自身免疫性疾病及其免疫检测课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,.,*,.,常见自身免疫性疾病的自身抗体检测,自身抗体（,autoantibody,）,是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白，是自身免疫和自身免疫病重要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗体,(,谱,),分类,:,脏器特异性自身抗体,脏器非特异性自身抗体,.常见自身免疫性疾病的自身抗体检测 自身抗体（auto,.,自身免疫性疾病的重要标志,高滴度存在于自身免疫性疾病患者,与疾病的活动性相关,参与免疫病理性损伤,一、自身抗体的特性,.自身免疫性疾病的重要标志一、自身抗体的特性,.,自身抗体,免疫球蛋白,补体,淋巴细胞,细胞因子,自身免疫性疾病的主要实验检测,.自身抗体自身免疫性疾病的主要实验检测,.,1948,年,Haragraves,等发现,LE,细胞现象,1957,年,Holborow,等应用,IIF,检测,ANA,1961,年,Beck,等发现,ANA,不同荧光染色模型,6070,年代,IIF,、,ID,、,CIE,应用,新的自身抗体,1979,年,Towbin,等应用免疫印迹技术检测自身抗体,80,年代,IB,、,RIP,应用,蛋白多肽水平认识自身抗原,1987,年,DNA,基因重组技术开始应用自身抗体研究,近十年应用分子生物学技术,自身抗体研究发展简史,. 1948年 Haragraves等发现 LE 细,.,抗核抗体（,ANA）,抗可提取性核抗原抗体（,ENA）,抗中性粒细胞胞浆抗体（,ANCA）,类风湿因子（,RF）,抗角蛋白抗体（,AKA）,抗环瓜氨酸肽抗体（抗,CCP,抗体）,抗心磷脂抗体（,ACLA,）,常检测的自身抗体,.抗核抗体（ANA）常检测的自身抗体,.,标志抗体,相关疾病,dsDNA,SLE,Sm,SLE,SSB,SS,着丝点抗体,PSS（,局限型）,Scl-70,抗体,PSS（,弥漫型）,AKA,、抗,CCP,抗体,RA,Jo-1,抗体,PM/DM,（进行性系统性硬皮病）,高滴度,RNP,抗体,MCTD,肝肾微粒体抗体（,LKM-1）,型自身免疫性肝炎,平滑肌抗体（,SMA）,型自身免疫性肝炎,AMA（M2）,PBC,常见自身免疫性疾病的标志抗体,.标志抗体相关疾病dsDNASLESmSLESSBSS着丝点,.,间接免疫荧光法（,IIF）,ELISA,免疫印迹法（,Western-blot）,酶免疫斑点法,检测自身抗体常用的方法,.间接免疫荧光法（IIF）检测自身抗体常用的方法,.,抗核抗体,:,:,以真核细胞（如,HEp-2,细胞、肝细胞）的各种细胞核成分为靶抗原所检测的自身抗体的总称。,二、抗核抗体的检测与应用,. 抗核抗体:以真核细胞（如HEp-2细胞、肝细胞）的各,.,抗核抗体,谱,.抗核抗体谱,.,以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗,Sm、,抗,Sa,抗体等；,以相关疾病命名，如抗,Scl-70、,抗,SS-A、,抗,SS-B,抗体等；,以抗原的部位命名，如抗核仁抗体、抗线粒体抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等；,以抗原的化学名称分类命名，如抗,DNA、,抗,RNP、,抗组蛋白抗体,抗核小体抗体等。,抗核抗体,谱,的分类和命名,.以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗Sm、 抗Sa 抗体等,.,间接免疫荧光法,（,indirect immunofluorescence, IIF）,酶免疫斑点法,ELISA,免疫印迹法,（,Western-blot）,抗核抗体检测方法,.间接免疫荧光法抗核抗体检测方法,.,间接免疫荧光法示意图,HEp-2,细胞,肝组织切片,荧光标记抗体,病人血清（待检抗体）,.