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,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1,一、实验原理,植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间,(am9, pm3),，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。,2,二、实验目的,根尖染色体压片法是观察植物染色体最常用的方法，也是研究染色体组型、染色体分带、染色体畸变和姊妹染色单体交换的基础。,3,三、实验材料,大蒜,(,Aillum sativum,)(2n=16),的鳞基。,4,四、实验器具和药品,1.,用具：,染色板、载玻片、盖玻片、指管、温度计、试剂瓶、滴瓶、镊子、解剖针和毛边纸等。,2.,药品：,无水酒精、,70,酒精、冰醋酸、对二氯苯或秋水仙素、醋酸钠、碱性品红、石碳酸、甲醛、山梨醇、纤维素酶、果胶酶、中性树胶或油派胶,(Euparal),和二甲苯。,卡诺固定液的配制：,3,份无水酒精，加,1,份冰醋酸,(,现配现用,),。,酶液的配制：,以,0.1mol/L,醋酸钠为溶剂，配成纤维素酶,(2,),和果胶酶,(0.5,),的混和液。,5,染色液的配制：,配方,：,石碳酸品红,(Carbol. fuchsin),染色液，先配母液,A,和,B,。,母液,A,：,称取,3,克碱性品红，溶解于,100,毫升的,70,酒精中,(,此液可长期保存,),。,母液,B,：,取母液,A 10,毫升，加入,90,毫升的,5,石碳酸水溶液,(2,周内使用,),。,石碳酸品红染色液：,取母液,B 45,毫升，加入,6,毫升冰醋酸和,6,毫升,37,的甲醛。此染色液含有较多的甲醛，在植物原生质体培养过程中，观察核分裂比较适宜，后来在此基础上，加以改良的配方,，称改良石碳酸品红，可以普遍应用于植物染色体的压片技术。,配方,：,改良石碳酸品红取配方,石碳酸品红染色液,2-10,毫升，加入,90-98,毫升,45,的醋酸和,1.8,克山梨醇,(sorbitol),。此染色液初配好时颜色较浅，放置二周后，染色能力显著增强，在室温下不产生沉淀而较稳定。,6,五、实验说明,1.,根尖取材方便，是观察植物染色体最常用的材料，也可以用茎尖作为材料。,2.,植物细胞分裂周期的长短不同，在十到几十小时之间，温度影响分裂周期，对于一个不太熟悉的实验材料，最好在特定温度下长根，掌握有丝分裂高峰期，以便得到更多的有丝分裂的细胞。,3.,前处理的目的是降低细胞质的粘度，使染色体缩短分散，防止纺锤体形成，让更多的细胞处于分裂中期，一般在分裂高峰前，把根尖放到药剂中处理,3-4,小时。可处理的药剂很多，如秋水仙素、对二氯苯、,8-,羟基喹啉等。,4.,解离的目的是使分生组织细胞间的果胶质分解，细胞壁软化或部分分解，使细胞和染色体容易分散压平，解离方法有酸解法和酶解法。,7,六、实验步骤,（一）,培养及前处理：,将大蒜鳞基置于盛水的小烧杯上，放在,25,温箱中，待根长到,2cm,左右时（见图,1-1,） ，在上午九时摘下根尖，放到对二氯苯饱或,0.02,秋水仙素溶液中，浸泡处理,3-4,小时。,8,图,1-1,大蒜的培养,9,（二）,固定及保存：,经过前处理的根尖，再放到卡诺固定液中固定,24,小时。固定材料可以转入,70,酒精中，在,4,冰箱中保存，保存时间最好不超过二个月。,（三）,解离,(,酸解,),：,从固定液中取出大蒜根尖，用蒸馏水漂洗，再放到,0.1mol/LHCl,中，在,60,水浴中解离,8-10,分钟，用蒸馏水漂洗后，放在染色板上，加上几滴改良石碳酸品红染色液，根尖着色后即可压片观察。,10,（四）,压片：,把染色后的根尖放在清洁的载玻片上，用解剖针把根冠及延长区部分截去，加上少量染色液，并盖上盖玻片。一个解离良好的材料，只要用镊子尖轻轻的敲打盖玻片，分生组织细胞就可铺展成薄薄的一层，再用毛边纸把多余的染色液吸干，经显微镜检查后，选择理想的分裂细胞，再在这个细胞附近轻轻敲打，使重叠的染色体渐渐分散，就能得到理想的分裂相，要达到这个目的，必需掌握以下几点：,1.,压片材料要少，避免细胞紧贴在一起，细胞和染色体没有伸展的余地。,2.,用镊子敲打盖玻片时，用力要均匀，若在压片时稍不留意，使个别染色体丢失，而被迫放弃一个良好的分裂相的细胞。,（五）,封片：,把压好的玻片标本，放在干冰或冰箱结冰器里冻结。然后用刀片迅速把盖玻片和载玻片分开，用电吹风把玻片吹干后，滴上油派胶加上盖玻片封片，或经二甲苯透明后，滴中性树胶，加盖玻片封片，做成永久封片。,11,七、结果,拍摄并绘制根尖染色体的各分裂相。,12,图,1-2,有丝分裂模式图,13,图,1-3,低倍镜下,大蒜根尖细胞,有丝分裂各期,14,图,1-4,大蒜根尖细胞有丝分裂后、末期,15,八、作业,1.,绘制大蒜根尖细胞有丝分裂各时期图象。,2.,说明某一影响制片效果因素的方法、目的和原理。,16,
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