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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,内容目录,一、真菌感染概,一、真菌感染概述,二、真菌与,葡聚糖,三、鲎试验与,G,试验,四、,G,试验,临床意义,五、,“,生物探针,”,介绍,六、,“,生物探针,”,操作流程,七、,“,生物探针,”,的临床比对,八、,G,试验的影响因素,内容目录一、真菌感染概一、真菌感染概述,1,湛江安度斯生物有限公司是查尔斯河公司设在中国的子公司，是中国细菌内毒素检测试剂的最大供应商，也是中国细菌内毒素检测领域的技术领导者和创新先锋；,世界著名的美洲鲎试剂（LAL）生产企业美国CR恩度斯弗公司（Charles River Endosafe, Inc.），也是查尔斯河实验室公司的子公司,湛江安度斯的简介,湛江安度斯生物有限公司是查尔斯河公司设在中国的子公司，是中国,2,Charles River Laboratories,作为全球最大的实验动物公司，Charles River Laboratories一直是全球实验动物商业化繁育和市场供应的领导者，拥有分布在北美、欧洲和日本的15个分设施和遍布全球的销售网络；,已成为一个生物医学前临床产品和服务的主要供应商。,Charles River Laboratories作为全球,3,库珀博士,C R Endosafe（恩度斯弗） 公司是美国著名三大鲎试剂企业之一,有国际知名权威学者詹母斯 弗.库珀博士(Dr. Jammes F.Cooper)创建。库珀博士是细菌内毒素检查研究领域的先驱。1971年他与Lein 及 Banger等人提出以鲎实验法检查热源，并率先证明了鲎实验法作为注射药品热源检查的敏感方法的价值。1972年他协助美国(The parentral Drug Association) 的鲎试剂.他一直主持着美国非经肠道药物协会(The parenteral Drug Associatoin)的鲎实验应用促进工作,以及每年一届的美国南卡罗纳州查尔顿的鲎实验学术会议。,库珀博士C R Endosafe（恩度斯弗） 公司是美国著名,4,库珀博士创建的 Endosafe 公司现以成为美国鲎试剂(LAL)市场最大的供应商.该公司的鲎试剂以其良好的稳定性,广泛的适用性以及优越的抗干扰性能享誉国际医药工业界.,库珀博士创建的 Endosafe 公司现以成为美国鲎试剂(L,5,一、真菌感染概述,真菌感染 ：,真菌感染在通常情况下我们最常见的是表皮的感染，例如头癣、体癣、甲癣等，由于侵犯的部位大都表浅，不会导致严重问题，因而叫浅部真菌感染；,深部真菌感染则是真菌突破人体天然屏障导致组织脏器的感染。,6,一、真菌感染概述真菌感染 ：6,6,美国死于感染性疾病的十大原因,820,围产期,828,真菌,10,1053,胃肠道,1305,围产期,9,1259,结核,1277,肝胆管,8,2370,真菌,1377,胃肠道,7,4596,肝胆管,1402,细菌性脑膜炎,6,5577,心脏,2333,肺结核,5,13, 413,肾脏,/,泌尿道,2486,心脏,4,16, 524,HIV/AIDS,8006,肾脏,/,泌尿道,3,22, 396,败血症,9438,败血症,2,87,181,呼吸道,56, 966,呼吸道,1,死亡人数,感染类型,死亡人数,感染类型,1997,1980,真菌感染的死亡率上升了,3.4,倍,（死亡率：,0.72.4 /100,000,）,7,美国死于感染性疾病的十大原因820围产期828真菌10105,7,EORTC/MSG原称侵袭性真菌感染（IFI），修订后改称IFD；,是指真菌侵入人体，在组织、器官或血液中生长、繁殖，并导致炎症反应及组织损伤的疾病。