间接免疫荧光法示意图HEp-2细胞荧光标记抗体病人血清（待,.,细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期,均质型 核糖体型 肌蛋白型 中心体型,斑点型 线粒体型 波形纤维蛋白型 纺缍体型,核仁型 高尔基体型 细胞角蛋白型 纺缍丝型,着丝点型 溶酶体型 原肌球蛋白型 中间体型,周边型 颗粒型 纽带蛋白型,PCNA,型,核点型(,dots),IIF,检测,ANA,荧光染色模型,. 细胞核 细胞浆 细胞,.,斑点型（,nRNP/Sm）,高滴度的抗,U1-nRNP,为,MCTD,的特征。抗,Sm,抗体对,SLE,具有高度特异性。,斑点型（,SSA/SSB）,抗,SSA,最常出现于,SS,及新生儿红斑狼疮 （100%）。抗,SSB,抗体几乎仅见于女性，可出现于,SS,和,SLE。,.斑点型（nRNP/Sm） 高滴度的抗U1-nRNP为MCT,.,均质型,抗,dsDNA,抗体 抗组蛋白抗体(,histone),抗,ssDNA,抗体 抗核小体抗体(,nucleosome),.均质型 抗dsDNA抗体 抗组蛋白抗,.,周边型,可见于胶原病、,PBC、CAH,等患者,.周边型,.,核点型,（,DOTS）,见于,SLE、SS、PBC、,风湿病,抗着丝点型,PSS,局限型标志抗体,.核点型（DOTS） 见于SLE、SS、PBC、,.,抗原纤维蛋白型,仅见于5%10%的,PSS,，男性高于女性,抗,RNA,多聚酶,型抗体,仅见于硬皮病患者，阳性率为4%,.抗原纤维蛋白型 仅见于5%10%的PSS，男性高于女性,.,抗,PM-Scl（PM-1）,抗体,见于重叠综合征（多发性肌炎,PM /,皮肌炎,DM /,弥漫性,PSS ）,.抗PM-Scl（PM-1）抗体 见于重叠综合征（多发性肌炎,.,抗,Scl-70,型,PSS,弥漫型的标志抗体,.抗Scl-70型 PSS 弥漫型的标志抗体,.,增殖细胞核抗原型,（,PCNA）,SLE,特异性抗体，与发生弥漫性增殖性肾小球肾炎相关,.增殖细胞核抗原型,.,抗核糖体,P,蛋白,（,rib-P）,抗体,抗线粒体抗体,（,AMA）,SLE,标志抗体,原发性胆汁性肝硬化标志抗体,.抗核糖体P蛋白（rib-P）抗体抗线粒体抗体（AMA）SL,.,抗,Jo-1,抗体,抗高尔基体抗体,多发性肌炎（,PM）,标志抗体,偶见于,SLE,和,SS,.抗Jo-1抗体抗高尔基体抗体多发性肌炎（PM）标志抗体偶见,.,抗肌动蛋白抗体,见于自身免疫性慢性活动型肝炎,.抗肌动蛋白抗体见于自身免疫性慢性活动型肝炎,.,抗双链,DNA,抗体,抗,dsDNA,抗体与细胞核,DNA,（外围区）脱氧核糖磷酸框架结合。,抗,dsDNA,抗体是,SLE,患者的特征性标志抗体。其抗体滴度与疾病的活动程度有相关性，抗体滴度的动态测定为监控治疗提供了有效的实验室手段。,抗双链,DNA,抗体,.抗双链DNA抗体 抗dsDNA抗体与细胞核DNA（外围区）,.,检测方法及应用,间接免疫荧光检测，是目前国内外临床常规检测抗,dsDNA,抗体最常用的方法。,抗,dsDNA,抗体诊断,SLE,的特异性可达,95%,100%,，但其敏感性仅为,30%,50%,，因此抗,dsDNA,抗体阴性不能排除,SLE,的诊断。,检测方法及应用,.检测方法及应用间接免疫荧光检测，是目前国内外临床常规检测抗,.,抗,dsDNA,抗体,SLE,特异性抗体，与病情活动度相关。,.抗dsDNA抗体SLE特异性抗体，与病情活动度相关。,.,抗核小体抗体,核小体（,nucleosome,）,是真核生物细胞核染色质的基本单位 。凋亡细胞是核小体的重要来源，当,SLE,患者的吞噬细胞对凋亡细胞的清除能力受损或降低，导致核小体在患者体内大量存积，激活,B,细胞产生,抗核小体抗体（,Antinucleosome antibody ,AnuA,）。,.抗核小体抗体 核小体（nucleosome）是真,.,检测及应用,AnuA,的检测通常采用,ELISA,检测法。,AnuA,具有同抗,ds-DNA,抗体相同的诊断特异性，可达到,95%,，在系统性硬化（,SSc,）病中可有,20%,50%,低浓度阳性率，其他自身免疫性疾病中该抗体均为阴性。,AnuA,的表达与,SLE,病情活动分数相关。,检测及应用,.检测及应用AnuA的检测通常采用ELISA检测法。 