,和,K,抗原,。,根据,O,抗原，可把空肠弯曲菌分成,45,个以上血清型。,52,二、致病性与免疫性,空肠弯曲菌是多种动物如牛、羊、狗及禽类的,正常寄居菌,。,污染食物和饮水,，可引起人类,急性肠炎和食物中毒,，,其致病因素与肠毒素、内毒素、细胞毒素、侵袭力有关。,感染后能产生特异性血清抗体,，,53,三、微生物学诊断,（一）标本采集：,取腹泻病人,新鲜粪便或肛拭子,立即送检。,如不能及时送检，应将标本接种于卡布运送培养基。,（二）检验程序：,54,55,（三）检验方法及鉴定,1直接涂片,（1）悬滴标本检查：,显微镜下观察有无,投镖式或螺旋状运动,的细菌,。脑脊液制成涂片作悬滴检查。,（2）革兰氏染色检查：,为,革兰氏,阴性，逗点状、S形或螺旋状,小杆菌,。,56,57,2分离培养：,选择培养基分离,接种于具有高度选择性的平板培养,（,布氏菌血琼脂抗性分离培养基,），然后放玻璃缸内（内含,85%N,2,，,10%CO,2,，,5%O,2,），置,42,孵箱内培养,48,小时。,挑选可疑菌落，,菌落为灰色、平坦、规则，在血平板上不溶血,，再用生化反应和血清凝集试验作出最后鉴定。,58,59,鉴定要点:,氧化酶阳性，革兰氏阴性，菌体弯曲或称S形，微需氧，触酶试验阳性，不利用糖类，42时生长。,60,空肠弯曲菌和胎儿弯曲菌的生化反应鉴定,试验种类,空肠弯曲菌,胎儿弯曲菌,萘啶酸敏感试验,敏感,耐药,头孢噻吩敏感试验,耐药,敏感,马尿酸盐水解试验,醋酸吲哚水解试验,61,四、防治原则,本病的预防在及时诊断和治疗病人，以免传播。加强卫生防疫及人畜粪便管理，,注意饮食和饮水卫生,。,本菌对,多种抗生素敏感,，常用红霉素、四环素、庆大霉素治疗。,62,谢谢,63,
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