,是真菌感染致死的重要原因,侵袭性真菌病,(Invasive Fungal Disease ,IFD),8,EORTC/MSG原称侵袭性真菌感染（IFI），修订后改称I,8,侵袭性真菌病已变得越来越常见,9,侵袭性真菌病已变得越来越常见9,9,侵袭性真菌感染的诊断标准,G,试验可作为拟诊病例的微生物学标志,10,侵袭性真菌感染的诊断标准G试验可作为拟诊病例的微生物学标志1,10,主要可引发侵袭性真菌病的疾病,肿瘤类：,胃癌，肝癌，肝内胆管癌，肺癌，多发性骨髓瘤，白血病，恶性淋巴瘤,11,主要可引发侵袭性真菌病的疾病肿瘤类：11,11,二、真菌与,葡聚糖,2024/8/29,12,1.,某些真菌的细胞壁结构,二、真菌与葡聚糖2023/9/4121. 某些真菌的细胞壁,12,2. 细胞壁含有,葡聚糖组分的真菌：（1）是导致侵袭性真菌病(IFD)的常见真菌。（2）细胞壁有葡聚糖组分,2024/8/29,13,2. 细胞壁含有葡聚糖组分的真菌：（1）是导致侵袭性真菌,13,这类真菌有：念珠菌曲霉菌耶氏肺孢菌镰刀酶隐球菌,接合菌,.,2024/8/29,14,这类真菌有：念珠菌曲霉菌耶氏肺孢菌镰刀酶隐球菌20,14,北京,301,医院尸检结果,（,77,97,年）,肺真菌病发生率,3.7,(38/1027 ),隐球菌病、接合菌病占真菌病比例不高,15,北京301医院尸检结果（7797年）隐球菌病、接合菌病占真,15,当人体深部受这类真菌感染时，真菌在代谢过程会不断释放出,葡聚糖。检查患者的血液（血浆或血清），会发现葡聚糖含量明显高于非感染者。因此，葡聚糖可作为具有这种细胞结构的真菌感染标识物。,2024/8/29,16,当人体深部受这类真菌感染时，真菌在代谢过程会不断释,16,三、鲎试验与G试验,1. 鲎（Hu，后）试验,2024/8/29,17,三、鲎试验与G试验1. 鲎（Hu，后）试验2023/9/4,17,鲎是地球上最古老的海洋生物之一，已有三亿多年的历史，人们称它为“活化石”。,雌,雄,2024/8/29,18,鲎是地球上最古老的海洋生物之一，已有三亿多年的历史，,18,研究发现，鲎的循环细胞（阿米巴细胞）中含有一种特殊的凝固酶原。这种凝固酶原可以被自然界广泛存在的两种物质激活为凝固酶，从而导致一系列的生化反应。这两种物质就是脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)和(1-3)-,-D葡聚糖。,2024/8/29,19,研究发现，鲎的循环细胞（阿米巴细胞）中含有一种特,19,人们利用鲎的阿米巴细胞溶胞物制备成了鲎试剂（,LAL,或,TAL,）。通常称使用鲎试剂检测脂多糖（,LPS,）或,-,葡聚糖（,-G,）的试验为鲎试验（,LAL Test or TAL,Test,）。,2024/8/29,20,人们利用鲎的阿米巴细胞溶胞物制备成了鲎试剂（LAL或T,20,2.,鲎试验反应机理,21,2. 鲎试验反应机理21,21,3. 鲎试验的应用,应用I：细菌内毒素检查,(Bacterial Endotoxin Test, BET),2024/8/29,22,3. 鲎试验的应用应用I：细菌内毒素检查2023/9/422,22,研究发现，革兰氏阴性细菌的细胞壁都含有一种叫内毒素(Endotoxin)的组分。,2024/8/29,23,研究发现，革兰氏阴性细菌的细胞壁都含有一种叫内毒,23,内毒素是能够引起哺乳动物原反应的主要热原物质。,革兰氏阴性细菌在新陈代谢过程不断地向环境释放内毒素，污染药品和医疗器械。因此注射药品和医疗器械都要求必须作细菌内毒素检查（,BET,）。,2024/8/29,24,内毒素是能够引起哺乳动物原反应的主要热原物质。2,24,应用II：革兰氏阴性菌脂多糖检测,2024/8/29,25,应用II：革兰氏阴性菌脂多糖检测2023/9/425,25,细菌内毒素的化学成分是脂多糖。