检测及,.,抗,ENA,抗体谱,:,可提取核抗原抗体的总称,临床常检测的抗,ENA,抗体谱主要包括：,抗,Sm,抗,U1-RNP,抗,SSA,抗,SSB,抗,Jo-1,抗,Scl-70,抗,rib-P,蛋白,三、抗,ENA,抗体谱的检测与应用,. 抗ENA抗体谱:可提,.,抗可提取,性,核抗原（,ENA,）抗体,.抗可提取性核抗原（ENA）抗体,.,双向免疫扩散（,ID）,对流免疫电泳（,CIE）,免疫印迹法（,Western-blot）,ELISA,酶免疫斑点法,ENA,检测方法,. 双向免疫扩散（ID）ENA检测方法,.,免疫印迹法,SDS-PAGE,电泳,转移电泳,酶免疫检测,免疫印迹法,.免疫印迹法 SDS-PAGE电泳转,.,.,.,抗可提取,性,核抗原（,ENA,）抗体,抗,Sm,抗体：,SLE,标记性抗体（,20%,30%,）,抗,nRNP,抗体,：,MCTD 95%,100%,（高滴度）,抗,SSA,抗体：,PSS 60%,75%,，其它,CTD,抗,SSB,抗体：,PSS 10%,40%,，其它,CTD,抗,Scl-70,抗体：,SSc 25%,75%,标记性抗体,抗,Jo-1,抗体：,PM/DM 25%,，标记性抗体,抗,rRNP,抗体：,SLE,特异性抗体（,10%,30%,）,. 抗可提取性核抗原（ENA）抗体 抗Sm抗体：SLE标记,.,抗中性粒细胞胞浆抗体,（,anti-neutrophil cytoplasmic autoantibodies,ANCA）,是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原，与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。,四、与小血管炎相关的自身抗,体检测与应用,.抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophil cy,.,荧光染色型,靶抗原,胞浆型,(cANCA),蛋白酶3（,PR3）,杀菌/通透性增高蛋白（,BPI）,核周型,(pANCA),髓过氧化物酶（,MPO）,组织蛋白酶,G（Cath-G）,乳铁蛋白（,LF）,白细胞弹性蛋白酶（,HLE）,非典型型,(aANCA),兼有两种特性,ANCA,荧光染色型与靶抗原,. 荧光染色型 靶抗原 胞浆型(,.,周边型抗中性粒细胞胞浆抗体,（,pANCA）,主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩病）,.周边型抗中性粒细胞胞浆抗体主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎,.,胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体,(cANCA),主要见于,Wegeners,肉芽肿及微小多动脉炎,.胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体主要见于Wegeners肉芽肿,.,ANCA,临床应用,髓过氧化物酶（,MPO）,与显微镜下多血管炎、坏死性新,月体型肾小球肾炎,、,过敏性肉芽肿性血管炎 相关,杀菌/通透性增高蛋白（,BPI）,主要见于肺部炎症性疾病,并与长期慢性绿脓杆菌感染有一定关系,蛋白酶3（,PR3）,与,Wegeners,肉芽肿（,WG）,密切相关。,仅,cANCA,诊断,WG,的特异性大于90%，联合,PR3,可超过95%， 活动期几乎100%阳性。,组织蛋白酶,G (Cath-G),白细胞弹性蛋白酶(,HLE),乳铁蛋白(,LF),可见于,SLE、IBD、PBC、PSC,等,. ANCA临床应用 髓过氧化物酶（MPO）与显微镜下多血,.,RA,早期诊断相关自身抗体,抗角质层蛋白抗体（,AKA,）：,1979,年,Young,等报告,靶抗原：,filaggrin,（,40KD,）,抗核周因子（,APF):1964,年,Nienhuis,等报告,靶抗原：,profilaggrin,（,37-41KD,）及其降解产物,抗聚,角蛋白微丝蛋白抗体（,AFA,）：,1993,年,Simon,等报告,靶抗原：,filaggrin,（,40KD,）,抗,Sa,抗体：,1994,年,Despres,等报告,靶抗原,:50/55KD,非酰基多肽，半抗原-瓜氨酸,抗环瓜氨酸肽抗体（抗,CCP,抗体）：,1998 Schellekens,五、与,RA,相关自身抗体的检测与应用,.RA早期诊断相关自身抗体五、与RA相关自身抗体的检测与应用,.,类风湿因子,（,rheumatoid factor,RF,）,为抗变性,IgG Fc,的自身抗体，主要是,IgM,型,致病机理：,RF,与体内变性,IgG,结合形成免疫复合物，激活补体或被吞噬细胞吞噬，产生炎性介质导致组织炎性损伤，使患者发生骨关节炎及血管炎。