资源描述
单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验四 白细胞计数、网织红细胞计数及血沉测定,目的,1掌握显微镜白细胞计数的方法。,2掌握网织红细胞手工计数的方法。,3血沉测定（示教）。,1,一、显微镜白细胞计数（临检指导,P32,）,1.,概述,人外周血白细胞,单核细胞,白细胞,淋巴细胞,中性分叶核粒细胞,粒细胞,中性杆状核粒细胞,嗜酸性粒细胞,嗜碱性粒细胞,2,一、显微镜白细胞计数,2原理,用,白细胞计数稀释液,（2%冰醋酸加入1%美,蓝或结晶紫数滴）,0.38ml,，将,血液（20l）,稀释20,倍，在,破坏成熟红细胞的同时固定白细胞，,后充入,改良牛鲍计数板，在,低倍镜,下计数,四角4个大方格,内的白细胞数，经换算求得每升血液中白细胞数。,3,一、显微镜白细胞计数,3.,操作步骤,（1）加稀释液,：,白细胞稀释液0.38ml,（2）稀释血液：,末梢采血20l，加入稀释液中混匀,（3）溶血 ：,混匀后静置，待液体变为棕褐色,（4）充池：同红细胞计数,（5）计数：,低倍镜,下计数,四角4个大方格内,白细胞总数。,4,5,一、显微镜白细胞计数,4.计算,WBC=N/4102010,6,=N/2010,9,/L,5.参考值,成人： （410）10,9,/L,初生儿： （1520）10,9,/L,6月2岁： （1112）10,9,/L,6,6.注意事项,（1）器材：微量吸管及牛鲍计数板的校正,（2）标本采集和稀释应准确,（3）加盖玻片方式： WHO推荐“推式”法,（4）充液的影响：同红细胞计数,（5）计数原则,一、显微镜白细胞计数,7,（6）计数室内的细胞分布要均匀：,各大方格间细胞,数相差不超过10%，否则应重新重池。,（7）调整计数白细胞的数量或稀释倍数:,细胞数量过,少，可扩大计数域(计8或9个大方格)或加大取,血量；细胞数量过多，可增加稀释液至0.79ml,或仅加血10l。,（8）去除有核红细胞的影响 ：,实际白细胞数/L=100校正前白细胞数/,（100+有核红细胞）,8,7.方法学评价,显微镜计数法是,传统的白细胞计数法，,并可用,于,校准血细胞分析仪,，但其,精密度和重复性欠佳,。,用于校准血液分析仪时应在严格规范的条件下进行。,而校准的血液分析仪在严格规范的条件下，精密度和,准确性较高。,一,、,显微镜白细胞计数,9,血液分析仪检测速度快，适合大规模健康人群普查，但需特殊仪器，当某些人为或病理情况（如外周血有核红细胞、巨大血小板和血小板凝集等）可干扰白细胞计数。,10,一、,显微镜白细胞计数,8.,临床意义,白细胞在生理或病理情况下均可有差异。多数,与中性粒细胞数量变化一致。,11,二,、,网织红细胞计数（临检指导,P26,）,1.,原理,网织红细胞（,Ret,）是晚幼红细胞脱核后到完全成熟的,红细胞间的过渡细胞。其胞质中残存核糖核酸等嗜碱性物,质，故经煌焦油蓝/新亚甲蓝染液活体染色后，可见有蓝绿,色点状、线状、颗粒状或网状结构，故名网织红细胞。,12,二,、,网织红细胞计数,2.,操作步骤（玻片法）,（1）加染液：于载玻片的中央滴加煌焦油蓝乙醇溶液，自,然干燥后备用。,（2）加血液：取血1滴，滴在染料上，用推片角轻轻将血,滴与染料混匀，然后用另一载玻片垂直盖在此玻片上,（尽量不留气泡），室温下静置1520min。,（3）制备涂片。,（4）油镜下计数1000个红细胞中的网织红细胞数（一般,连续计数3个视野即可）。,13,（5）也可用米勒氏窥盘（,Miller oculordisc,）置入接目镜内,进行计数（如下图）。,具体方法是以窥盘的A区计数红细胞，B区计数网织,红细胞，由于B区的面积为A区的9倍，故计算如下：,网织红细胞（%）=B区网织红细胞数/ A区红细胞数,9 100%,14,15,二,、,网织红细胞计数,3.计算,网织红细胞分数数=计数的网织红细胞数/1000,网织红细胞绝对数=红细胞数/L网织红细胞分数数,4.参考值,正常成人： 0.5%1.5%,新生儿： 2%6%,成人网织红细胞绝对值： （2484）10,9,/L,16,5.,注意事项,（1）只有活体染色后才能看到网织红细胞，故必须将新鲜,血滴与染液相混合，染液与血液之比一般约为1：1，,但若贫血严重也可按1：2关系处理。注意混匀，否则,有时凝固。,（2）染色时间不得短于10min，否则可能着色不佳。计数,前注意多部位观察，可与涂片的体尾交界处选染色,好，红细胞分布既不分散又不重叠的区域进行计数。,经此种染色后红细胞呈清晰的蓝绿色，凡胞质中含有,蓝绿色点状、短线状结构者为网织红细胞。,二、网织红细胞计数,17,网织红细胞,18,（3）,计数时需注意与异物或假象相区别。如有异物残渣，,多呈黑色，转动微螺旋时可见其折光性。接目镜中粉尖,重叠于红细胞上所致的假象，则随接目镜转动而移位。,勿将皱缩红细胞较深染的皱缩点勿认为网织结构，皱缩,红细胞其边缘处均匀的锯齿状可供作鉴别。,（4）,染色后的涂片应尽快观察计数，否则其网织结构可因,久置而溶解消失（尤其在夏天湿度大的季节）。,19,6.,方法学评价,玻片法取血量少，且易于使混合血液中的水分蒸发，造,成染色结果偏低，但携带方便，适宜床边采血检查。,二,、,网织红细胞计数,20,二,、,网织红细胞计数,7.,质量控制,1.显微镜法,网织红细胞目视计数误差较大，影响因素主要有：,操作人员对网织红细胞认识不同；血涂片质量好坏，,计数红细胞数量的多少和计数方法等。,21,2.,仪器法,虽可计数红细胞,10 00050 000,个，但受到,H-J,小体、有核红细胞、巨血小板等影响，可出现假阳性。,22,三,、血沉测定（示教）（临检指导P29,）,1原理,(魏氏法),将一定量的抗凝全血灌注于特制的血沉管中，垂直立,于血沉架上,1h,后读取红细胞下沉后所暴露出的血浆段高,度,（mm/h）。,23,三,、,血沉测定,2,方法,（1）取静脉血,1.6ml，加入含109mmol/L,枸橼酸钠,0.4ml,的抗凝管中混匀。,（2）吸血入血沉管中至刻度,“0”,处，将血沉管直立于血,沉架上。,1h,后观察结果。,24,三、血沉测定,3.参考值,50岁：男性015mm/h,女性020mm/h,25,4注意事项,（1）枸橼酸钠抗凝剂与血液比例为1：4，并充分混匀。,（2）最适温度为18-25,0,C，并于采血后2h内完成。,（3）温度高或低会影响血沉，需根据温度校正图校正。,（见P32图2-11）,（4）血沉管内径要标准，放置要垂直、不得倾斜。,三,、,血沉测定,26,
展开阅读全文