当人体深部感染革兰氏阴性菌时，细菌会在体内不断释放内毒素（脂多糖）。检查患者的血液（血浆）、腹水、尿液及脑脊液，会发现脂多糖明显高于非感染者。,脂多糖检测对败血症、严重器官衰竭的快速辅助诊断有临床价值。,2024/8/29,26,细菌内毒素的化学成分是脂多糖。当人体深部感染,26,应用III：真菌(1-3)-,-D葡聚糖,检测,2024/8/29,27,应用III：真菌(1-3)-D葡聚糖检测2023/9/,27,医学上通常把用于检测真菌,葡聚糖的鲎试验称为G试验。这是取葡聚糖的英文名称Glucan的首字母来命名该试验。,2024/8/29,28,医学上通常把用于检测真菌葡聚糖的鲎试验称为G试验,28,需要指出的是，隐球菌的细胞壁虽然有,葡聚糖组分，在隐球菌感染患者的血液中却检测不出葡聚糖异常。这可能与隐球菌具有特殊的细胞被膜有关。因此G试验不适合对隐球菌感染的检测。,2024/8/29,29,需要指出的是，隐球菌的细胞壁虽然有葡聚糖组分，在,29,四、,G,试验,临床意义,30,四、G试验临床意义30,30,G,试验的临床意义,31,G试验的临床意义31,31,G,试验的临床意义,32,G试验的临床意义32,32,33,33,33,34,34,34,G,试验应用科室,35,G试验应用科室35,35,五、,“,生物探针,”,介绍,36,五、“生物探针”介绍36,36,“,生物探针,”,介绍,37,“生物探针”介绍37,37,“,生物探针,”,介绍,38,“生物探针”介绍38,38,“,生物探针,”,介绍,39,“生物探针”介绍39,39,“,生物探针,”,介绍,40,“生物探针”介绍40,40,“,生物探针,”,功能,快速定量的临床检测方法，帮助临床医生早期诊断目前常规方法难以判断的侵袭性真菌感染、革兰氏阴性菌感染，便于对感染的早期诊断、早期治疗及对治疗的疗效判定。,可检测标本 ：,血浆、血清、尿液、腹水、脑脊液等,41,“生物探针”功能快速定量的临床检测方法，帮助临床医生早期诊断,41,六、,“,生物探针,”,操作流程,42,六、“生物探针”操作流程42,42,“,生物探针,”,操作流程,43,“生物探针”操作流程43,43,“,生物探针,”,操作流程,44,“生物探针”操作流程44,44,“,生物探针,”,操作流程,45,“生物探针”操作流程45,45,“,生物探针,”,操作流程,46,“生物探针”操作流程46,46,“,生物探针,”,操作流程,47,“生物探针”操作流程47,47,“,生物探针,”,操作流程,48,“生物探针”操作流程48,48,“,生物探针,”,操作流程,49,“生物探针”操作流程49,49,“,生物探针,”,操作流程,数据可接入,LIS,系统等,50,“生物探针”操作流程数据可接入LIS系统等50,50,侵袭性真菌感染的临床检测方法对比,方法,特点,传统,检查,直接培养真菌法,敏感性低，耗时长, 培养阳性率低。培养结果是定性的，有些标本采集困难,辅助方法：临床表现，免疫学，病理学，影像学检查等。,观察期不确定，费时费力，特征性不明显并对医师的专业水平要求高。,非传统,检查,1.G实验：通过检测(1-3)-D-葡聚糖的含量，判断是否有真菌感染。,耗时短，灵敏度高，特异性强，无创、定量检测可判断感染严重程度,2.GM实验：曲霉属半乳甘露聚糖抗原检测。判断是否曲霉属真菌感染。,检测曲霉菌感染。,3.PCR技术：真菌的抗原、抗体及代谢产物的血清学检查和真菌核酸检测。,用于实验室检测，已成为这一领域研究的热点。