,. 类风湿因子（rheumatoid factor, RF）,.,1. 胶乳颗粒凝集实验,定性、半定量，敏感性和特异性不高，测定,IgM-RF,2. 速率散射比浊法（,ARRAY、IMAGE）,定量、准确、快速，测定,IgM-RF,3. ELISA,定量、准确，可测定不同类型的,RF,检测方法,.1. 胶乳颗粒凝集实验检测方法,.,（1）RF,在,RA、SLE、PSS,等多种自身免疫性疾病患者中均可被检出。,疾病,阳性率（%）,RA,79,SLE,30,SS,95,Sclerosis,80,PM,80,MCTD,25,临床应用,. （1）RF在RA、SLE、PSS等多种自身免疫性疾病患者,.,（2）RF,滴度与,RA,患者临床表现呈正相关，,IgM-RF,效价80,IU/ml,并伴有严重关节功能障碍时通常提示患者预后不良。（3）,IgG-RF,与,RA,患者的滑膜炎、血管炎和关节症状密切相关，常伴随,IgM-RF,同时出现，在正常人及非,RA,患者中很难检出。（4）,IgA-RF,与,RA,患者关节症状的严重程度及骨质破坏有显著相关性。,.（2）RF滴度与RA患者临床表现呈正相关，IgM-RF效,.,AKA,主要见于,RA,，阳性率36%,59%，特异性95%,99%，其出现可以先于临床表现；高滴度可预示较严重的,RA,类型。,抗角蛋白抗体,（AKA）,.AKA主要见于RA，阳性率36%59%，特异性95%9,.,常用方法,：,ELISA,临床意义,：,RA,特异性自身抗体，敏感性,65%,85%,，特异性为,94%,98%,；高浓度抗,CCP,抗体是,RA,发生关节侵蚀的危险因子之一，定量检测有助于判断预后。,抗环瓜氨酸肽抗体（抗,CCP,抗体）,.常用方法：ELISA抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）,.,自身免疫性肝病是与自身免疫密切相关的特殊类型的肝病，其诊断和治疗完全不同于一般的慢性病毒性肝炎,自身免疫性肝炎,(AIH),原发性胆汁性肝硬化 (,PBC),原发性硬化性胆管炎,(PSC),重叠综合征,六、与自身免疫性肝病相关自身抗体的检测与应用,.自身免疫性肝病是与自身免疫密切相关的特殊类型的肝病，其诊断,.,在多,种累及肝胆疾患的自身免疫疾病中，自身抗体在发病机制中起重要作用,自身免疫性肝病具有相对特异性自身抗体谱,自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断及鉴别诊断具有重要意义,自身免疫性肝病与自身抗体,. 在多种累及肝胆疾患的自身免疫疾病中，自身抗体在发病机,.,自身免疫性肝病及其自身抗体谱,疾病类型 相关自身抗体,自身免疫性肝炎（,AIH ）,型,AIH ANA/ASMA,型,AIH anti-LKM-1 anti-LC-1,型,AIH anti-SLA,(,可溶性肝抗原,),原发性胆汁性肝硬化（,PBC）,AMA (M2/M4/M8/M9 ),anti-gp210， sp100,ACA,原发性硬化性胆管炎（,PSC）,pANCA,自身免疫性肝病及其自身抗体谱,.自身免疫性肝病及其自身抗体谱 疾病类型,.,抗甲状腺球蛋白抗体,(TG Ab),抗甲状腺过氧化物酶抗体（,TPO Ab,）,抗促甲状腺素受体抗体（,TSH-R Ab,）,七、与桥本甲状腺炎相关自身抗体的检测与应用,.七、与桥本甲状腺炎相关自身抗体的检测与应用,.,重症肌无力（,MG,）自身抗体谱：,抗骨胳肌抗体（,ASA,）、抗乙酰胆碱受体,(AchR),抗体,多发性硬化（,MS,）自身抗体谱：,抗髓鞘碱性蛋白（,MBP,）抗体、抗脑苷脂抗体、抗神经结苷脂抗体,急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病（格林,巴利综合征）自身抗体谱：,抗髓鞘糖脂抗体、抗髓鞘硫脂抗体,八、与神经系统自身免疫性相关自身抗体的检测与应用,.重症肌无力（MG）自身抗体谱：八、与神经系统自身免疫性相关,.,大多数自身免疫患者血清中可测到高效价的自身抗体，特别是有些自身抗体的检测已纳入某些自身免疫性疾病的诊断标准中，自身抗体检测已是临床免疫检测的一项重要的实验室指标。,第五节 自身抗体检测的,临床应用,.大多数自身免疫患者血清中可测到高效价的自身抗体，特别是,.,筛查性试验与确诊性试验项目的合理组合,选择相关的自身抗体检测项目,切忌盲目的全面检测,实验中应同步设置阳性和阴性对照,一、自身抗体检测的一般原则,. 筛查性试验与确诊性试验项目的合理组合一、自身抗体检测的,.,95%,99%,可排除,SLE,（） SLE,治疗缓解,病情特重（大量,IC,沉积消耗抗体）,（）,低滴度 常见于,RA,等其它自身免疫性疾病,高滴度可作为诊断,SLE,的依据,ENA,抗体谱检测,（）,不能排除,抗,dsDNA,、,Sm,、,rib,抗体,（）,可帮助诊断,ANA,初筛,二、实验室方法的选择及结果的确认,. 95%99%可排除SLEAN,.,自身免疫性疾病,ANA,阳性率（%）,SLE,80,100,MCTD,95100,RA,20,40,PSS,8595,PM/DM,3050,SS,7080,溃疡性结肠炎,26,慢性活动性肝炎,3040,其它风湿病,2050,ANA,在自身免疫性疾病中的检出率,.自身免疫性疾病ANA阳性率（%）SLE80100MCTD,.,第六节 自身免疫性,疾病的相关实验检测,在自身免疫病患者体内，因有多种自身抗原的存在，自身抗体的种类也可有交叉重叠现象，故实验中检测出多种自身抗体阳性时还必须结合临床症状进行综合分析。,.第六节 自身免疫性 在自身免疫病患者体内，因有多种自,.,自身抗体免疫球蛋白,II,型及,III,型自身免疫病消耗补体补体 监测病情,一、免疫球蛋白及补体检测及临床意义,.自身抗体免疫球蛋白一、免疫球蛋白及补体检测及临,.,淋巴细胞数量及功能反应患者体内免疫细胞状态,二、淋巴细胞检测及临床意义,.淋巴细胞数量及功能反应患者体内免疫细胞状态二、淋巴细胞检,.,细胞因子介导和调节免疫应答及炎症反应或应用治疗监测病情或指导治疗,三、细胞因子检测及临床意义,. 细胞因子介导和调节免疫应答及炎症反应或应用治疗监,.,CIC,与多种自身免疫病相关,辅助诊断疾病,四、循环免役复合物检测及临床意义,. CIC与多种自身免疫病相关四、循环免役复合物检测及,.,1.,区分自身免疫和自身免疫性疾病？,2.,自身免疫性疾病分为几类？其代表性疾病有哪些？,3.ANA,有哪些种类？它们在,AID,及,SLE,诊断中的价值如何？,4.,自身免疫病的发病机制是什么？,5.,自身免疫性疾病根据超敏反应类型可分为几类，代表性疾病有哪些？,6.,常见的免疫荧光法检测,ANA,的核型有哪些？有何临床意义？,7.,抗,ENA,抗体谱的可检测自身抗体项目包括哪些？有何临床意义？,8.SLE,和,RA,诊断的筛查试验和确诊试验分别是什么？,9.,小血管炎相关的自身抗体和自身免疫性肝病相关自身抗体检测项目分别有哪些？,10.,自身免疫性疾病的实验室诊断指标有哪些？,思考题,.1.区分自身免疫和自身免疫性疾病？思考题,.,自身免疫性疾病是自身免疫应答引起的疾病，其体内产生针对自身成份的自身抗体或自身反应性,T,淋巴细胞。自身抗体是自身免疫性疾病诊断的重要标志。,IIF,检测的,ANA,结果及其荧光模型在自身免疫性疾病的临床诊断与鉴别诊断中是重要的筛选试验，抗,dsDNA,抗体是,SLE,患者的特征性标志抗体。抗,Sm,抗体是,SLE,的血清标志抗体；高滴度的抗,RNP,抗体是诊断,MCTD,的重要血清学依据；抗,SSA/Ro,抗体和抗,SSB/La,抗体与干燥综合症密切相关；抗,Jo-1,抗体常见于多发性肌炎；抗,Scl-70,抗体几乎仅见于进行性系统性硬皮病。其他疾病相关的自身抗体还有：与小血管炎相关的抗中性粒细胞胞浆抗体、抗磷脂抗体；与,RA,相关的,RF,、抗角蛋白抗体、抗环瓜氨酸肽抗体；与自身免疫性肝病相关的抗平滑肌抗体、抗线粒体抗体等。,小 结,. 自身免疫性疾病是自身免疫应答引起的疾病，其体内,