,51,侵袭性真菌感染的临床检测方法对比方法特点传统直接培养真菌法敏,51,产品特点,灵敏度高,快速,检测方法严谨,准确性高,特异性好,临床符合率高,52,产品特点灵敏度高特异性好临床符合率高52,52,七、,“,生物探针,”,的临床比对,试剂,标准品,-G试剂,LPS试剂,安度斯,安度斯,-G标准品,500pg/ml,/,/,无反应,(4500秒),LPS标准品,1.0EU/ml,无反应,(4500秒),/,/,试剂阴性,阴性,(4500秒),/,阴性,(4500秒),/,J,厂家的,-G,试剂、,LPS,试剂,均无特异性,53,七、“生物探针”的临床比对 -G试剂,53,最低检测限最低浓度重复性,厂商安度斯最低检测限10pg/ml,编号检测结果(pg/ml)阴性(pg/ml),检测日期,110.3,1.3,3.6,210.1,311.0,49.8,59.8,610.8,710.1,810.0,99.6,1010.3,CV,=,6.85%,1110.0,129.8,1310.7,149.8,1512.4,1610.3,179.7,189.6,199.4,209.9,219.6,最低检测限最低浓度重复性厂商安度斯最低检测限10pg/,54,测试次数,样本类型,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,CV,阳性,（高值）,858.8,870.1,834.1,856,826.1,896.3,902.3,831.4,826.1,936.2,4.34%,灰区,（中值）,168.9,185.5,153.8,147.1,153.8,142.8,145.3,155.8,145.7,146.7,8.59%,阴性,（低值）,37.7,38.7,36.5,37.9,37.2,43.4,41.6,39.1,44.2,44.4,7.59%,批内精密度,测试次数12345678910CV阳性（高值）858.887,55,测试次数,样本类型,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,CV,阳性,（高值）,971.9,836.8,995.8,800.1,881.6,887.5,847.7,911.4,856,887.5,6.4%,灰区,（中值）,129,124.6,114,109.8,104.3,125.2,132.1,142.1,156.1,166.9,14.5%,阴性,（低值）,39.1,31.7,34.7,27.3,33.6,38.2,37.8,37.9,40.9,40.1,11.2%,批间精密度,12345678910CV阳性（高值）971.9836.89,56,“,生物探针,”,的临床比对,评价结论：安度斯产品的综合性能具有明显优势。,57,“生物探针”的临床比对评价结论：安度斯产品的综合性能具有明显,57,八、G试验的影响因素,2024/8/29,58,八、G试验的影响因素2023/9/458,58,1. 检测试剂的灵敏度,1.1 葡聚糖的量值与标准品,2024/8/29,59,1. 检测试剂的灵敏度2023/9/459,59,2024/8/29,60,目前,G,试验中,葡聚糖采用的单位为重量单位“,pg,”。,pg,是一个非常非常微量的单位。因此,G,试验是一项非常灵敏的生物检测。当然，越是灵敏精确的检测，越容易受到干扰。,2023/9/460 目前G试验中葡聚糖,60,目前,葡聚糖没有公认的标准物质！,没有国际标准品，没有国家标准品，也没有公认的行业标准品，只有企业的标准品（质控品）,2024/8/29,61,目前葡聚糖没有公认的标准物质！2023/9/461,61,各企业的,葡聚糖标准品的来源不一。有的来自茯苓多糖，有的来自香菇多糖，有的来自海藻多糖。不同来源的葡聚糖对鲎试剂的活性不同。,各企业的葡聚糖标准品效价不一。你的1pg可能相当我的10pg。相互之间无可比性。,2024/8/29,62,各企业的葡聚糖标准品的来源不一。有的来自茯苓多糖，有的来自,62,无统一的标准品导致不同厂家试剂盒有不同的参考值。有的是,10pg为阳性，有的是100pg为阳性。,对参考值的表示各厂家也有所不同。有的以全血含量来表示，有的以检测浓度来表示。,2024/8/29,63,无统一的标准品导致不同厂家试剂盒有不同的参考值。有的是10,63,1.2 试验器具对G试验有重要的影响！,葡聚糖是自然界广泛存在的一种物质，极容易污染到试验器具。,葡聚糖是一种非常稳定的物质，通常的蒸煮高压、辐照等灭菌手段不能彻底破坏葡聚糖。很难找到真正意义的无葡聚糖的器具。,2024/8/29,64,1.2 试验器具对G试验有重要的影响！2023/9/464,64,G试验使用到的实验器具：,采血针,采血管（瓶）,反应试管,移液器具（吸头）,最主要的污染来自采血管！,2024/8/29,65,G试验使用到的实验器具：2023/9/465,65,重要建议,最好使用厂家供应的专用采血管（瓶）,其次是用经厂家检测合格的采血管,不能使用未经检测的实验器具,2024/8/29,66,重要建议2023/9/466,66,尊重科学，为患者负责！,无效试验是对患者最大的危害！,2024/8/29,67,尊重科学，为患者负责！2023/9/467,67,2.,试剂的生物特异性 如前所述，G试验的检测试验就是鲎试剂。鲎试剂可以对两种物质反应，用于不同的用途。如下图表示。,检测内毒素/脂多糖 用于革兰氏阴性菌检测鲎试剂 检测,葡聚糖（G试验） 用于真菌检测,2024/8/29,68,2.试剂的生物特异性 如前所述，G试验的检测试验就是,68,在检测试剂制备上，应根据试剂的用途制备生物特异性强的检测试剂，如：,用于检测细菌脂多糖的试剂，不能对,葡聚糖产生反应。,用于检测真菌葡聚糖的试剂，不能对脂多糖产生反应。,2024/8/29,69,在检测试剂制备上，应根据试剂的用途制备生物特异性强的,69,遗憾的是，由于技术的原因，并不是所有厂家的试剂都具有生物特异性。,有的试剂盒对LPS和-G都反应。,有的试剂盒对非检测对象低浓度时可能不反应，较高浓度时会反应。,无生物特异性的试剂盒不能区分细菌感染和真菌感染，不具有临床检测价值！,2024/8/29,70,遗憾的是，由于技术的原因，并不是所有厂家的试剂都具有生,70,2024/8/29,71,鉴别试剂盒是否具有生物特异性的方法：,用该试剂盒与,LPS/,-G,的标准品（质控品）反应。,2023/9/471 鉴别试剂盒是否具有生物特异性,71,3. 某些药物对G试验的影响,3.1,临床应用发现，注射过香菇多糖注射液的供试者作G试验，其血液中,葡聚糖含量会显著增高。因此需要作G试验的供试者应在24小时内避免使用香菇多糖注射液。,2024/8/29,72,3. 某些药物对G试验的影响2023/9/472,72,3.2,临床应用发现，使用过脂肪乳的供试者作G试验（包括作LPS检测），反应曲线形态会发生异常，致使检测值非常高,。因此需要作G试验的供试者应在24小时内避免使用脂肪乳。,2024/8/29,73,3.2 临床应用发现，使用过脂肪乳的供试者作G试验（包括作L,73,-G检测的正常反应曲线,2024/8/29,74,100,pg/mL,500,pg/mL,5000,pg/mL,正常人,3.3,正常反应曲线与异常反应曲线的比较,-G检测的正常反应曲线2023/9/474100 pg/m,74,-G检测的异常反应曲线,2024/8/29,75,61000 pg/mL,达限时间,250,-G检测的异常反应曲线2023/9/47561000 pg,75,LPS检测的正常反应曲线,2024/8/29,76,0.05EU/mL,0.25EU/mL,2.5 EU/mL,正常人,LPS检测的正常反应曲线2023/9/4760.05EU/m,76,LPS检测的异常反应曲线,2024/8/29,77,LPS检测的异常反应曲线2023/9/477,77,
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